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ATIVIDADE: PERGUNTAS SOBRE EXTRAÇÃO E PURIFICAÇÃO DE DNA E RNA 1) Em 1940, Chargaff e colaboradores trouxeram informações importantes a respeito da proporção de bases nitrogenadas que compõem o DNA. Eles concluíram que o número de resíduos de guanina é igual ao de citosina (G = C), e que o de adenosina é igual ao de timidina (A = T). A partir dessa informação e de outros estudos de Chargaff e colaboradores, pode-se concluir que: a) a proporção de resíduos de guanina e citosina é diferente; b) a composição das bases nitrogenadas que formam o DNA é igual; c) a soma do número de bases pirimidinas é igual à de bases purinas (G + A = T + C). 2) O genoma humano tem 22 cromossomos não sexuais e 2 sexuais. Sabendo que cada célula de linhagem não germinativa tem duas cópias de cromossomos não sexuais, o número total de cromossomos não sexuais presentes nessas células será: a) 46; b) 44; c) 43 3) Os ácidos nucleicos apresentam características moleculares específicas, como carga negativa em pH neutro, que possibilita o isolamento e a utilização dessas moléculas em diversas aplicações. Sobre a prática de isolamento do DNA ou RNA, assinale a alternativa correta. a) É dividida em três etapas: lise das membranas celulares → quebra das ligações dissulfeto → lavagens consecutivas dos ácidos nucleicos pós-separação; b) É dividida em quatro etapas consecutivas: lavagens → lise das membranas celulares → ligação à coluna de sílica → eluição; c) É dividida em quatro etapas consecutivas: lise ou rompimento das membranas celulares → ligação à coluna de sílica → lavagens → eluição 4) O primeiro passo do método de extração e purificação do DNA ou RNA envolve a lise ou rompimento das membranas com soluções detergentes ou, até mesmo, uso de temperaturas elevadas. O passo seguinte é o isolamento das macromoléculas de ácidos nucleicos dos outros componentes celulares. Com base na leitura do Sumário Teórico e na prática realizada, em qual etapa é possível a visualização do DNA ou do RNA a “olho nu”? a) Durante a etapa de adição de solventes orgânicos (fenol-clorofórmio); b) Durante a etapa de adição de agentes que vão desnaturar as proteínas; c) Durante a etapa de precipitação do DNA ou do RNA com álcoois e/ou sais. 5) O protocolo de extração e purificação de DNA ou RNA é dividido em etapas. Em cada etapa, utilizam-se reagentes específicos com determinadas finalidades, como no caso da proteinase K, uma enzima que inativa e desnatura proteínas associadas ao DNA ou que podem degradá-lo. Você está na etapa 1 do protocolo de extração e purificação do DNA de uma amostra e optou por utilizar um kit comercial. Com base no que você aprendeu nesta prática, qual a finalidade dessa etapa? a) Precipitar o DNA; b) Lisar ou romper as membranas celulares; c) Retirar os sais contaminantes das amostras de DNA.