9a-MICRONÚCLEO EM CÉLULAS DE CEBOLA

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Organizadores: 
Professores: Monica L. Blauth; Fábio R. P. de Souza; Juliana Cordeiro 
Acadêmicos: Daniele S. Souza, João H. F. de Oliveira, Carolina Pedriger 
 
Inst ituto de Biologia – UFPel 
Departamento de Eco logia, 
Zoolog ia e Genét ica 
MICRONÚCLEO EM CÉLULAS DE CEBOLA /CITOGENÉTICA 
 
 
Micronúcleos são núcleos pequenos que se formam por cromossomos acêntricos ou mesmo inteiros que 
não migram corretamente para os polos durante a anáfase. Estes cromossomos ou fragmentos 
cromossômicos são englobados por membrana formando os micronúcleos (Figura 8.1). A presença de 
grande quantidade de micronúcleos nas células, de forma recorrente, pode estar associada a eventos 
mutagênicos ou ser uma evidência de processo carcinogênico, onde células com erro não sofrem apoptose 
e permanecem em divisão. 
 
As células das raízes de cebola podem ser usadas para realização e testes mutagênicos. O procedimento 
do teste consiste em colocar as raízes de cebolas para crescer em água que será testada (ex: rio, lagoa, 
córrego) ou em solução de um material que será testado (corante, medicamento, chá, solvente). No 
segundo caso, as concentrações das diluições devem ser observadas nas análises e, considere que altas 
concentrações podem levar a morte celular e à ausência de crescimento das raízes. 
 
Protocolo de preparo de lâmina de micronúcleo 
Material e métodos 
 
Materiais 
- recipientes plásticos ou de vidro 
(preferencialmente que comportem o 
mesmo volume da água) 
- bisturi ou lâmina tipo gilete 
- lâminas e lamínulas 
- agulha 
- microscópio óptico 
Reagentes 
- água destilada, preferencialmente autoclavada 
- fixador (etanol: ácido acético) 
- paracetamol 
- HCl 5N 
- orceína acética (1% orceína, diluído em ácido 
acético 45%, diluído durante aquecimento)
 
 
 
Procedimentos 
1. Coloque as cebolas na água em diferentes concentrações de paracetamol, e deixe até que as raízes 
cresçam. O ideal é que o procedimento seja feito com cebolas de feira orgânicas. Faça um controle 
negativo (apenas água sem a substância teste ou com água destilada autoclavada) e um controle 
positivo (800 mg/l paracetamol). 
2. Quando as raízes atingirem aproximadamente 2 cm, corte-as e coloque-as no fixador. Anote as 
cebolas que não cresceram raizes, pois isso pode ser informativo. As raízes fixadas podem ser 
armazenadas na geladeira por meses. 
3. Para retirar o fixador, coloque as raízes em água destilada por 5 min em temperatura ambiente; 
4. Retire-as da água e coloque-as em HCl 5N por 15 min; 
5. Lave-as com água destilada; 
6. Coloca uma raiz sobre a lâmina de microscópio, retire a coifa (extremidade da ponta) e, com 
agulhas, fragmente o máximo possível o material; 
7. Pingue uma gota de orceína acética, e coloque a lamínula; 
8. Coloque papel filtro e, com a traseira de uma caneta, realize o esmagamento sem quebrar a 
lamínula, visando o espalhamento das células e retirada do excesso de corante; 
9. Observe as células em microscópio óptico, iniciando com aumento de 10x, e depois 40x. 
Conte as células com e sem micronúcleos que foram avistadas. 
10. A contagem é importante para a comparação estatística com os controles negativo e positivo, que 
pode ser feito pelo teste estatístico T, quando houverem réplicas. Alguns trabalhos são feitos com 
a visualização de 1000 células por bulbo.