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F A R M Á C I A – 6º PERÍODO – Definição: Conjunto de substâncias capazes de promover o crescimento bacteriano em condições de laboratório Se apresentam comercialmente, na forma liofilizada, ou seja, desidratados e dessa forma podem sofrer alterações com excesso de umidade, calor e luz. Classificação: Quanto ao conteúdo Meio sintético ou definido: É aquele que a sua composição química é conhecida. Ex: EMB, Mac Conkey, MuellerHinton, Thayer- Martin. Meio não sintético ou Complexo: Aqueles em que há uma base química conhecida com a adição de uma substância natural de grande valor nutritivo que não se tem conhecimento da sua composição. Ex: Ágar sangue, Ágar chocolate. 5 a 10% Sangue de carneiro, cavalo e coelho Ágar sangue: Eritrócitos íntegros Ágar chocolate: Aquecimento do Ágar sangue a 50ºC onde ocorre a ruptura das hemácias com a liberação de hemina e hematina.. Quanto ao estado físico: Relação direta com a concentração de ágar no meio de cultura. Líquidos: Não possui ágar na composição, função de crescimento indiscriminado de bactérias e são observadas pela turvação; Sólidos: 1,0 a 1,5% de ágar, principal objetivo é a observação de colônias isoladas para realizar identificação bioquímica e antibiograma; Semi–sólidos: 0,05 a 0,5% de ágar (função de observação de motilidade). Quanto à sua utilização em laboratório: Meio Enriquecido: Meios com base química e substância de alto valor nutritivo. Ex: Ágar Sangue, Ágar Chocolate, Lowenstein Jensen; Meio de Enriquecimento: Facilitam a multiplicação indiscriminadas de bactérias, normalmente são meios líquidos. Ex: BHI, Soja tripticaseína, Selenito,Tioglicolato; Meio Seletivo: Possuem corantes, sais, antibióticos que inibem o crescimento de uma população de microorganismos facilitando o crescimento de outras. Ex. EMB, Mac Conkey, Ágar, Manitol Salgado, Thayer- Martin; Meio Diferencial: Possuem na sua composição carboidrato, tiossulfato e aminoácidos. que pode diferenciar uma população de organismo de outra. Ex: EMB, Mac Conkey, Ágar Manitol Salgado, TCBS; Meio Indicador: Usados para identificação bioquímica e fisiológica a bactéria. Ex: TSI, Citrato de Simmons, Fenilalanina, Lisina, SIM; Meio de Transporte: Apresentam na sua formulação substâncias redutoras como tioglicolato e cistina e poder de tamponamento acetato e fosfato. Ex: Cary Blair, Stuart; Meio de Manutenção: Aquele que mantem a bactéria por um tempo pronlongado na fase estacionária. Ágar Nutriente, Meio de Leite. Seleção de meios de cultura De início é condicionada à microbiota normalmente patogênica para este local (Tipo de agente infeccioso); Preparação dos meios de cultura 1. Pesagem: Tem que ter cuidado com excesso de umidade, calor e luz. a. A pesagem deve ser rápida e precisa para não alterar a consistência do meio de cultura. F A R M Á C I A – 6º PERÍODO b. Após realizar o cálculo do volume e ir para a pesagem com um balão duas vezes a capacidade do preparado; 2. Hidratação: a. Precisa ser uma água de qualidade 3. Fusão; a. Meio com presença de ágar b. Qualquer fonte de calor (bico de busen, micro-ondas, banho maria, entre outros) c. Tempo é de acordo com o volume preparado 4. Distribuição nos tubos; 5. Autoclavação a. (121˚C / 15΄) – Indicador biológico: Geobacillus stearothermophilus (ATCC 7953) 6. Verificação do pH; a. Meio de cultura na temperatura de 20ºC b. Phmetro e fitas 7. Distribuição nas Placas; a. Realizar descontaminação nas bancadas com álcool iodado b. Aquecimento com bico de Busen 8. Teste de Esterilidade: a. Em estufa a 35 a 37ºC/24 a 48 horas; 9. Estocagem (2 a 8ºC); 10. Controle de Qualidade. Garantia de qualidade dos meios de cultura Registrar quantidade de meio preparado, número de lote, método de esterilização, data do preparo, pH, validade e técnico responsável pela preparação; Fazer teste de esterilidade e desempenho; Observar o meio quanto a cor, consistência, profundidade, presença de bolhas e contaminação; Documentar os meios que não estão de acordo com os padrões, as ações corretivas e informar ao responsável. Fatores que interferem no desempenho dos meios preparados Aquecimento excessivo do meio básico; Uso de sangue de carneiro com mais de cinco dias após a coleta; Adicionar sangue ao meio em temperatura superior a 50ºC; Estocagem em temperatura inadequada; Guardar na geladeira placas de meios ainda quentes; Espessura do meio inadequada; Estocar placas em embalagens abertas ou de maneira imprópria.
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