Prática - Preparo de meios de cultura - Microbiologia

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Prática 3 - Preparo de meios de cultura
● Meios de cultura: são um conjunto de substâncias que fornecem as condições
necessárias para promover o crescimento de microrganismos. Existem diversos
meios de cultura com variadas finalidades.
● Classificações dos meios de cultura:
1) Quanto ao estado: depende da quantidade de ágar presente no meio.
- Meio sólido: Ágar MacConkey
- Meio semi sólido: Ágar SIM
- Meio líquido: Caldo Mueller Hinton
2) Quanto a constituição:
a. Complexo: como o ágar sangue, em que muitos tipos de base de ágar-sangue são
utilizados em laboratórios clínicas. Os meios contém dois componentes primários,
sendo um meio básico (por exemplo o meio base Mueller Hinton, soja tríptica,
infusão de cérebro e coração, base Brucella) e o sangue (como o de carneiro, cavalo
ou coelho), na concentração de 5%. Nesse meio, as hemácias se encontram
intactas porque o sangue não foi aquecido.
b. Enriquecido: este consiste em ágar-sangue modificado, ou seja, quando o sangue
ou a hemoglobina são adicionados ao meio básico aquecido, o meio torna-se
marrom. Este permite o crescimento da maioria das bactérias, incluindo algumas
que não são capazes de crescer em ágar-sangue (por exemplo Haemophilus,
algumas cepas patogênicas de Neisseria). Nesse meio as hemácias se encontram
destruídas devido ao aquecimento.
c. Simples: como a água peptonada, que é muito utilizada em testes bioquímicos,
especialmente na indústria alimentícia, sendo um meio de cultura indicado para
cultivo de microrganismos não-fastidiosos e que se caracteriza por proporcionar um
crescimento mínimo, permitindo que todas as bactérias presentes em uma
determinada amostra se manifestem completamente.
3) Quanto à finalidade:
a. Meio seletivo: como o Ágar EMB, seletivo para bactérias gram negativas pois
contém os corantes eosina Y e Azul de metileno em sua composição, os quais
inibem bactérias gram positivas. Esse meio também é diferencial para a fermentação
de lactose e/ou sacarose.
b. Meio diferencial: como o Ágar sangue, em que a diferenciação se dá através do
padrão de hemólise, em que beta corresponde ao total, alfa a parcial e gama
ausência. Este meio é não-seletivo.
c. Meio de contagem: como o Plate Count Ágar (PCA), que consiste em um meio de
crescimento microbiológico usado para avaliar ou monitorar o crescimento
bacteriano total ou viável de uma amostra. Geralmente utilizado para testar
amostras de leite, água e outros produtos para investigação sanitária.
d. Meio de conservação: como o Meio Stuart, sendo este utilizado no caso da não
realização da cultura logo após a coleta, sem o intuito de manter estável a
população microbiana da amostra.
e. Identificação: como o Ágar-uréia, que faz a identificação bioquímica através da
diferenciação baseada na capacidade de produção de urease. A produção de
urease leva a uma produção de amônia, levando à um aumento do pH para um pH
alcalino, consequentemente existe uma mudança de cor da amostra devido a
presença do indicador de pH vermelho de fenol. A cor amarela indica o resultado
negativo e a dor rosa o resultado positivo para produção de urease.
● Cálculo para o preparo do meio de cultura: cada placa de petri comporta
aproximadamente 20mL de meio de cultura.
● Etapas de preparação do meio de cultura:
1) Pesagem: a quantidade de pó necessária.
2) Dissolução - os meios precisam ser levados ao microondas, pois não é
possível a total dissolução à frio. Deve ser aquecido sem ferver até que o
meio fique translúcido. Os meios líquidos que não possuem Ágar não
precisam ser levados ao microondas para serem aquecidos.
3) Esterilização - os materiais devem ser embalados em papel crepado e fita
zebrada para serem levados ao autoclave.
4) Distribuição em placas e tubos - a distribuição deve ser feita dentro da capela
ou atrás da chamada para manter esterilização, a parte externa deve ser
esterilizada com álcool. Além disso, as placas devem ficar entre-abertas até
o meio esfriar para o ar não condensar. Quando colocados meios sólidos no
tubo devem ser inclinados para obter uma maior área de superfície e os
meios semi sólidos e líquidos devem ser distribuídos na estante.
5) Acondicionamento - em refrigeração
6) Controle de qualidade - os meios devem ser colocados na estufa para
observar se existe algum crescimento microbiano.
alça bacteriológica sobre o meio. A estria pode ser realizada em movimento de zig- zag
(estria sinuosa) ou como uma linha reta sobre o meio (estria reta).
Objetivo: Essa técnica é muito utilizada para visualização de determinadas propriedades
metabólicas, como a produção de enzimas hidrolíticas (hidrólise de substâncias do
meio - gema de ovo, sangue...), e produção de pigmentos.