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Instituto Federal de Educação, Ciência e Tecnologia do Amazonas - Campus Manaus Centro EXERCÍCIO SOBRE REPLICAÇÃO DO DNA 1. Descreva o papel das seguintes enzimas e proteínas durante a replicação do DNA em E. coli: DNA Polimerase I; DNA Polimerase III; Helicase; Primase; DNA ligase; DNA topoisomerase; DNA girase; proteínas SSBs. DNA Polimerase I: Tem função de remover os ribonucleotídeos do iniciador do fragmento de Okazaki adjacente substituindo-os por desoxirribonucleotídeos. DNA Polimerase III: Seu papel é fazer com que os dois filamentos da molécula que foram dissociados tenham diferentes proteínas (diferentes leituras), assim produz DNA somente no sentido 5’ → 3’. Helicase: É responsável pelas quebras dos pareamentos de bases que ocorrem nas pontes do DNA parental. Primase: É responsável por fazer um primer de RNA para que ocorra a replicação do DNA - que é feito somente a partir de uma sequência pré-existente de nucleotídeos. DNA Ligase: Tem função de catalisar (acelerar) a reação da produção de uma ligação fosfodiéster para que ocorra a união dos fragmentos adjacentes de Okazaki DNA topoisomerase: Tem função de deselicoidização da forquilha de replicação (hélice parental) do DNA. Elas se dividem em tipo: I-5’, I-3’ e II e cada uma delas deseliocoidiza uma molécula de DNA. DNA girase: Tem função de quebrar ambos os polinucleotídeos da dupla-hélice em posições adjacentes tornando a molécula geneticamente ativa. Proteínas SSBs: Tem a função de impedir que os dois filamentos do DNA se associem novamente, resultando na forquilha de replicação. 2. Explique por que os primeiros nucleotídeos colocados durante a replicação do DNA são na verdade ribonucleotídeos. A replicação do DNA só pode ser iniciada quando tem um primer (no caso um pedaço de RNA) Ao contrário da RNA Polimerase, a DNA Polimerase III não pode iniciar a síntese de DNA, alguns ribonucleotídeos (entre 6 e 30) tenham sido polimerizados, sobre o molde, a RNA Polimerase, sai, e a polimerização, agora do DNA, é continuada pela DNA Polimerase III. 3. Explique por que a replicação do filamento descontínuo é desse modo. A principal complexidade da replicação do DNA é que os dois filamentos dissociados da molécula original não podem ser tratados do mesmo modo. Isto se deve ao fato de a DNA Polimerase III só pode produzir DNA no sentido 5´→3´, o que significa que os filamentos molde precisam ser lidos no sentido 3´→5´. Para um dos filamentos originais, chamado filamento de replicação contínua, isto não é problema, pois o novo polinucleotídeo pode ser produzido continuamente. o filamento de replicação descontínua tem de ser replicado aos pedaços: uma parte da hélice parental é dissociada e um trecho curto do filamento é replicado, um pouco mais da hélice se dissocia e outro segmento do filamento se replica, e assim por diante. 4. Qual a solução para o problema topológico envolvido na replicação do DNA? A solução é que haja a deselicoidização dos dois polinucleotídeos da hélice parental e sejam separadas também.
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