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ATIVIDADE TÉCNICAS INSTRUMENTAIS 1) Definir espectrofotometria: R: Método analítico baseado em medidas de absorção de radiação eletromagnética que permite identificar e quantificar compostos orgânicos e inorgânicos. 2) Cuidados ao se usar um espectrofotômetro: R: Deve estar em uma bancada estável e exclusiva (se possível), longe de fontes eletromagnéticas (rádio, microondas...). Também é importante ligar 30 min antes do uso, e é fundamental se atentar a qual tipo de cubeta está sendo utilizada e como fazer o manuseio desta. Por fim, há o processo essencial de calibração (“zerar” o equipamento com solução denominada “branco”). 3) Cite os tipos de cubetas e suas aplicações. R: Cubeta de Vidro ou Plástico para Espectrofotometria de Luz Visível; Cubeta de Quartzo para Espectrofotometria de Luz Ultravioleta 4) Quais as unidades (grandezas para medir) usadas na espectrometria? R: mL, nm, µL, ug, mg. 5) Exemplos de aplicações da espectrofotometria em biotec: R: Engenharia genética, Bionanotecnologia, Proteômica, Genômica, Transgenia, Microbiologia, Imunologia, Biologia Celular 6) A calibração do espectrofotômetro é crucial para uma adequada análise. O que significa zerar/calibrar o equipamento? R: Quando um feixe de luz monocromática atravessa uma cubeta de espectrofotômetro, parte da luz sofre refração, reflexão, absorção pelos reagentes e outras interações indesejáveis. Para eliminar tais interferências, de e-se zerar o aparel o com uma soluça o que e denominada “branco”. O branco contém todos os constituintes do sistema, exceto a amostra a ser estudada. A cada conjunto de determinações, bem como após alterar o comprimento de onda, o aparelho deve ser zerado e calibrado com o tubo que contém o branco. 7) Tipos de espectrofotômetros mais usados em lab de biotec: R: Espectrofotômetro UV-Visível, Espectrofotômetro Infravermelho e Espectrofotômetro de absorção atômica 8) Local ideal no lab para se instalar um espectrofotômetro UV-visivel: R: Deve estar em uma bancada estável e exclusiva (se possível), longe de fontes eletromagnéticas (rádio, microondas 9) Cuidados que devemos tomar ao manusear uma cubeta de vidro: R: É muito importante não tocar na superfície óptica da cubeta, pois óleos de sua pele, partículas de tecidos de limpeza, poeira e outros contaminantes podem afetar as leituras. As cubetas também não devem ser secas por aquecimento em uma estufa ou chama porque isso pode provocar danos sicos e ou mudar o camin o o ptico.
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