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ORGANIZAÇÃO DO MATERIAL GENÉTICO Davi Henrique Lima Teixeira Universidade Federal Rural da Amazônia Campus Capitão Poço Genética Conjunto complexo de moléculas capaz de adquirir substâncias, obter e armazenar energia e pôr em prática diversas atividades ❖ Água, sais, açucares, aminoácidos, lipídios, proteínas etc. CÉLULAS E COMPLEXIDADE DE ORGANISMOS ❖ Membranas formadas principalmente por lipídios e proteínas. ❖ Paredes celulares rígidas → bactéria (mureína) e vegetais (celulose). ❑ PROCARIOTOS: Bactérias e Archeas ❖ Unicelular ❖ Cromossomo e plasmídeos: única molécula de DNA circular CÉLULAS E COMPLEXIDADE DE ORGANISMOS ❖ Material genético em contato próximo com os demais componentes da célula (nucleóide) ---------------------------------------------------------------------------------------- ❑ PROCARIOTOS: Bactérias e Archeas Bactérias ❖ Archeas são mais próximas dos eucariotos CÉLULAS E CROMOSSOMOS Archeas ❖ Archeas são extremófilos Archeas ≠ Eubactérias ❖Membranas plasmáticas: archeas (éter) eubactérias (éster) ❖ Bactérias (flagelo) Archeas (arcaelo) CÉLULAS E CROMOSSOMOS ❑ EUCARIOTOS: animais, vegetais, protistas e fungos ❖ DNA nuclear (lineares) e citoplasmático (circulares) ❖ Sistemas complexo de membranas internas ❖ Cromossomo nuclear: DNA + proteínas (histônicas e não histônicas) ❖ Células somáticas são diploides e gametas são haploides CÉLULAS E CROMOSSOMOS ❑ EUCARIOTOS: núcleo celular ❖ Nucleoplasma ou cariolinfa: parte fluida do núcleo rica em proteínas ❖ Cromatina ou nucleoplasma: DNA + histonas (cromossomo descondensado) Membrana Externa Membrana Interna Carioteca Grânulo Complexo de Poros Espaço Perinuclear Camada Cristalina CÉLULAS E CROMOSSOMOS ❑ EUCARIOTOS: membrana nuclear ❖ Membrana nuclear: duas membranas plasmáticas separadas entre 100Å a 150Å ❖ Poros: contato entre o citoplasma e o nucleoplasmas ❖ Ânulos: estrutura circular na borda dos poros formada por 8 grânulos ESTRUTURA DOS CROMOSSOMOS DE EUCARIOTOS DNA NUCLEAR Centrômero Constrição Primária Constrição Secundária (RON) Cromátides irmãs Braço cromossômico Biólogo alemão Walther Flemming (1879) – cromatina (cromossomo descondensado) Waldeyer (1888) – cromossomo = cromatina condensada Biólogo e botânico suíço Karl Wilhelm von Nägeli (1842) CROMOSSOMOS DE EUCARIOTOS CROMATINA ❑ EUCROMATINA ❑ HETEROCROMATINA ❖ porção descondensada dos cromossomos; ❖ maioria dos genes ❖ CONSTITUTIVA – permanentemente condensada; DNA altamente repetitivo (regiões próximas ao centrômero e ao telômero); CROMOSSOMOS DE EUCARIOTOS ❖ FACULTATIVA – cromossomos X Cromossomo descondensado CROMOSSOMOS DE EUCARIOTOS ❑ DNA SATÉLITE (ALTAMENTE REPETITIVO) Figura. Sequência microssatélite GATA/CTAT com nove cópias em tandem. 5’ G A AT ... .. .... C T TA G A AT ... .. .... C T TA G A AT ... .. .... C T TA G A AT ... .. .... C T TA G A AT ... .. .... C T TA 5’3’ 3’ G A AT ... .. .... C T TA G A AT ... .. .... C T TA G A AT ... .. .... C T TA G A AT ... .. .... C T TA Segmento de DNA onde há sequências curtas de pares de base repetidas várias vezes (nº de cópias) Microssatélites: 1pb a 8pb Minissatélites: 9pb a 25pb Satélites: > 25pb < 150pb Satélite A + T DNA Genômico Satélite G+C CROMOSSOMOS DE EUCARIOTOS ❑ HETEROCROMATINA X EUCROMATINA ❖ DNA altamente repetitivo (centrômero) ❖ DNA moderadamente repetitivo (disperso no cromossomo) ❖ DNA sequência única (Braços dos cromossomo) GENES ❑ CONSTRIÇÕES NO CROMOSSOMO CROMOSSOMOS DE EUCARIOTOS ❖ Centrômero (constrição primária) → DNA + Cinetócoro (complexo proteico) - Histona CenH3. Braço Centrômero Telômero ❖ Região organizadora do nucléolo - RON (constrição secundária) → síntese de RNA ribossômico CROMOSSOMOS DE EUCARIOTOS ❑ CLASSIFICAÇÃO DOS CROMOSSOMOS Metacêntrico rb = 1,00 ↔ 1,49 Submetacêntrico rb = 1,50 ↔ 2,99 Acrocêntrico rb > 3,00 Telocêntrico rb → CROMOSSOMOS DE EUCARIOTOS TELÔMEROS Extremidades dos cromossomos ❑ FUNÇÕES: ❖ Proteção das extremidades do cromossomos da ação de desoxirribonucleases. ❖ Impedir a fusão das extremidades com outras moléculas de DNA ❖ Facilitar a replicação das extremidades sem perda de DNA DNA REPETITIVO: 5’T1-4A0-1G1-83’ Vertebrados: 5’TTAGGG3’ CROMOSSOMOS DE EUCARIOTOS ❑ TELÔMEROS Arabdopsis thaliana: 5’TTTAGGG3’ Tetrahymena thermophila: 5’TTGGGG3’ ❖ Células somáticas humanas normais possuem de 500 a 3.000 repetições. Alça ou laço t ❖ Telômero termina com um região de DNA unifilamentar rica em guanina (projeção 3’) que forma pareamentos → Alça t CROMOSSOMOS DE EUCARIOTOS ❑ TELÔMEROS Shelterina Complexo proteico que protege a alça t ❖ Proteínas da Shelterina: TRF1 TRF2 Associadas às sequências repetidas no DNA bifilamentar TPP1 TIN2 Fixam POT1 a TRF1 e TRF2 POT1 Associada às sequências repetidas no DNA unifilamentar Rap1 Regula o comprimento dos telômeros CROMOSSOMOS DE EUCARIOTOS ❑ TELÔMEROS Telômero coberto por Shelterinas CROMOSSOMOS DE EUCARIOTOS ❑ CROMOSSOMO (DURANTE AS DIVISÕES CELULARES) Cada cromossomo possui uma molécula de DNA. Antes das divisões celulares, o DNA é duplicado e o cromossomo apresenta duas cromátides irmãs Organismos Cromossomos Tamanho em milhões de pares de bases Saccharomyces cerevisiae I 0,23 (levedura) IV 1,53 Arabidopsis thaliana 4 18,59 (planta herbácea) 1 30,43 Caenorhabditis elegans III 13,78 (nematódeo) V 29,92 Drosophila melanogaster 4 1,35 (mosca) 3 60,19 Danio rerio 25 38,50 Peixe-zebra 7 77,28 Mus musculus 19 61,43 (camundongo) 1 195,47 TABELA – Sequência de DNA nos menores e nos maiores cromossomos dos eucariotos-modelo CROMOSSOMOS DE EUCARIOTOS Número de cromossomos de algumas espécies Nome comum Nome científico Número de cromossomos nas células somáticas Plantas Melancia Citrulus vulgaris 22 Milho Zea mays 20 Tomate Lycopersicon esculentum 24 Feijão Phaseolus vulgaris 22 Arroz Oryza sativa 24 Trigo Triticum vulgaris 42 Batata Solanum tuberosum 48 Samambaia Ophioglossum reticulatum 1260 Animais Bovinos Bos taurus 60 Suínos Sus scrofa 40 Galinhas Gallus domesticus 78 Cavalo Equus caballus 64 Jumento Equus asinus 62 Homem Homo sapiens 46 Formiga Myrmecia pilosula 2 CROMOSSOMOS DE EUCARIOTOS ❑ ESTADO DIPLÓIDE X ESTADO HAPLÓIDE ❖ Estado diploide: duas cópias de cada cromossomo no núcleo (células somáticas e germinativas) → 2n ❖ Estado haploide: a célula possui apenas uma cópia de cada cromossomo (gametas) → n 2n n n 2n CROMOSSOMOS DE EUCARIOTOS ❑ CROMOSSOMOS HOMÓLOGOS Homólogos (“de acordo com”) Mesma morfologia Mesmos genes Podem ter alelos diferentes MEIOSE Homólogos se associam ❑ Diploides ou poliploides ❑ Quantidade muito maior de DNA do que procariotos Mas nem tanto de GENES (2 a 15 vezes) ❑ O genoma da espécie é distribuído em diferentes cromossomos (uninêmico ou unifilamentar) ❑ Composição química: CROMOSSOMOS DE EUCARIOTOS CONDENSAÇÃO DA CROMATINA ❑ MAIOR CROMOSSOMO HUMANO ❑ 1º ESTÁDIO DE CONDENSAÇÃO ▼ 8500 vezes ❖ 8,5 cm (85000 m) ❖ cromossomos metafásicos –10 m ❖ Formar o nucleossomo ❖ DNA associado a proteínas básicas (histonas H1, H2A, H2B, H3, H4) CONDENSAÇÃO DA CROMATINA ❑ NUCLEOSSOMO DNA HISTONA H1 NÚCLEO 8 HISTONAS: 2 H2A; 2 H2B; 2 H3; 2 H4 ▼7,0 vezes CONDENSAÇÃO DA CROMATINA Histonas: Proteínas básicas (carga elétrica positiva – 20 a 30% arginina e lisina) → H1, H2A, H2B, H3 e H4. DNA associado a núcleos de histonas Proteínas cromossômicas não histônicas: maioria de proteínas ácidas (carga elétrica negativa). Centrômero possui a CenH3 no lugar da H3 CONDENSAÇÃO DA CROMATINA ❑ NUCLEOSSOMO Cerne DNA: 146pb com 1,65 voltas negativas Nucleossomo DNA: 166pb com duas voltas negativas Histona H1 se liga de 20 22pb distante do cerne Ø = 110 Å = 11nm Ø = 110 Å = 11nm -- -- -- -- -- -- -- -- -- -- -- -- -- -- -- -- -- -- -- -- -- -- -- -- -- --- CONDENSAÇÃO DA CROMATINA Proteínas cromossômicas não histônicas se associam ao ligador e algumas ao cerne ❑ 2º ESTÁDIO DE CONDENSAÇÃO ❖ Formação de fibras de cromatina com Ø = 300 Å = 30nm ❖Associação das histonas H1. ❖▼40 vezes CONDENSAÇÃO DA CROMATINA ❑ 2º ESTÁDIO DE CONDENSAÇÃO CONDENSAÇÃO DA CROMATINA Modelo solenoide Modelo zigue- zague Expandida Contraída ❑ 3º ESTÁDIO DE CONDENSAÇÃO CONDENSAÇÃO DA CROMATINA ❖ As fibras de 30nm formação de alças “ancoradas” em um arcabouço proteico. ❖ Cada alça inclui de 20.000 a 30.000pb e mede cerca de 300nm de comprimento (fibras de 300nm de Ø). ALÇAS Arcabouço de proteínas cromossômicas não histônicas 300nm ❑ 3º ESTÁDIO DE CONDENSAÇÃO CONDENSAÇÃO DA CROMATINA ❖ As fibras de 300nm são comprimidas e helicoidizadas (minibandas) para dar a estrutura do cromossomo metafásico. Minibandas (18 alças) Cromossomo metafásico ❑ ESQUELETO PROTEICO DO CROMOSSOMO: CONDENSAÇÃO DA CROMATINA Hélice dupla de DNA Cordão de nucleossomos Solenóide (6 nucleossomos por volta) Alças (50voltas por alça) Minibandas (18 alças) Cromossomo (minibandas empilhadas) Pares base/volta Taxa de condensação Alças DNA Nucleossomo Solenóide ou zigue-zague Minibandas DNA DE ORGANELAS DNA CITOPLASMÁTICO DNA DE ORGANELAS Mitocôndria Cloroplasto ❖ Produzem ATP (transportador universal de energia). ❖ São compostas por duas membranas: (matriz → mitocôndria e estroma→ cloroplasto). ❖ Nas regiões formadas pelas membranas internas encontra-se DNA, RNA, ribossomos e enzimas. ❖DNA promíscuo: em plantas, mitocôndrias e cloroplastos podem trocar segmentos. DNA DE ORGANELAS ❑ TEORIA ENDOSSIMBIÓTICA Ao longo da evolução, muitos de genes de enzimas e proteínas dos endossimbiontes foram perdidos por serem semelhantes aos genes nucleares DNA DE ORGANELAS ❑ DNA MITOCONDRIAL (mtDNA) ❖ Cromossomo mitocontrial → monoploide e circular (maioria das espécies). ❖ Não possui histonas → outras classes de proteínas com funções similares. ❖ Cada mitocôndria → algumas cópias do cromossomo. Cada célula → centenas ou milhares de mitocôndrias. ❖ Em geral, o genoma é pequeno → 15.000pb a 65.000pb → 40 a 50 genes. ❖ Plantas podem ter coleções de múltiplos mtDNA diferentes. ❖A herança é uniparental. DNA DE ORGANELAS ❑ DNA DE CLOROPLASTO (cpDNA) ❖ O cromossomo do cpDNA contém uma molécula fita dupla de DNA (monoploide). ❖ Não possui histonas → DNA altamente enrolado. ❖ Cada cloroplasto → múltiplas cópias do cromossomo. Cada célula → múltiplas organelas. ❖ O genoma é maior que o mtDNA → 80.000pb a 600.000pb → proteínas para a fotossíntese. ❖ Genoma basicamente eubacteriano. ❖A herança é uniparental. CROMOSSOMOS DE PROCARIOTOS ❖ Maioria do genoma → uma molécula de DNA circular (moploides). CROMOSSOMO DE PROCARIOTOS ❖ Genoma menor que o de eucariotos → 2 a 5 milhões de pb 2.000 A 5.000 genes. ❖ Não possui histonas (eubactérias) → a compactação ocorre por alças, ou domínios, associadas a proteínas não histônicas e RNA. ❑ EMPACOTAMENTO E COMPOSIÇÃO QUÍMICA Cromossomo E. coli: 1.500mm Célula de E. coli: 1 a 2 mm CROMOSSOMO DE PROCARIOTOS CROMOSSOMOS DE VÍRUS ❖ Organismos acelulares, compostos apenas de material genético e uma cápsula proteica Fago T2 ~150 genes DNA bifilamentar ΦX174 11 genes DNA unifilamentar CROMOSSOMO DE VÍRUS Fago MS2 Molécula de RNA 3.596 nucleotídios 4 genes 5.386 nucleotídios 2.000pb CROMOSSOMOS PROCARIOTOS x EUCARIOTOS PROCARIOTOS ✓ Monoploides EUCARIOTOS ✓ Di ou poliploides ✓ Gene/DNA ~ 1 ✓ Gene/DNA ↓ ✓ 1 cromossomo (geralmente) ✓ Varia de acordo com a espécie ✓ Empacotamento em alças e super- helicoidização negativa ✓ Empacotamento em três estágios: nucleossomo, solenoide, esqueleto (proteínas não histônicas - alças) OBRIGADO!!!
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