CENTRIFUGAÇÃO

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Centrifugação 
Mistura – matéria constituída por mais de um tipo de 
molécula. Pode ser classificada como homogênea 
(possuem apenas um único aspecto) ou heterogênea 
(apresentam mais de um aspecto). 
Toda mistura é chamada de disperção (soluto + solvente). 
Há 3 tipos: solução (quando as partículas são menos que 
1nm). Já o colóide, são partículas que estão entre 1 e 
1000nm. A suspensão é quando as partículas são grandes 
(maiores que 1000nm). 
 
É a separação de misturas heterogêneas por ação da 
força gravitacional (Fg). A depender das densidades das 
partículas e do fluido, a separação gravitacional pode 
ser muito lenta. 
 
Fg = m x g 
 
Se desejar rapidez na separação, deveremos mexer no g 
(gravidade). 
 
É um equipamento contendo um rotor central formado 
por cavidades para introdução de tubos contendo a 
amostras a serem centrifugadas. Além disso, aumenta 
muitas vezes a força que atua sobre as partículas, 
facilitando a separação e diminuindo o tempo de 
sedimentação. 
 
 
PRINCÍPIO 
Baseia-se na aplicação de um movimento rotacional a 
uma mistura, gerando uma força centrífuga que atuará 
sobre as partículas, promovendo uma sedimentação mais 
rápida. 
 
APLICAÇÃO DA CENTRÍFUGA 
São aplicações usadas para separar partículas de uma 
amostra. 
• Sangue 
 
• Células 
• Separação de fases (substâncias) 
• Organelas 
• Isolamento de macromoléculas (DNA, RNA, vírus, 
proteínas) 
 
UNIDADES DE CENTRIFUGAÇÃO 
RPM – rotações por minuto (unidade: rpm); indica o 
número de giros do rotor por minuto. 
RCF – força centrífuga relativa (unidade: x g); indica a 
força exercida sobre as partículas, sendo esta um 
múltiplo de aceleração gravitacional (g). 
 
O raio (r) é diretamente proporcional a g (gravidade). 
 
A força RCF irá depender do raio da centrífuga. 
 
 
Centrífugas de baixa velocidade – velocidade máxima 
alcançada é de 10.000 rpm. 
Centrífugas de média velocidade – velocidade alcançada 
entre 10.000 e 20.000rpm. 
Centrífugas de alta velocidade (ultracentrífugas) – 
velocidade de rotação acima de 20.000, podendo chegar 
a 200.000rpm. Normalmente o rotor está situado em 
câmara à vácuo e refrigerada. 
 
 
Rotor de ângulo variável: permite que a amostra gire no 
eixo do plano de rotação. O movimento é mais suave e 
possibilita a formação de gradientes e camadas mais 
definidas, entretanto é um processo mais demorado. Sua 
desvantagem é uma velocidade baixa. 
 
Rotor de ângulo fixo: a amostra é colocada a um 
determinado ângulo ao plano de rotação. Seu sistema de 
trabalho é mais rápido, pois a força centrifuga é 
aumentada e as substâncias são sedimentadas mais 
rapidamente. 
 
 
 
- Vidro (borossilicato) 
FÍSICA E BIOFÍSICA THAYNÁ PESSOA 
UFPE 
- Plástico (polietileno, prolipropileno, policarbonato) com 
diferentes volumes e grau de resistência variável. 
- Eppendorf 
 
• Prestar atenção ao balanceamento dos tubos de 
centrifugação. O número de tubos usados deve ser em 
número par, assim para cada tubo deve ser colocado 
outro tubo com o mesmo peso do lado oposto, 
balanceando a centrífuga; 
• Sempre verificar os parâmetros de controle da 
centrifugação (velocidade, temperatura, tempo) 
antes de iniciar o procedimento; 
• Nunca deixar a tampa da centrífuga aberta enquanto 
o equipamento estiver em uso; 
• Desligar o aparelho sempre que terminar o uso; 
• Nunca deixar tubos com material ou água no rotor da 
centrífuga após seu uso. 
 
• Plasma rico em plaquetas (PRP) 
- Acelera a cicatrização e a regeneração óssea 
resultantes de procedimentos cirúrgicos 
- O plasma é obtido através da centrifugação do sangue 
com anticoagulante e resulta em uma alta concentração 
de plaquetas em um reduzido volume plasmático. 
❖ Anticoagulantes utilizados: heparina, citrato 
de sódio e ACD-A (solução contendo citrato 
de sódio, ácido cítrico e dextrose) 
- Estimula a neovascularização, que melhora o 
suprimento sanguíneo e disponibiliza nutrientes 
necessários à regeneração tecidual 
- Se utiliza sangue do próprio paciente 
 
• Aplicação do PRP em tratamentos estéticos 
- Promovem processos de regeneração, cicatrização, 
aumento na imunidade, preservação de tecidos. 
- Aplicação: 
1) Coleta do sangue do paciente 
2) Centrifugação das amostras 
3) Obtenção do PRP 
4) Aplicação do PRP no local desejado 
 
 
CENTRIFUGAÇÃO DIFERENCIAL 
Separação de espécies cujas dimensões sejam 
amplamente diferentes. Exemplos: plasma, plaquetas e 
demais células sanguíneas; fracionamento celular. 
- A amostra a ser centrifugada corresponde a uma 
mistura contendo um ou vários solutos. 
- Amostra será separada em: sobrenadante e precipitado 
(pellet) 
 
 
ZONAL 
- A amostra a ser fracionada deve ser aplicada 
cuidadosamente sobre uma solução contendo um 
gradiente de densidade. 
o Gradiente de sacarose (densidades variáveis) 
o Solução de Ficoll-Hypaque (d=1,077 g/mL) 
- Com a centrifugação, terá início a sedimentação das 
partículas de forma diferencial, levando em conta o 
tamanho, a forma e a densidade. 
- As partículas se sedimentarão em bandas, em uma 
região da solução com densidade próxima a sua. 
- Gradientes podem ser utilizados para separar 
diferentes tipos de células, organelas, ácidos nucléicos, 
complexos proteicos, etc. 
- Separação de células mononucleares do sangue 
(linfócitos e monócitos) por densidade, usando um 
gradiente de Ficoll-Paque 
 
ZONAL ISOPÍNICA 
- Semelhante a centrifugação zonal, entretanto apenas 
as densidades das partículas terão influência na 
separação. 
- A amostra a ser fracionada deve ser misturada a uma 
solução separadora (ex: cloreto de césio). 
- Com a centrifugação, ocorre a autoformação do 
gradiente e as partículas se estabilizarão em zonas de 
acordo com a sua densidade. 
- Solução de cloreto de césio 
- Separação de DNA (AT/GC) 
- Centrifugação de 36 a 48 horas, aplicando força g 
~10.000 xg