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BACTERIOLOGIA Cocos Gram Positivos PROVA DA CATALASE Princípio: verifcar a presença da enzima catalase. Mecanismo de ação: a enzima catalase converte o peróxido de hidrogênio em oxigênio e água e essa liberação do oxigênio gera formação de bolhas. Bioquímica: Bactérias aeróbias e anaeróbias facultativas – catalase (complexo citocromo) Batérias anaeróbias – peroxidases Resultado: Positivo: formação imediata de bolhas de gás - identificação de estafilococos Negativo: ausência de bolhas de gás - identificação de estreptococos e enterococos. CRESCIMENTO EM CHAPMAN (7,5% DE NaCl) Princípio: verificar se a bactéria é capz de crescer em meio com alta [] de NaCl. Staphylococcus = cresce no meio Micrococcus/Planococcus/Stomatococcus = não crescem Resultado: Positivo: presença de crescimento Negativo: ausência de crescimento DNAse Princípio: determina a atividade de um MO em produzir a enzima DESOZIRRIBONUCLEASE que degrada o DNA do meio e produz um halo. Mecanismo de ação: com a produção da enzima DNAse pelo MO há a difusão dela no meio, onde sobre a ação do DNA faz a quebra da dupla hélice da DNAse. Resultado: Positivo: não vai haver precipitação do DNA íntegro pois houve uma ruptura causada pela DNAse, ou seja sem turvação. Haverá formação de um halo transparente ao redor da semeadura do MO que produziu DNAse. Negativo: vai haver a precipitação do DNA íntegro, fazendo com que o meio tenha aparência turva. VOGES PROKAUER (VP) Principio: determinar a produção acetil-metil-carbinol (acetoína) a partir da fermentação da glicose. **acetoína é derivado do metabolismo da glicose. Bioquímica: na pesença de gás atmosférico + alcali ocorre a oxidação destes produtos neutros em diacetila e oxidação da acetoína na presença de alfa-naftol KUH 40% (reativo de Barrit). Em seguida a diacetila liga-se ao núcleo guanidínico da arginina e com o alfa-naftol com a produção de uma coloração vermelha indicativa de teste positivo com presença de acetoína. Resultados: Positivo: colaração vermelha na superfície do tubo – acetoína presente Negativo: desenvolvimento de uma coloração amarela na superfície do meio cor dos reativos. Na pesença de gás atmosférico + alcali ocorre a oxidação destes produtos neutros em diacetila que representa o reagente de cor MANITOL ANAERÓBIO Princípio: determinar se o MO degrada o manitol. Resultados: Positivo: desenvolvimento de cor amarela Negativo: não há alteração da cor do meio. FERMENTAÇÃO DE CARBOIDRATOS (ARABINOSE, SACAROSE, MANITOL, ARABINOSE, TREALOSE, XILOSE, ETC) Principio: determina a capacidade do MO em fermentar um determinado carboidrato seguido de acidificação do meio. Bioquímica: com a utilização do carboidrato adicionado no meio haverá a formação de ácidos devido a fermentação do carboidrato, que é detectado pela virangem de cor do indicador. Resultados: Positivo: desenvolvimento de coloração amarela Negativo: não há alteração, cor original do meio RESISTÊNCIA A NOVOBIOCINA (5 µg) Principio: teste utilizado para distinguir cocos resitentes (S. saprophyticus, S. xylosus, S. cohnii) de sensíveis (S. epidermidis). Resultado: Resistente: zona de inibição de crescimento < 16mm Sensível: zona de inibição de crescimento > 16mm. PROVA DA HEMÓLISE EM ÁGAR SANGUE Principio: teste utilizado para saber a capacidade do MO de produzir lise das hemácias Resultados: Ausencia de hemólise – y-hemolítico Presença de halo transparente (hemólise total) – beta-hemolítico Presença de halo esverdeado (hemólise parcial) – alfa-hemolítico OPTOQUINA (5 µg) Princípio: determinar a sensibilidade de um MO a optoquina. Bioquímica: o cloridrato de etilhidrocupreina produz a lise nos pneumococos, ao passo que outros estreptococos são resistentes a uma concentração maior que 1:500.000. Resultados: Positivo: presença de halo >18mm. Negativo: presença de halo <15mm. BACITRACINA (0,04 µ) Princípio: usada para diferenciar estreptococos do grupo A de outros beta-hemolíticos. Bioquímica: consiste na inibção do crescimento de Streptococcus pyogenes (beta-hemolítico do grupo A) frente a bacitracina. Assim observa-se ao redor do disco uma zona de inibição do crescimento. Resultados: Resistente: ausência de halo de inibição. Sensível: presença de halo de inibição. CAMP TEST Princípio: teste utilizado para identificar presuntivamente os estreptococs do grupo B (S. agalactiae). Bioquímica: A atividade hemolítica da beta lisina estafilocócica sobre os eritrócitos é intensificada por um fator extracelular (fator CAMP). Sempre que os dois reagentes se superpõem em uma placa de ágar sangue de carneiro, ocorre uma intensificação da reação beta-hemolítica. Resultados: Positivo: formação de uma área de hemólise típica em forma de ponta/seta/ meia lua na junção do dois MO. Negativa: ausência de hemólise. MTS (6,5 % de NaCl) Princípio: meio empregado para diferenciar enterococos dos estreptococos que também possuem o antígeno D. Bioquímica: evidencia o crescimento de um MO na presença de alta [] de sal. Resultado: Positivo: Crescimento evidenciado pela turbidez do meio com ou sem alteração de cor - evidenciada por crescimento acompanhado de viragem do indicador de pH púrpura de bromocresol incorporado ao meio, que em pH ácido, pela fermentação da glicose, apresenta-se com coloração amarelada. Negativo: ausência de crescimento.
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