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RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICAS - EAD AULA _01___ DATA: ___28___/___08___/__2021 VERSÃO:01 RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICAS: BIOQUIMICA HUMANA – Aula 1 DADOS DO(A) ALUNO(A): NOME: BEATRIZ DE NAZARE BAIA SOUZA MATRÍCULA: 04080615 CURSO: FARMÁCIA POLO: PARQUE SHOPPING PROFESSOR(A) ORIENTADOR(A): LUCAS F. TEMA DE AULA: ATIVIDADE CATALÍTICA DA AMILASE SALIVAR RELATÓRIO: 1. Resumo sobre o tema abordado em aula. A atividade enzimática pode ser avaliada medindo-se a velocidade de consumo do substrato ou a velocidade de aparecimento do produto. Esta atividade depende de vários fatores, tais como o tempo de reação, a concentração da enzima, a concentração do substrato, a temperatura, o pH do meio e a presença de cofatores e/ou inibidores. Para exemplificar estes conceitos, nesta aula prática será avaliada a atividade da amilase salivar. A (-amilase é encontrada nos animais (sangue, saliva e suco pancreático), plantas, fungos e bactérias. Esta enzima é um endo-amilase e hidrolisa as ligações glicosídicas do amido, glicogênio, poli e oligossacarídeos ao acaso. Como resultado da ação não ordenada da amilase salivar, obtém-se rapidamente uma mistura complexa de produtos de hidrólise que incluem: amido solúvel, maltodextrinas, maltoses, e, eventualmente, glicose. Na boca, a amilase salivar tem participação na digestão de carboidratos. A amilase pancreática é a maior responsável pela digestão glicídica no duodeno. Esta enzima é também normalmente encontrada no soro e a elevação de sua atividade enzimática sérica pode auxiliar no diagnóstico de diversas patologias pancreáticas. 2. Materiais utilizados. Frascos de vidro transparente pequenos ou tubos de ensaio ou copos descartáveis. • Pipeta Pasteur ou conta-gotas. • Tintura de iodo comercial. • Água filtrada ou soro fisiológico (cloreto de sódio 0,9%). • Amido. Procedimento da Hidrolise Química: • Rotular um erlenmeyer para a análise ácida (amido+HCl) • Adicionar com auxílio de uma proveta 30ml da solução de amido a 1% • Acrescentar 3ml de HCl 1:2 • Rotular três tubos de ensaio em AA1, AA2 e AA3, cada um deles contendo 5ml de água destilada. • No tubo de ensaio rotulado em AA1, em tempo 0’pipetar uma alíquota de 5ml do erlenmeyer e deixar em banho de gelo. RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICAS - EAD AULA _01___ DATA: ___28___/___08___/__2021 VERSÃO:01 • No tubo de ensaio rotulado em AA2 pipetar uma alíquota de 5ml do erlenmeyer, levar para o banho de água fervente em tempo 10’ e depois levar para o banho de gelo. • No tubo de ensaio rotulado em AA3 pipetar uma alíquota de 5ml do erlenmeyer, levar para o banho de água fervente em tempo 20’ e depois levar para o banho de gelo. • Retirar os tubos de banho de gelo • Quando todos os tubos estiverem em temperatura ambiente adicionar 10 gotas de sol. em cada tubo. Procedimento da Hidrolise enzimática: • Rotular um erlenmeyer para a análise enzimática (amido+sol. saliva) • Adicionar com auxílio de uma proveta 30ml da solução de amido a 1% - Acrescentar 1ml de sol. de saliva a 1% • Rotular três tubos de ensaio em AE1, AE2 e AE3, cada um deles contendo 5ml de água destilada. • No tubo de ensaio rotulado em AE1, em tempo 0’pipetar uma alíquota de 5ml do erlenmeyer e deixar em banho de gelo. • No tubo de ensaio rotulado em AE2 pipetar uma alíquota de 5ml do erlenmeyer, deixar em temperatura ambiente pelo tempo 10’ e depois levar para o banho de gelo. • No tubo de ensaio rotulado em AE3 pipetar uma alíquota de 5ml do erlenmeyer, deixar em temperatura ambiente pelo tempo 20’ e depois levar para o banho de gelo. • Retirar os tubos de banho de gelo • Quando todos os tubos estiverem em temperatura ambiente adicionar 10 gotas de sol. De lugol em cada tubo. Resultado esperado: Desaparecimento gradativo da cor azul do lugol, indicando a quebra do amido. * Equipamentos de uso coletivo da turma Referência: SANTOS, Ana; SILVA, Bárbara; RIBEIRO, Débora et al. Bioquímica Prática: Protocolos para análise de biomoléculas e exercícios complementares. Repositório UFMA. 2013. Disponível em: http://www.repositorio.ufma.br:8080/jspui/bitstream/1/445/1/Livro%20de%20Bioquimica%20Pratica .pdf. Acesso em: 30 out 2017. RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICAS - EAD AULA _01___ DATA: ___28___/___08___/__2021 VERSÃO:01 TEMA DE AULA: REAÇÃO DE SELIWANOFF (REAÇÃO PARA DISTINÇÃO ENTRE ALDOSES E CETOSES) RELATÓRIO: 1. Resumo sobre o tema abordado em aula. O teste de Seliwanoff é um teste químico que permite distinguir aldoses de cetoses. Se um açúcar contiver um grupo cetona, é uma cetose; se, por outro lado, contiver um grupo aldeído, é uma aldose. Este teste baseia-se no princípio de que, quando aquecidas, as cetoses sofrem desidratação muito mais rapidamente que as aldoses. Este teste fora proposto por Theodor Seliwanoff, daí ser assim designado. Quando o reagente é adicionado a uma solução contendo uma cetose, a cor da solução muda para vermelho (teste positivo). Quando adicionado a uma solução contendo uma aldose, a cor muda mais lentamente para rosa. 2. Materiais utilizados. RESPOSTA: Reagentes e Soluções Água destilada Reativo de Molisch Reativo de Seliwanoff Ácido sulfúrico concentrado (H2SO4) Ácido clorídrico concentrado (Hcl) Solução de amido 1% Solução de frutose 0,1 mol. L-1 Solução de sacarose 0,1 mol.L-1 Solução de glicose 0,1 mol.L-1 Vidraria e Instrumentos Balão volumétrico Banho-Maria Estante para tubos de ensaio Pipeta Pasteur Tubos de ensaio 4. Mel de abelha pipetas de vidro de 5mL pipeta de vidro de 1mL Tubos de ensaio • Identificar os tubos de ensaio como Glicose (Tubo 1), Frutose ou mel de abelha (Tubo 2) e água (Tubo 3). • Pipetar para o primeiro tubo 1mL de glicose, ao segundo 1mL de frutose ou mel de abelha e ao terceiro 1mL de água destilada, que vai servir como um controle negativo, com pipetas de 1mL. • Adicionar em todos os tubos de ensaio 1,5mL de ácido clorídrico • Adicionar 0,5mL de reativo de Seliwanoff*. • Agitar cuidadosamente. Deixar em banho-maria fervente até completar a reação. Resultados esperados: • Tubo 1 (Glicose): Não há mudança do reativo indicando resultado negativo. • Tubo 2 (Frutose): Ocorre a formação de uma solução vermelha indicando resultado positivo. • Tubo 3 (Água): Não há mudança do reativo, indicando resultado negativo. RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICAS - EAD AULA _01___ DATA: ___28___/___08___/__2021 VERSÃO:01 * Equipamentos de uso coletivo da turma Referência: SANTOS, Ana; SILVA, Bárbara; RIBEIRO, Débora et al. Bioquímica Prática: Protocolos para análise de biomoléculas e exercícios complementares. Repositório UFMA. 2013. Disponível em: http://www.repositorio.ufma.br:8080/jspui/bitstream/1/445/1/Livro%20de%20Bioquimica%20Pratica .pdf. Acesso em: 30 out 2017. RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICAS - EAD AULA _01___ DATA: ___28___/___08___/__2021 VERSÃO:01 TEMA DE AULA: PRECIPITAÇÃO POR ÁCIDOS FORTES E METAIS PESADOS RELATÓRIO: 1. Resumo sobre o tema abordado em aula Este procedimento é realizado para verificar a influência de sais de metais pesados e de ácidos fortes sobre a solubilidade da proteína, bem como a influência do pH sobre a carga líquida da molécula polipeptídica. 2. Materiais utilizados. SOLUÇÃO DE PROTEINAS PREPARADA ACIMA SOLUÇÃO DE ( CH3COO)2Pb.3H2O ( acetato de chumbo ) a 20% Solução de acido tricloroacético ( CCl3COOH ) 10% AGUA DESTILADA VIDRARIA INSTRUMENTAL 1 TUBO DE ENSAIO Pipetas de vidro de 5mL Pipeta de vidro de 1mL Procedimento: • Pipetar para um tubo de ensaio 2 mL da solução de ovoalbumina. • Acrescentar 1 mL da solução de ácido tricloroacético.Resultado esperado: Tubo1: resultado positivo com a formação de uma solução. Procedimentos: • Pipetar para um tubo de ensaio 2 mL da solução de ovoalbumina. • Acrescentar 5 gotas de solução de acetato de chumbo. Observar a reação. Resultados esperados: Tubo1: resultado positivo com a formação de uma solução leitosa com precipitados brancos leitosa com precipitados brancos * Equipamentos de uso coletivo da turma Referência: SANTOS, Ana; SILVA, Bárbara; RIBEIRO, Débora et al. Bioquímica Prática: Protocolos para análise de biomoléculas e exercícios complementares. Repositório UFMA. 2013. Disponível em: http://www.repositorio.ufma.br:8080/jspui/bitstream/1/445/1/Livro%20de%20Bioquimica%20Pratica .pdf. Acesso em: 30 out 2017. RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICAS - EAD AULA _01___ DATA: ___28___/___08___/__2021 VERSÃO:01 TEMA DE AULA: PRECIPITAÇÃO FRACIONADA POR SOLUÇÕES SALINAS CONCENTRADAS RELATÓRIO: 1. Resumo sobre o tema abordado em aula. • Correlacionar a concentração de sais neutros com a solubilidades das proteínas. 2. Materiais utilizados. 1 TUBO DE ENSAIO Pipetas de vidro de 5mL Pipeta de vidro de 1mL Solução de concentrada de sulfato de amônio (NH4)2SO4 Solução de concentrada de sulfato de amônio (NH4)2SO4 Estante para tubos de ensaio Pêra de borracha Papel Toalha Descarte para pipetas Frasco com água destilada Procedimento: • Pipetar para um tubo de ensaio (A) 2 mL da solução de ovoalbumina. • Adicionar, pelas paredes, 2mL da solução concentrada de (NH4)2 SO4 • Pipetar para um tubo de ensaio (B) 2 mL da solução de ovoalbumina. • Adicionar, pelas paredes, 2mL da solução concentrada de (NH4)2 SO4 e 2mL de água destilada. Resultado esperado: • Tubo A: resultado positivo com a formação de uma solução leitosa com precipitados brancos • Tubo B: Sem alteração * Equipamentos de uso coletivo da turma Referência: SANTOS, Ana; SILVA, Bárbara; RIBEIRO, Débora et al. Bioquímica Prática: Protocolos para análise de biomoléculas e exercícios complementares. Repositório UFMA. 2013. Disponível em: http://www.repositorio.ufma.br:8080/jspui/bitstream/1/445/1/Livro%20de%20Bioquimica%20Pratica .pdf. Acesso em: 30 out 2017 RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICAS - EAD AULA _01___ DATA: ___28___/___08___/__2021 VERSÃO:01 TEMA DE AULA: REAÇÃO DE BENEDICT (IDENTIFICAÇÃO DE AÇÚCARES REDUTORES) RELATÓRIO: 1. Resumo sobre o tema abordado em aula. O Reagente de Benedict (também chamado de Solução de Benedict ou Teste de Benedict), é um reagente químico de cor azulada, desenvolvido pelo químico americano Stanley Rossiter Benedict, geralmente usado para detectar a presença de açúcares e açúcares redutores, nos quais se incluem glicose, galactose, lactose, maltose . O Reagente de Benedict consiste, basicamente, de uma solução de sulfato cúprico em meio alcalino (com muitos íons OH-); e pode ser preparado através do carbonato de sódio, citrato de sódio e sulfato cúprico. Este reagente, também chamado de gayder, vendido em farmácias de manipulação, é usado geralmente no lugar da solução de Fehling para detectar excesso de açúcar na urina e detectar uma possível diabetes. 2. Materiais utilizados. Solução de glicose a 1%; Solução de sacarose a 1%; Reativo de Benedict; Banho-Maria; Cronômetro; Pipetas graduadas. Pipetas de vidro de 5mL Pipeta de vidro de 1mL Procedimento: • Identificar os tubos de ensaio como Glicose (Tubo 1), Sacarose (Tubo 2) e Água (Tubo 3). • Pipetar, com auxílio da pipeta de 5mL, para os três tubos de ensaio 5mL do reativo de Benedict. • Acrescentar ao primeiro tubo 5mL de glicose, ao segundo 5mL de sacarose e ao terceiro 5mL de água destilada, que vai servir como um controle negativo, com pipetas de 5mL. • Agitar até completa homogeneização. Deixar em banho-maria fervente por cinco minutos. • Observar a reação Resultado esperado: • Tubo 1 (Glicose): A presença de um precipitado vermelho tijolo ou solução amarelo esverdeada indica a redução do cobre, possibilitando um resultado positivo. • Tubo 2 (Sacarose): Não há mudança do reativo, a cor permanece azul, indicando resultado negativo. • Tubo 3 (Água): Não há mudança do reativo, a cor permanece azul, indicando resultado negativo. RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICAS - EAD AULA _01___ DATA: ___28___/___08___/__2021 VERSÃO:01 * Equipamentos de uso coletivo da turma Referência: SANTOS, Ana; SILVA, Bárbara; RIBEIRO, Débora et al. Bioquímica Prática: Protocolos para análise de biomoléculas e exercícios complementares. Repositório UFMA. 2013. Disponível em: http://www.repositorio.ufma.br:8080/jspui/bitstream/1/445/1/Livro%20de%20Bioquimica%20Pratica .pdf. Acesso em: 30 out 2017
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