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Hematologia– Laís Nunes (5º semestre) Avaliam indiretamente as características dos eritrócitos quanto ao volume e o conteúdo de hemoglobina. Os principais contadores eletrônicos utilizam os seguintes princípios biofísicos: Impedância e Dispersão da luz-óptico. Impedância Baseia-se na determinação de mudanças na condutividade de um meio condutor, como por exemplo, o soro fisiológico, durante a passagem das células sanguíneas em fila simples (uma a uma) por uma pequena abertura (zona de detecção) entre dois eletrodos, essa abertura apresenta diâmetro e comprimento de acordo com o tipo celular que é usado para contar; As células são partículas não condutoras de eletricidades e provocam diminuição da condutividade do meio e aumento da resistividade (impedância); Mudanças na impedância são proporcionais aos volumes das células, fato que possibilita contá-las e separá-las por tamanho; Para se calcular a impedância, deve-se aplicar a lei de Ohm: A- Ilustração do método; B- A magnitude desse erro de coincidência aumenta simultaneamente com a concentração da suspensão de células e, para eliminar o erro, estabeleceu-se o uso de diluições apropriadas das amostras e uma fórmula de correção da coincidência que é integrada ao sistema de informação dos analisadores; C- O fluxo laminar (sheat flow) e a focalização hidrodinâmica são alguns desses métodos e têm sido implantados em vários analisadores hematológicos, melhorando a precisão na detecção das células por estes aparelhos. Dispersão da luz-óptico Baseia-se na utilização de um feixe de laser incidente para fazer a medição da dispersão do feixe fluorescente refletido, a partir de uma amostra celular. Avalia o tamanho e a complexidade celular. A- Disposição óptica de um sistema de dispersão de luz. O batente impede que a luz atinja o foto detector, a menos que uma célula disperse a luz. B- Um fluxo centralizado de amostra é obtido – geralmente – por focalização hidrodinâmica, direcionado por meio de uma câmara de fluxo de onde passa uma fonte de laser monocromática em fase; durante o trajeto, as células provocam alterações nos feixes de luz, e o número de vezes em que a luz é dispersa incide sobre o fotodetector, possibilitando a enumeração das células. Com o auxílio de um computador, as interações entre célula x laser são esboçadas em gráficos, gerando citogramas e histogramas com informações quantitativas/qualitativas. Avaliadores eletrônicos Eritrograma Hematologia– Laís Nunes (5º semestre) Contagem de eritrócitos (RBC) Realizada em contadores hematológicos por impedância ou óptico; A contagem automatizada é mais precisa e exata que a manual (câmara de Neubauer), devido ao fato de os constantes corpusculares depender de sua determinação; o resultado é dado em milhões/mm³, e é utilizado somente uma amostra de sangue a qual representa o todo; Seu valor é menos utilizado na prática do que a dosagem de Hb e hematócrito; deve ser analisada em conjunto com os outros dados do eritrograma, nunca isolada e nunca devendo ser usada como único parâmetro para diagnóstico de anemia, pois existem casos de anemias com eritrocitose (aumento da quantidade de eritrócitos) e de eritrocitopenias (diminuição da quantidade de eritrócitos) sem anemia; Valores de referência para adultos: o Homem - 4,5 a 5,5 x 106/μL o Mulher - 3,8 a 4,8 x 106/μL Dosagem de hemoglobina É um dado fundamental no diagnóstico da presença de anemias e a intensidade da anemia ou eritrocitose (aumento do número dos eritrócitos no sangue). o Anemia discreta – Hb (12 ou 13 g/dL) até 10 g/dL; o Anemia moderada – Hb 10 – 7 g/dL; o Anemia intensa - Hb < (menor que) 7 g/dL; Valores de referência para adultos: o Homem: 13,0 a 17,0 g/dL o Mulher: 12,0 a 15,0 g/dL Realizada através da medição da densidade ótica da solução de Hb ou de seus derivados, geralmente em 540nm; Hemoglobina Glicada – também conhecida como hemoglobina glicosilada, é um teste diagnóstico que tem como objetivo verificar a quantidade de glicose médica no sangue durante 3 meses, sendo muito indicada para diagnóstico e acompanhamento da diabetes, bem como avaliação da sua gravidade. Hemoglobina na Urina - a presença de hemoglobina na urina é denominada hemoglobinúria e normalmente é indicativo de infecção nos rins, malária ou envenenamento por chumbo, por exemplo. Hematócrito (Ht) ou Volume Globular (VG) Equivale à fração ocupada pelos eritrócitos em uma coluna de sangue centrifugado, sendo expresso em valor percentual (%); o Correlaciona-se melhor que a contagem de hemácias c/ a viscosidade sanguínea - é o parâmetro mais utilizado na avaliação de alterações volêmicas; Microhematócrito- utiliza-se um capilar não graduado, com dimensões definidas e, então, após uma centrifugação em alta rotação, obtém-se uma coluna de sangue separada entre eritrócitos e plasma, com uma pequena camada de leucócitos e plaquetas na interface (buffy coat); Como parâmetro para detectar anemia é errôneo, pois pode sofrer interferências, como por exemplo, mulheres grávidas elas retem muito liquido, podendo ter uma anemia relativa, mas devido ao liquido da uma falsa impressão que está faltando hemácias, que o volume plasmático está grande. Porém ele é muito útil para aferir a hidratação. Espectro de absorvância da cianometemoglobina. Anemias, cirrose, linfoma, leucemia, hipotireoidismo, insuficiência renal, deficiência de ferro e vitaminas Hemoglobina baixa Desidratação, grandes altitudes; baixa pressão de O2, DPOC, neoplasias mieloproliferativas Hemoglobina alta Neoplasias mieloproliferativas, desidratação grave Elevação da contagem de hemácias Anemias; perda de sangue; produção insuficiente ou destruição rápida Diminuição da contagem de hemácias Hematologia– Laís Nunes (5º semestre) Pacientes acompanhados de condições de hemoconcentração, o hematócrito pode estar normal (p. ex., hemorragias agudas) ou mesmo elevado (p. ex., transfusão de concentrado de hemácias), embora a massa eritroide esteja diminuída, o que reduz sua confiabilidade. Volume corpuscular médio (VCM) É a medida do volume (tamanho) da população eritrocitária, sendo obtido nos contadores hematológicos, considerado parâmetro fundamental para a classificação das anemias na busca da sua possível causa. As hemácias são contadas e medidas a partir de um pulso elétrico (impedância) ou laser (óptico); classifica a anemia em relação ao volume/tamanho; É possível obter o valor do VCM por meio da divisão do hematócrito (Ht) pelo % de eritrócitos presentes nesse volume; expressão em fentolitros (fL). 𝑉𝐶𝑀 (𝑓𝐿) = [𝐻𝑡(%) /𝑁° 𝑒𝑟𝑖𝑡𝑟ó𝑐𝑖𝑡𝑜𝑠 (106) ] × 10. o Valor de referência: homem ou mulher: 83 a 101 fL (invariável com o sexo, mas variável com a idade); Hemoglobina corpuscular média (HCM) Expressa a quantidade média de Hb por eritrócito, medida em picograma (pcg ou pg). É calculada a partir da fórmula: 𝐻𝐶𝑀 (𝑝𝑔) = [𝐻𝑔𝑏 (𝑔/𝑑𝐿) / 𝑁° 𝑒𝑟𝑖𝑡𝑟ó𝑐𝑖𝑡𝑜𝑠 (106)] × 10; Índices Hematimétricos Desitratação, baixos níveis de O2 no sangue, doença pulmonar obstrutiva crônica, doença cardíaca congênita e policitemia (eritrocitose) Possíveis causas para Hct elevado Anemia, sangramento, desnutrição, falta ou diminuição de vit. B12, ácido fólico ou ferro, leucemia e excesso de hidratação Possíveis causas para Hct baixo Determinação do hematócrito - a diferença entre o microhematócrito e o Hct automatizado pode variar entre 1 e 3%. 𝐻𝑡 (%) = 𝑉𝐶𝑀 [𝑓𝐿] × 𝑛ú𝑚𝑒𝑟𝑜 𝑑𝑒 𝑒𝑟𝑖𝑡𝑟ó𝑐𝑖𝑡𝑜𝑠 (106) μL 10 Valores de referência para adultos o Homem - 40 a 50% o Mulher -36 a 46% Deformação que os eritrócitos sofrem ao passar pela zona de contagem de um analisador utilizando a impedância. Dentro da zona, um eritrócito normal passa pela abertura fusiforme, originando uma sombra elétrica próxima ao seu tamanho real; essa deformabilidade depende da concentração de Hb, em que os eritrócitos hipocrômicos se deformam mais do que os hipercrômicos. Determinação do tamanho de eritrócitos em analisador utilizando a impedância elétrica. O tamanho aumentado (A) – macrócito – ou diminuído (B) – micrócito – é percebido pela altura do pulso elétrico; o grau de variação dos volumes dos eritrócitos (C) corresponde ao RDW. Causa comum de erro Crioaglutinação – contagem de hemácias em rouleaux VCM; Excesso de EDTA em relação ao volume coletado – desitrada os eritrócitos VCM; Presença significativa de reticulócitos; Erro espúrio – quando obtido por cifras manuais ou por cálculos indevidos. Tamanho da célula X Volume Macrocítica – VCM (anemias macrocíticas), VCM > 101fL; Microcítica – VCM (anemia microcíticas), VCM < 83fL; Normocítica – VCM normal; IPC: Uma pessoa com eritrócitos normocíticos também pode apresentar anemia se houver um número pequeno eritrócitos ou se os índices hematimétricos estiverem alterados. Nestes casos observa-se uma anemia normocítica. Hematologia– Laís Nunes (5º semestre) O HCM sofre influência direta do VCM e da CHCM, ou seja, células grandes - VCM↑ = HCM↑, aumentado o peso dessa célula; enquanto células pequenas - VCM↓ = HCM↓, pelo baixo peso da célula; IPC: O HCM é um parâmetro que deve ser analisado dentro do contexto do hemograma e não de forma isolada. A HCM deriva da dosagem de Hb e da contagem eritrocitária; assim, é proporcional ao VCM → glóbulo (tamanho) = Hgb (quantidade) – melhor índice para definir hipocromia; Concentração de hemoglobina corpuscular média (CHCM) É a relação entre o valor da Hb contida num determinado volume de sangue e o hematócrito (Ht), sendo expressa em g/dL; o Valor de referência: Homem ou Mulher: 31,5 a 34,5 g/dL; o Parâmetro para avaliação da hipocromia e hipercromia - Equipamentos que utilizam a impedância elétrica sem o fluxo hidrodinâmico, possuem sérias limitações, enquanto equipamentos que utilizam tecnologia laser (óptico), em geral, possuem o foco hidrodinâmico, o que praticamente elimina o efeito forma, ou seja, a CHCM é confiável e possui sensibilidade e especificidade; É calculado a partir da fórmula: 𝐶𝐻𝐶𝑀 = [𝐻𝑔𝑏 (𝑔/𝑑𝐿) / 𝐻𝑡 (%)] × 100 ou 𝐶𝐻𝐶𝑀 = [𝐻𝐶𝑀 (𝑝𝑐𝑔) / 𝑉𝐶𝑀 (𝑓𝐿)]; A elevação da CHCM relaciona-se à presença de esferócitos, drepanócitos, eritrócitos desidratados, fragmentação eritrocitária e ao excesso de anticoagulante na amostra; Amplitude de distribuição das hemácias (RDW) – derivação do VCM A amplitude de distribuição dos glóbulos vermelhos, avalia a variação de tamanho entre as hemácias, que indica a variação no volume (tamanho) dos eritrócitos determinando o grau de anisocitose realizada por sistema automatizado; o Volume de referência: Homem e mulher – 11 a 14,5%; ↑RDW → distúrbio na eritropoiese; isso pode ocorrer devido a células micro/macrocíticas ou à mistura de duas populações eritrocitárias c/ tamanhos diferentes; Detecta alterações precoces de pacientes com deficiência de ferro, folato e/ou vitamina B12, mas que ainda não são anêmicos; A presença de reticulócitos, fragmentação eritrocitária, drepanócitos e mistura de populações podem ser previstas por histogramas; Hipercromia ↑ HCM (>32 pg) – hemácias apresentam coloração mais escura; ↑ Hb; Esferocitose; coma hiperosmolar; hemoglobinopatias. Normocromia HCM normal, apresentando coloração normal; HCM: 27 – 33 pg. Hipocromia HCM↓ - as hemácias apresentam coloração mais baixa; ↓ Hb; HCM <27 pg; Anemia ferropriva. São usados também para descrever níveis altos de CHCM e níveis baixos de CHCM, respectivamente. Hipercromia ↑CHCM (anormal) → ↑Hb (anormal- cor escura) – as células possuem baixa deformabilidade, fazendo com que o VCM aumente, tendo o aumento espúrio do hematócrito e diminuição espúria da CHCM. Hipocromia ↓CHCM (anormal) → ↓Hb (anormal- cor clara) – o grau de deformação é maior, e a sombra elétrica fica menos evidente, resultando em um VCM menor que o real, diminuindo o hematócrito e elevando falsamente o CHCM (deveria tá baixo). Normocromia Concentração de Hb normal → CHCM normal Extensão sanguínea de paciente com anemia ferropriva apresentando hipocromia; Eritrograma: eritrócitos = 4,68 x 10^6/µL; Hb = 9,0 [↓]; Ht = 28,0% [↓]; VCM = 59,8fL [↓]; HCM = 19,2pg [↓]; CHCM = 32,1g/dL; O CHCM apresenta-se normal, porém, na extensão sanguínea, a hipocromia é evidente; nesse caso, a hipocromia deve ser relatada com base na análise morfológica [hematoscopia] Hematologia– Laís Nunes (5º semestre) Histogramas com dois picos podem ocorrer na presença de anemia ferropriva ou sob tratamento, por exemplo; o Valores elevados de RDW (acima do normal) significam que os glóbulos vermelhos são muito diferentes uns dos outros. Essa anisocitose é característica da: • Anemia ferropriva – baixa hemoglobina e baixo VCM; • Anemia sideroblástica – baixa hemoglobina e baixo VCM; • Anemia megaloblástica – baixa hemoglobina e alta VCM. Contagem de reticulócitos Essa contagem fornece uma estimativa da taxa de produção de eritrócitos; pode ser contada manualmente (ao microscópio) e expresso como %/100 eritrócitos, ou automaticamente através de contadores; Resultados Diminuidos Pode ocorrer devido a condições em que a hematopoiese está inadequada ou ineficaz; medula hipoproliferativa. Resultados Aumentados Reticulocitose; pode ocorrer por aumento da produção de eritrócitos, mais pronunciado em anemias hemofílicas ou durante a regeneração da medula óssea; compensação proliferativa RDW - CV Relação da curva de distribuição com um desvio padrão dividida pelo VCM RDW - SD Medida da largura da curva de distribuição ao nível da frequência de 20%
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