Biologia molecular

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Biologia molecular 
 
Conceitue os termos a seguir, sempre lembrando da biologia molecular e 
das técnicas utilizadas nas análises moleculares. 
 
1- PCR 
R= A técnica tem como objetivo multiplicar um determinado trecho do DNA, 
podendo ser um gene ou parte dele, regiões superváriaveis, sendo utilizada 
desoxinucleotídeos como monômeros, até que a sua concentração na solução 
seja tão alta que possa ser facilmente detectável por métodos simples e 
clássicos de separação e identificação de substâncias. Essa multiplicação 
destes trechos específicos se dá alterando a temperatura de ensaio entre: a) 
Desnaturação das cadeias do DNA; b) anelamento (annealinng) dos primers, 
usados para delimitar a sequencia a ser amplificada; c) temperatura ótima 
especifica da enzima: 72ºC; d) reinicio do ciclo. 
2- q-RT-PCR 
R= A técnica q-RT-PCR é uma modificação do PCR convencional. O termo “RT” 
se refere a Transcriptase Reversa (no inglês Reverse Transcriptase) uma enzima 
encontra em vírus, como os retrovírus. Essa enzima é responsável pela 
Transcrição Reversa, ou seja, sintetiza DNA a partir do RNA. Na técnica, as 
moléculas de RNA são convertidas em DNA complementar (cDNA), e em 
seguida, esses cDNAs são amplificados pelo PCR convencional. Além de 
permitir a quantificação do material amplificado em tempo real e a rapidez na 
obtenção dos resultados. 
3- Eletroforese 
R= A eletroforese é a técnica utilizada para separar e purificar moléculas. Essas 
moléculas são submetidas a um campo elétrico, na qual migram para um polo 
positivo ou negativo de acordo com a sua carga. O fluxo migratório é 
determinado pelo peso molecular, onde as moléculas de menor peso migram 
mais rápido que as de maior peso, formando as bandas que serão visualizadas 
posteriormente. A eletroforese ocorre dentro de uma matriz ou gel que possibilita 
a corrida da amostra. O gel é introduzido dentro da solução tampão especifica. 
Em seguida, as amostras são pipetadas em pequenos poços. Para que o ocorra 
a migração, a cuba e fonte de eletroforese exercem uma vantagem, corrente e 
potência constante. As bandas são visualizadas sob luz ultravioleta ou LED. 
4- Enzimas de restrição 
R= As enzimas de restrições são proteínas encontradas em bactérias que são 
capazes de reconhecer uma curta sequencia de DNA especifica e clivam a dupla 
fita em um ponto especifico. 
5- Gel poliacrilamida 
R= O gel poliacrilamida é um dos tipos de matriz usada na eletroforese de DNA 
em gel. Geralmente, é utilizado para separação de fragmentos pequenos, de até 
1kb (1kb = 1000 pares de bases). Mesmo sendo muito eficaz na separação de 
pequenos fragmentos, o gel de poliacrilamida apresenta desvantagens. O seu 
preparo é mais elaborado, sendo necessário a mistura de componentes 
adicionais à poliacrilamida para ajudar na polimerização e mais tempo para que 
esse processo ocorra. Quando não polimerizada, a poliacrilamida, em solução, 
poderá ser tóxica. 
6- Gel agarose 
R= O gel de agarose é o outro tipo de matriz utilizada na eletroforese de DNA 
em gel. É utilizado quando os fragmentos que variam de 0,2kb a 50kb. Ele é feito 
através da mistura de um tampão e agarose, não apresentado toxicidade. A 
polimerização é mais rápida e o gel pode ser reciclado após o uso. 
7- Brometo de etídio 
R= O brometo do etídio (EtBr) é um corante que tem por característica conseguir 
se intercalar entre os pares de base do DNA, tornado possível a sua visualização 
através da emissão de fluorescência sob a luz violeta. Essa técnica é utilizada, 
principalmente, após a técnica de eletroforese em gel, para assim conseguir 
visualizas as bandas de DNA que se formaram. Por ter essa característica de se 
ligar na estrutura do DNA, é considerado um agente mutagêncio, toxico e 
provavelmente carcinogênico. 
8- Southern blot 
R= A técnica Souther blot recebeu esse nome em homenagem ao seu inventor, 
Edward M. Southern. Essa técnica identificar sequencias especificas de DNA. 
Podendo detectar identidade, o tamanho e a abundancia do DNA, em uma 
amostra. A metodologia consiste na fragmentação do DNA em pedaços menore, 
através de uma eletroforese, em seguida, é realizada a transferência para uma 
membrana e a detecção do fragmento de DNA de interesse por hibridação com 
uma sonda especifica. 
9- Nouthern blot 
R= A técnica Nouthern blot é muito similar com a técnica de Southern blot, 
porém, ao invés de detectar fragmentos de DNA específicos, vai detectar mRNA 
específicos dentro da mistura. 
10- Werstern blot 
R= A técnica de Werstern blot se baseia na separação das proteínas por peso 
molecular através de uma eletroforese, em seguida é realizada a transferência 
para uma membrana e a detecção da proteína de interesse é realizada com um 
anticorpo especifico. 
11- Plasmídeos ou vetores 
R= Os plasmídeos ou vetores são moléculas de DNA com fita dupla 
extracromossomal encontrado em todas as espécies de bactérias. São capazes 
de se reproduzir independentemente do DNA cromossômico, carregam consigo 
informações genética e até mesmo genes responsáveis por inúmeros casos de 
restrição a drogas e bactérias. 
12- Termociclador 
R= Termocicloador, ou maquina de PCR, é o equipamento que automatiza o 
processo de amplificação de uma sequencia especifica de DNA a partir de uma 
pequena amostra. O termociclador eleva e reduz a temperatura do bloco em 
ciclos de tempo pré-programados, que permite a multiplicação em massa de 
moléculas de DNA. 
13- Biomarcador 
R= Os biomarcadores são marcadores biológicos são entidades que podem ser 
medidas experimentalmente e indicam ocorrência de uma determinada função 
normal ou patológica de um organismo ou uma resposta a um agente 
farmacológico. 
14- RNAi 
R= O RNA interferente ou interferência mediada por RNA (RNAi) é um 
mecanismo que ocorre naturalmente em plantas, animais e fungos, 
podendo atuar na resposta de defesa desses organismos contra a invasão 
de patógenos, tais como os vírus. A via de RNAi é desencadeada pela 
presença de moléculas de RNA fita dupla ("double stranded RNAs" ou 
dsRNAs), culminando na degradação sequência-específica de RNAs 
homólogos (com a mesma origem dos dsRNAs ativadores). 
15- OGM 
R= Organismo Geneticamente Modificado (OGM), é um organismo que recebeu 
um gene de outro organismo doador. Essa alteração no seu DNA permite que 
mostre uma característica que não tinha antes. Na natureza, as alterações ou 
mutações naturais ocorrem com frequência. No caso de um OGM, os cientistas 
controlam essa alteração e depois estudam a fundo se o produto final é 
equivalente ao produto não modificado. 
16- Transgênicos 
R= Os transgênicos é um organismo que contém um ou mais segmentos de DNA 
ou genes que foram manipulados. Assim, o transgênico é um tipo de OGM, mas 
nem todo OGM é um transgênico. 
17- Clonagem de produtos de PCR 
R= A técnica principal na tecnologia do DNA recombinante é o isolamento e a 
propagação de moléculas idênticas de DNA em um organismo hospedeiro. Essa 
técnica, clonagem molecular, se baseia em dois estágios. Primeiro uma molécula 
de DNA recombinante é gerada pela ligação de um inserto de DNA, oriundo da 
clivagem (digestão) do DNA de interesse e de uma molécula de DNA, 
denominada de vetor de clonagem. O segundo passo, se dá quando a molécula 
recombinante (inserto e vetor ligados) será introduzida para dentro de uma célula 
hospedeira, onde poderá se replicar. O processo de introdução de DNA em 
células é chamado de transformação. 
18- Transformação celular (choque térmico e eletroporação) 
R= O processo de transformação consiste na introdução de um DNA exógeno 
em células hospedeiras, que podem ser: bactérias, leveduras, fungos 
filamentosos, células vegetais e células de mamíferos. Para a transformação 
bacteriana, podem-se utilizar dois diferentes métodos de transformação: Choque 
térmico - Comumente chamado transformação com cloreto de cálcio, é um 
método fácil e relativamentebarato de transformação. Consiste na preparação 
das células, para torná-las competentes, por tratamento com cloreto de cálcio ou 
outro íon divalente (cloreto de lítio ou magnésio). Eletroporação - É um método 
mais eficiente para transformação de células com DNA plasmidial. Consiste, 
inicialmente, na preparação das células com uma solução aquosa para torná-las 
competentes e aptas a receber o DNA. As células são submetidas a alta 
voltagem (choque elétrico) que provoca uma desestabilização da membrana 
externa e a formação de poros, possibilitando a entrada do DNA para o interior 
da célula. Esse tipo de transformação, que requer um equipamento - 
denominado eletroporador -, pode ser utilizado para a transformação de 
bactérias gram positivas e negativas, leveduras, fungos filamentosos, células 
animais e vegetais. 
19- Extremidade coesiva 
R= Extremidade coesiva - produzida por algumas enzimas de restrição, 
apresenta um pequeno número de nucleotídeos em cadeia simples e permite a 
ligação a outro fragmento de DNA pela complementariedade das bases. 
20- Extremidade cega 
R= Também chamada de extremidade abrupta, é produzida por algumas 
enzimas de restrição. É chamada de extremidade cega por não apresentar 
nucleotídeos em cadeia simples. 
21- Fluorocromo 
R= O fluorocromo é um corante fluorescente usado para corar amostras 
biológicas, emite energia luminosa quando excitado radiação luminosa 
adequada. 
22- Método da sonda de hidrolise 
R= O método da sonda de hidrólise é um dos métodos de detecção de 
fluorescência na PCR em tempo real. Durante a PCR, as sondas fluorescentes 
são hidrolisadas por enzimas e a medida que o pigmento fluorescente é liberado 
ele não é mais afetado pelo quencher. Assim, conforme o produto de PCR é 
amplificado a quantidade de pigmento fluorescente liberado aumenta, e portanto 
a fluorescência aumenta. Ao contrário do método intercalador, a análise da curva 
de melting não é necessária para verificar a PCR. 
23- Método do intercalador 
R= O método do intercalador é um dos métodos de detecção de fluorescência 
na PCR em tempo real. Tornou-se fácil para os pigmentos fluorescentes emitirem 
fluorescência por ligação ao DNA de fita dupla 
24- Quencher 
R= O quencher suprime a fluorescência de uma substância fluorescente, na 
sonda de detecção de fluorescência usada para a PCR em tempo real. 
25- Point of care 
R= O Teste Point-of-care (POC ou POCT) significa, em tradução direta para o 
português “teste no ponto de atendimento”. É uma expressão utilizada para 
definir o teste diagnóstico que pode ser realizado em locais variados, dentro ou 
fora do ambiente laboratorial ou hospitalar, indo desde o consultório do 
profissional de saúde até home care, ambulâncias, farmácias, cruzeiros, e outras 
infinitas possibilidades. 
26- RT-LAMP 
R= O RT-Lamp é um teste indicado para detectar a presença do vírus nas vias 
respiratórias, utilizando como metodologia a amplificação isotérmica de RNA. 
Sua sensibilidade varia de moderada a elevada.