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QUESTÕES de Microbiologia Clínica 2º ATIVIDADE Nome: Bruna Emillyn Souza D`avanço Curso: Farmácia 5ºPERIODO, NOITE 1. O que significa semear um material clínica? R: Recolher amostras do microrganismo no material a ser analisado transferindo esta para determinado meio de cultura. 2. Qual princípio das técnicas de semeadura? R: As técnicas de semeadura em laboratório de microbiologia consistem justamente em métodos pelo qual se transfere pequenas quantidades de microrganismos para um meio de cultura em que o material a ser analisado será semeado, ou seja: é preparado um ambiente perfeito para que determinado microrganismo presente em uma amostra de material cresça e se desenvolva para análise posterior. As técnicas de semeadura empregadas em uma análise mudam de acordo com o tipo do meio de cultura e microrganismo que será estudado. Para garantir que somente o organismo desejado seja semeado, é preciso ter certeza de que o ambiente esteja totalmente estéril. Entre as técnicas de semeadura em microbiologia mais utilizadas, podemos citar a de esgotamento. Nela, a suspensão bacteriana (que é o líquido com o microrganismo) é espalhada de forma aleatória em toda a placa, até que todo o material seja utilizado. Outra técnica é a da alça calibrada estéril, na qual este acessório é mergulhado na suspensão do microrganismo e, depois, utilizado para espalhar a amostra na placa de cultura. Ainda, há a aplicação das técnicas de semeadura por meio da incubação em que os meios de cultura com o material são colocados em uma estufa para cultura com temperatura controlada. 3. O que significa repicar uma cultura? R: Transferir o microrganismo, de um meio de cultura já semeado, a um segundo meio de cultura para continuar o crescimento. 4. Como se obtém uma cultura pura. R: Realizando uma esterilização da amostra (agar) por meio de uma autoclave e, ao semear, depositar apenas um material, sempre nas proximidades de uma chama. 5. Qual importância da cultura pura no diagnóstico de doenças infecciosas? R: Para que a amostra analisada não seja contaminada, comprometendo o resultado da análise já que a amostra analisada pode ser de outro microrganismo. 6. Para se identificar uma bactéria é necessário se obter uma cultura pura. Por que uma cultura mista conduz a erros de identificação? R: Porque tendo outra cultura, a amostra fica perdida entre outros microrganismos diferentes https://www.prolab.com.br/blog/o-que-e-meio-de-cultura-e-para-que-serve/ https://www.prolab.com.br/blog/o-que-e-meio-de-cultura-e-para-que-serve/ https://www.prolab.com.br/produtos/acessorios-para-laboratorio/alcas/alca-calibrada-esteril----loop https://www.prolab.com.br/produtos/equipamentos-para-laboratorio/estufa-para-cultura-bacteriologica 7. Em laboratório, os microrganismos são cultivados ou desenvolvidos em material nutriente denominado meio de cultura. O tipo de meio utilizado depende de vários fatores. Cite-os. R: Quanto á composição Os meios quimicamente definidos, são utilizados para quando é necessário quantidades precisas de compostos químicos inorgânicos ou orgânicos altamente purificados. Os meios complexos, também chamados indefinidos, vão ter um meio de composição pouco precisa, pois entrega produtos de digestão da caseína (proteína do leite), de carne, de soja, de levedura, extratos de plantas, entre outros. Quanto a finalidade No caso do meio Seletivo, este irá favorecer o crescimento do microrganismo de interesse e impedirá o crescimento de outros. O meio diferencial permite a fácil identificação da colônia da bactéria de interesse, dentre as colônias de outras bactérias crescidas no meio. O meio de enriquecimento é semelhante ao seletivo, mas suplementado por nutrientes especiais, com a característica de aumentar o número da bactéria de interesse tornando-a detectável. 8. Por que todo processo de semeadura deve ser feito em ambiente limpo e desinfetado, próximo de uma chama “azul” de um bico de Bunsen, ou então dentro de uma câmara de fluxo laminar? R: Para não haver contaminação por outros microrganismo. 9. As placas semeadas devem ser incubadas com tampa invertida para não haver transpiração do meio sobre a tampa. O que pode ocorrer com as colônias se as placas forem incubadas com a tampa para cima? R: Para evitar contaminação das culturas por acúmulo de água de condensação e diluição da amostra que se deseja analisar, além de o fato de que ao manusear a placa retirando ela do local, pode ser aberta por acidente quando a tampa esta virada para cima, já que não possue um lacre. 10. Comente sobre os seguintes métodos de conservação de bactérias: a) Liofilização, consiste no congelamento e desidratação das células bacterianas, em atmosfera de vácuo, é um método a longo prazo, considerada uma das técnicas mais eficientes para a manutenção de microrganismos, justamente por garantir a viabilidade dos agentes por 17 a 20 anos e ser aplicável para a maioria deles, com exceção de algas e protozoários. Basicamente, a liofilização pode ser definida como um processo de desidratação sob condições de vácuo, constituído por três etapas: congelamento, desidratação primária e desidratação secundária. b) Congelamento, O congelamento é um eficiente sistema de conservação de alimentos que retarda o processo de desenvolvimento de microrganismos e da atividade das enzimas produzidas por estes, consequentemente, diminuindo o processo de deterioração. Os microrganismos necessitam da água no estado líquido para se desenvolverem. Como em baixas temperaturas a água se transforma em cristais o desenvolvimento não acontece. Contudo, a maioria dos microrganismos (com exceção dos parasitas) permanecem vivos durante o congelamento, em estado latente. c) Transferência periódica para novos meios, isto é, fazer a repicagem periodicamente, transferir amostras do microrganismo para outro meio de cultura no intuito de que seu crescimento seja constante. 11. Qual a importância da manipulação asséptica para o trabalho em laboratório de microbiologia clínica? R: Para evitar que os meios de cultura estéreis sejam contaminados por microrganismos indesejáveis, pois manobras assépticas são uma série de procedimentos executados que partem do princípio de que todos os materiais utilizados devem estar minuciosamente limpos (estéril). 12. O que são técnicas de assepsia? Descreva os passos dessa técnica. R: As técnicas de assepsia são um conjunto de medidas experimentais, simples mas muito importantes num laboratório de Microbiologia. Estas técnicas devem ser praticadas durante a manipulação de culturas puras e de meios de cultura estéreis. Primeiramente devesse flambar a alça de plantinha, ou agulha de platina (isto antes e após a inoculação). Deixar esfriar o instrumento antes de obter o inóculo, todo o processo dentro da zona de segurança. Remover a tampa do tubo contendo microrganismo, flambar a boca do tubo (a tampa não deve ser colocada sobre a bancada), transferir as culturas. Flambar a boca dos tubos e recolocar as tampas. Mais uma vez flambar a alça de platina. 13. O que é Meio de Cultura? Qual é sua função? R: É uma solução nutriente utilizada para promover o crescimento de microrganismos em laboratório. 14. Uma das formas de classificação dos meios de cultivo é em relação à finalidade do meio. Descreva o que é um meio dito diferencial, seletivo e de enriquecimento. Cite um exemplo de um meio de cultura que seja seletivo e diferencial ao mesmo tempo. R: O meio diferencial permite a fácil identificação da colônia da bactéria de interesse, dentre as colônias de outras bactérias crescidas no meio. Um exemplo é o meio ágar sangue para detectar a presença de strptococcus pyogenes (forma-se um halo claro em torno da colônia pela lise das hemácias. O meio seletivo favorece o crescimento do microrganismo de interesse e impede o crescimento deoutros. Exemplos deste meio são: ágar BEM, Ágar MacConkey, Ágar sulfeto de bismuto para isolamento de Salmonella typhi a partir das fezes. O meio de enriquecimento é semelhante ao seletivo, mas suplementado por nutrientes especiais, com a característica de aumentar o número da bactéria de interesse tornando-a detectável. Alguns exemplos são: Caldo Brain Heart Infusion e o Caldo Tetrationato. 15. Qual a relação tempo/ temperatura utilizadas para esterilização em estufa e em autoclave? R: A ocorrência de oxidação de componentes do microrganismo, para estufas de esterilização deixasse por 2 horas em 160º e 1 hora a 170º (160-180ºC por 1 a 2 horas). No caso da autoclave, a temperatura é 121ºC de 15 a 30 minutos, aqui ocorre a desnaturação de ácidos nucléicos e proteínas. 16. Diferencie esterilização de desinfecção? R: A esterilização destrói toda a vida microbiana, logo, é realizado apenas em objetos. A desinfecção, ou sanitização, reduz o número de patógenos a um nível em que não sejam mais um risco de doença, em matéria inanimada. 17. Diferencie um agente bactericida e um agente bacteriostático. R: O agente bactericida é aquele que mata toda a bactéria, morte rápida. Enquanto que o agente bacteriostático diminui, reduz, a ação das baterias, impedindo sua reprodução, deixando assim a função de destruir o corpo estranho para o próprio organismo, representa uma morte lenta. 18. Descreva como ocorre a esterilização pelo método da autoclave. R: Material é limpo e embalado, de maneira que não tenha contato com o ambiente e micro- organismos após a esterilização. Normalmente utilizasse papel pardo, ou são feitos pacotes ou a boca das vidrarias são tapadas. Também devesse utilizar a fita indicadora, para não confundir material contaminado com esterilizado. Antes de iniciar o processo, deve-se conferir o nível da água, que deve cobrir a resistência, quase encostando no cesto. O material deve ser distribuído também de maneira uniforme e não ultrapassando 80% da capacidade. Deve-se fechar a tampa, apertando as travas opostas, para que seja usada a mesma força, nos lados opostos. Ligar a chave no máximo e esperar sair vapor de água pela válvula. Quando começar a sair vapor, fechar a válvula e esperar pressão e temperatura subirem. Quando atingir 121°C, colocar no médio e contar o tempo. Desligar e esperar temperatura e pressão baixarem para abrir. O material sai úmido, devendo ser seco em estufa antes de ser guardado.
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