COLORAÇÃO DE GRAM

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Coloração de Gram
O que são técnicas de Coloração?
Técnicas que utilizam substâncias 
corantes que facilitam a observação do 
microrganismo, e permite a visualização 
de determinadas estruturas.
Antes de ser corado o microrganismo 
deve ser fixado à lâmina, através de 
secagem por simples exposição ao ar ou 
secagem na chama.
Coloração de Gram
Técnica desenvolvida 
pelo médico 
dinamarquês Hans 
Christian Joachim Gram 
em 1884.
GRAM POSITIVAS GRAM NEGATIVAS
Roxa - azulada Rosa - avermelhada
Resultado da Coloração
Coloração de Gram
CONSISTE NO TRATAMENTO SUCESSIVO 
DE UM ESFREGAÇO BACTERIANO, FIXADO 
PELO CALOR, COM OS REAGENTES: 
CRISTAL VIOLETA DE GENCIANA, IODO, 
ETANOL-ACETONA E FUCSINA BÁSICA.
(1) (2) (3) (4)
(1) Cristal Violeta
(2) Lugol
(3) Álcool de Gram
(4) Fucsina básica (ou safranina)
Coloração de Gram
DETERMINE AS FUNÇÕES DOS MEMBROS DO GRUPO
(em número variável)
- Comandante (quem vai ler o protocolo passo-a-passo)
- Executor(es)
- Supervisores
Procedimento
Preparação do esfregaço bacteriano
1ª Parte: Preparação do esfregaço para a coloração de Gram
1. Preparar um esfregaço fino: coletar assepticamente uma alçada de 
uma suspensão bacteriana e espalhar bem sobre a superfície da 
lâmina; (obs: a partir de meio sólido, o material deve ser espalhado 
sobre uma gota de solução salina ou água, do tamanho de um 
polegar).
2. Secar o esfregaço à temperatura ambiente, deixando-o 
próximo da chama do bico de Bunsen.
3. Fixar o esfregaço na lâmina com auxílio da chama: passar a 
lâmina 2 a 3 vezes através da chama do bico de Bunsen, 
segurando a lâmina com uma pinça.
1ª Parte: Preparação do esfregaço para a 
coloração de Gram
2ª Parte: Etapas da coloração 
- Cobrir todo o esfregaço seco e fixado com a solução cristal violeta 
durante 01 minuto (repousando a lâmina sobre o “varal de vidro” na cuba).
- Desprezar o corante no recipiente de vidro, inclinar a lâmina 45º, 
lavando-a com água destilada. (direcione o jato de água fora do esfregaço)
- Cobrir o esfregaço com lugol durante 01 minuto.
- Inclinar a lâmina 45º e lavar com água destilada.
- Manter a lâmina inclinada e lavar com álcool de Gram (20 segundos).
- Lavar com água destilada e depois cobrir a lâmina com solução de 
fucsina (ou safranina) de Gram por 30 segundos;
- Lavar com água destilada e secar entre duas fitas de papel de filtro.
- Observar ao microscópio com a objetiva de imersão, utilizando um 
óleo especial (imersão)
Resultados:
Desenhe a imagem observada e interprete os resultados
obtidos, levando em conta as características da parede celular
das bactérias presentes na amostra utilizada.
Autoavaliação
- Explique o que acontece na célula bacteriana em cada etapa 
do procedimento da coloração de Gram, esclarecendo quais 
são os efeitos das substâncias utilizadas na parede celular.
- Explique por que a fucsina de Gram é chamada de 
“contracorante”.