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UNIVERSIDADE FEDERAL DE SANTA MARIA CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE DISCIPLINA DE FARMACOGNOSIA CURSO FARMÁCIA GABRIELE DOS SANTOS SILVANA LOPES GOMES SANTA MARIA, RS 2021 EXTRAÇÃO E CARACTERIZAÇÃO DE TANINOS Taninos: Grupo de metabólitos polifenólicos quimicamente heterogêneo que têm em comum a propriedade de se ligarem fortemente a proteínas e, em menor extensão, a carboidratos, a aminoácidos e a íons metálicos em solução. Droga padrão: Hamammelis virginia (hammamélis) e Psidium guajava L. (goiabeira). Droga teste: Atropa Belladonna. Extração: Foram fervidos 1,2g das drogas padrões Hamammelis virginia (hammamélis) e 1,2 de Psidium guajava L. (goiabeira). Cada dupla da bancada pesou uma droga padrão, no nosso caso pesamos a hammamélis, que em seguida foi coloca para ferver em 50ml de água durante 5min. A droga teste Belladona passou pelo mesmo processo, no entanto foi utilizado 1g e 25ml de água. Reação de caracterização: Reação com sais de ferro: do extrato aquoso das drogas padrões e teste, 2ml foram transferidos para seis tubos devidamente identificados, separados e reservados para as reações. Três tubos foram separados para o teste com cloreto férrico, contendo os extratos, e a eles foram adicionadas 5 gotas de Cloreto férrico a 1%. Resultados: • Belladona: Positivo para Taninos condensados, aparecimento de coloração verde. • Hamamélis e goiabeira: Positivo para Taninos Hidrolisados, aparecimento de coloração azulada. Reação com gelatina: Aos outros 3 tubos contendo 2ml dos extratos, foram adiconados 1 gota de ácido clorídrico 10% e em seguida a solução aquosa de gelatina a 2,5% gota a gota. Resultados: • Todas as amostrar formaram precipitados em diferentes quantidades, pois a quantidade de precipitado era relacionada a quantidade de taninos presente na amostra. Cromatografia em camada delgada (CCD): Amostras e padrões: hammámelis, goiabeira, beladona, ácido gálico Adsorvente: Gel de sílica Eluente: Ácido fórmico: H2O (80+10+10) Resultado dos cálculos de Rf. • Belladona: 0,98 Aparecimento de bandas amareladas. • Hamamélis: 0,9 Ricos em taninos hidrolisados. • Goiabeira: 0,77 Mistura de taninos condensados e hidrolisados. • Ácido gálico: 0,91 Padrão de taninos hidrolisados. EXTRAÇÃO E CARACTERIZAÇÃO DE HETEROSIDEOS ANTRACEUTICOS (ANTRAQUINONAS) Antraquinonas: Droga padrão: Rhamnus purshiana (cascara sagrada) e Handroanthus impetiginosus (Ipê roxo). Droga teste: Atropa Belladonna. Extração: Primeiramente, 0,5g de cascara sagrada, ipê roxo e belladonna foram pesados e adicionados em 3 tubos de ensaio. Em seguida, adicionou-se 5ml de éter etílico e após algum tempo de agitação, o solvente foi decantado para outro tubo. Reação de caracterização: pesquisa de derivados antracênicos livres. Reação de Borntrager: empregada para detectar agliconas antraquinônicas, sendo negativa para os heterosídeos, devido a estes últimos não serem solúveis nos solventes apolares, as soluções éterea de Belladonna, cascara sagrada e ipê roxo foram adicionadas 1ml de hidróxido de amônia e posteriormente os tubos foram agitados. Resultados: Reação positiva para antraquinonas livres, pois teve a formação de coloração rósea. Cromatografia em camada delgada (CCD): Amostras e padrões: Cascara sagrada, Ipê roxo, beladonna, Senne e Aloína. Adsorvente: Gel de sílica Eluente: Éter de petróleo Resultados dos cálculos de Rf: • Belladona: Não foi conclusivo, pois não teve deslocamento na sílica. • Ipê: 0,12 • Aloína: 0,4 • Sagrada: 0,57 • Senne: 0,49 EXTRAÇÃO E CARACTERIZAÇÃO DE ALCALOIDES Alcaloides: Os alcaloides são compostos derivados das aminas, mais especificadamente, os alcaloides são aminas de cadeia fechada que possuem o nitrogênio entre carbonos do ciclo. Droga padrão: Carapichea ipecuanha (ipeca). Droga teste: Atropa Belladonna. Extração: Tanto da droga teste quanto da droga padrão foram pesados 0,2g e adicionados a dois tubos. Logo em seguida, duas gotas de hidróxido de amônia e 10mL de diclorometano. Após 30min de repouso, filtrado em algodão. Reação de caracterização: Metade da solução extraída foi seca em um vidro de relógio, e ressuspendido em 1ml de ácido clorídrico 1N. Então, adicionado reativo de mayer, que no nosso caso o selecionado foi Dragendorff uma solução de iodeto de K e subnitrato de bismuto. Resultados: • Ipeca: Resultado positivo, isso indica que tem a presença de alcaloides. • Belladonna: Resultado negativo, mas pode haver traços de alcaloides. Cromatografia em camada delgada (CCD): Amostras e padrões: Ipeca, belladonna, atropina Adsorvente: Gel de sílica Eluente: Acetona: NH4OH (97+3) Resultados dos cálculos de Rf: • Atropina: 0,1 • Ipeca1: 0,21 • Ipeca2: 0,32 • Belladonna: 0,35 Positiva para alcaloides, confirmando os traços na reação de caracterização. EXTRAÇÃO E CARACTERIZAÇÃO DE FLAVONOIDES Flavonoides: Os flavonoides são compostos naturais derivados da benzo-y-pirona e constituem um grupo de pigmentos vegetais de ampla distribuição na natureza. A maioria dos flavonoides ocorre nas plantas na forma de heterosídeos (mas também podem ser encontradas na forma livre-aglicona) e se concentram nas células epidermes superiores das folhas e nas cascas das frutas. Tem propriedades antioxidantes, antivirais, antibacterianas e anti-inflamatória. Droga padrão: Achyrocline satureoides – Macela. Droga teste: Atropa Belladonna Extração: As técnicas de laboratórios desenvolveram a extração da droga padrão. Elas pesaram 6g de droga pulverizada em um balão de 500mL. Foi adicionado 150mL de etanol a 70% e aquecido em manto durante 10min. O extrato hidroetanólico foi filtrado através de algodão. Reação de caracterização: O método utilizado foi a reação de Shinoda onde o Mg metálico adicionado em meio ácido (HCl) provoca a redução dos derivados flavonoides, originando derivados antociânicos. O procedimento laboratorial consistiu em adicionar 2mL do extrato hidroetanólico uma pequena porção de magnésio metálico e 1mL de HCl concentrado nos extratos da droga padrão e teste. Resultado: Reação positiva para presença de flavonoides nas amostras. Cromatografia em camada delgada (CCD): Eluente: ChCl3: Acetato: Ác. Fórmico. Adsorvente: Gel de sílica Padrões e amostras utilizados: Beladonna; Macela; Quercetina; Rutina. Resultados dos cálculos de Rf: • Belladonna: 0,1 • Macela: 0,65 • Rutina: não migrou, pois fica mais retida na sílica por causa da sua polaridade. • Quercetina: 0,53 EXTRAÇÃO E CARACTERIZAÇÃO DE CUMARINAS Cumarina: As Cumarinas são metabólitos secundários encontrados em diversas plantas podem ser classificados como heterosídeos, sendo estruturalmente definidos como derivados de a benzo - α-pirona. Droga padrão: Mikania glomerata (guaco) Droga teste: Atropa Belladonna Extração: Extrair 25 mL de Tintura de Guaco com duas porções sucessivas de 25 mL de clorofórmio, reunindo os extratos clorofórmicos em um erlenmeyer. Filtrar a fração clorofórmica obtida sobre Na2SO4 anidro. Transferir uma porção do extrato para cápsula de porcelana para redução de volume. Reação de caracterização: cinco gotas dos extratos obtidos da droga teste, droga padrão e padrão cumarina foram transferidos a uma folha de papel filtro devidamente marcado, e em seguida levado a chapa de aquecimento. Depois de seca, 1 gota de solução aquosa de KOH ou NaOH 10% foi adicionada e a folha seca novamente. O papel então foi exposto a radiação UV (254 e 365nm). Resultado: Ocorreu intensificação da coloração tanto na amostra de Cumarina, quanto da droga teste (Belladona), também deu para perceber que o comprimento de onda, modifica a intensidade da fluorescência. Cromatografia em camada delgada (CCD): Eluente: Ác acético (10%): tolueno: éter Adsorvente: Gel de sílica Amostras e padrõesutilizados: Guaco, Beladonna, limão siciliano, Umbeliferona e Cumarina. Resultados dos cálculos de Rf: • Guaco: 0,68 • Belladonna: 0,16 • Limão siciliano: 0,46 • Cumarina: 0,66 • Umbeliferona: 0,43 EXTRAÇÃO E CARACTERIZAÇÃO DE PURINAS Purinas: São pseudoalcaloides, originados de bases purinas com atividade biológica marcante, distribuição restrita, presença de nitrogênio heterocíclico. São formadas através da fusão de um anel pirimidina com um anel imidazol. Droga padrão: Ilex paraguariensis (erva-mate) Droga teste: Atropa belladonna Extração: As técnicas de laboratório efetuaram a extração da droga padrão, onde foi pesado 20 g da planta e transferido para um balão com 250 mL de água dest. Levado ao aquecimento por 30 min (manta de aquecimento, com condensador de refluxo). Foi filtrado em Büchner e após o resfriamento, em funil de separação, extraído o extrato aquoso obtido com CHCl3 (3 x 50 mL). A fração clorofórmica obtida foi filtrada sobre Na2SO4 anidro. Do extrato obtido, foram distribuídos 50 mL para cápsula de porcelana para redução de volume (fração que será aplicada sobre CCD). Os 100 mL restantes foram para os 4 grupos (25 mL para cada grupo) para a realização da reação de caracterização. Reação de caracterização: A reação utilizada para identificação de purinas foi a reação de murexida que se baseia-se na oxidação da metilxantina através de ácido nítrico, H2O2 ou halogêneos (Cl e Br), na presença de calor, onde por transformação do anel imidazólico se formam aloxano e ácido dialúrico. • Planta padrão: Para a planta padrão os 25 mL de extrato foram levados à secura em cápsula de porcelana (banho de água). Adicionou-se três gotas de HNO3 e cinco gotas de HCl conc. Novamente foi levado à secura e sobre o resíduo seco, quatro gotas de NH4OH foram adicionadas. Resultado: Positivo para Purinas, ocorreu aparecimento de coloração laranja, que afirma o resultado da técnica. • Planta teste: 10 mL do extrato de belladonna foram secos em cápsulas de porcelana. Ao resíduo seco, acrescentou-se um três gotas de HNO3 e 5 gotas de HCl conc. Novamente à secura e sobre o resíduo seco gotejado quatro gotas de NH4OH. O mesmo foi efetuado a cafeína. Resultado: Inconclusivo para presença de purinas na amostra de belladdona. Os procedimentos laboratoriais foram efetuados pelas técnicas. CROMATOGRAFIA EM CAMADA DELGADA (CCD): Amostras e padrões: erva mate, beladonna, cafeína, teobromina e teofilina Adsorvente: Gel de sílica GF254 Eluentes: - AcOEt: MeOH: Ác. acético (80+10+10) Resultados: Foram inconclusivos, pois nossa placa de cromatografia se desfez na hora da revelação.
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