Provas bioquímica

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Provas bioquímica 1
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Provas bioquímica
Provas bioquímicas são testes feitos para identificar bactérias isoladas, eles são 
utilizados para a identificação de eterobactérias, as quais são bastones ou 
cocobacilos Gram negativos, móveis ou imóveis, e não esporulados, além disso 
fermentam açucares com produção de ácido e gás, e são oxidase negativas.
Triple surgar iron agar (TSI)
É utilizado para determinar a capacidade de bactérias Gram negativas 
fermentarem glicose, lactose e/ou sacarose, com produção de gás carbônico 
(C02) e gás sulfidrico (H2S). Nesse teste é utilizado vermenlho fenol, o qual é um 
indicador de pH (pH ácido- cor amarela; pH alcalino- cor vermelha), açucares (glicose, 
lactose e sacarose) e indicador de H2S.
Procedimento para semeadura
1. Perfurar com agulha bacteriológica até próximo à base do tubo sem encostar no 
vidro e voltar fazendo estrias em zig-zag na superfície do meio. 
2. Incubar 35-37oC por 24h.
Interpretação
💡 A- meio ácido; K- meio alcalino
A-A: Como há vermelho fenol, se houver a fermentação e sucetivamente a produção 
de ácido o meio ficará amarelo, quando dar o resultado ácido-ácido significa que a 
bactéria estudada foi capaz de fermentar os três açucares e logo houve a produção de 
ácido, o meio ficará completamente amarelo.
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💡 Fermentou todos os açucares meio todo amarelo.
K-A: Lembre-se que o vermelho fenol na presença do meio alcalino fica cor vermelha, 
quando o resultado é alcalino-ácido há uma reversão parcial do meio ficando a base 
amarela indicando a produção de ácido e o ápice vermelho indicando a 
alcalinidade, essa reversão parcial significa que a bactéria é capaz de fermentar 
apenas a glicose.
💡 Fementou só a glicose: base amarela indicando a produção de ácido e 
o ápice vermelho indicando a alcalinidade
K-K: O resultado alcalino-alcalino demonstra que a bactéria não é capaz de fermentar 
nenhum dos açucares, a ultilização de peptona como fonte de energia deixa o pH 
alcalino, tanto na base como no ápice fica rosa indicando a alcalinidade.
💡 Bactéria não é capaz de fermentar nenhum dos açucares: o meio fica 
todo vermelho indicando a alcalinidade devido a utilização de peptona 
como fonte de energia.
Produção de gás: Se a bactéria, ao metabolizar os carboidratos, produziu C02 haverá 
bolhas de ar e/ou o deslocamento do agar-agar.
Podução de H2S: Se houver a produção de H2S (ácido sulfidrico) haverá uma 
precipitação negra.
SIM (produção de H2S, indol e motilidade)
Essa prova bioquímica tem como objetivo determinar se um microrganismo é capaz 
de produzir H2S, se é móvel ou imóvel e determina a habilidade do 
microrganismo de produzir indol a partir do triptofano.
Processo de semeadura
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1. Como o auxílio de agulha bacteriológica realiza a técnica de punctura com o 
inóculo até dois terços do meio
2. Incubar 35-37C por 24h
Interpretação
Produção de H2S: Como visto na prova TSI, se houver a produção de H2S (ácido 
sulfidrico) haverá uma precipitação negra.
Motilidade do microrganismo: Se a bactéria é móvel haverá uma zona difusa do 
crescimento, apresentando um aspecto de nuvem difusa; se a bactéria é imóvel 
crescimento apenas na linha do inóculo, parecendo o retante do meio transperente.
Produção de indol a partir do triptofano (prova do indol): Para que o 
microrganismo consiga produzir indol é necessário que ele possua a enzima 
triptofanase, irá colocar no meio após a incubação o regente de Kovacs (p-
dimetilaminobenzaldeído), ele detecta a presença de indol produzindo uma coloração 
vermelho. Assim se a reação for positiva haverá a formação de anel vermelho/rosa na 
superfície demostrando que houve a produção de indol, se a reação for negativa não 
haverá o anel.
💡 Colocou o reagente Kovacs e houve a formação de um anel rosa 
demostra que houve a produção de indol e, logo, há a presença da 
enzima triptofanase.
Prova do citrato de Simmons
Essa prova bioquímica determina a capacidade do microrganismo em utilizar o 
citrato como única fonte de carbono. No meio haverá citrato de sódio (fonte de 
carbono), fosfato desidrogenado de amônia (fonte de nitrogênio) e azul de 
bromotinol (indicador de pH)
Procedimento para semeadura
1. Com o auxílio de agulha bacteriológica inocular a superfície do meio com uma 
estria superficial (um risco). 
2. Incubar 35-37oC por 24h.
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Interpretação
Reação positiva: Se o microrganismo analisado utilizou o citrato como fonte de 
carbono produzindo carbonatos, assim, haverá um crescimento na superfície e o 
meio ficará alcalino, logo, devido ao indicador de pH, haverá uma alteração da cor 
verde para azul intenso.
Reação negativa: Haverá ausência de crescimento e ausência de coloração azul.
💡 Para utilizar o citrato como fonte carbono a bactéria deverá ter a enzima 
citrato permease e citrase.
Fenilalanina
Nesse experimento, observa-se a capacidade do microrganismo em desaminar a 
fenillanina a ácido fenilpirúvico através da enzima fenilalanina desaminase.
Procedimento
1. Inocular a superfície do ágar fenilalanina com estrias, sem perfurar o meio. 
2. Incubar 35-37oC por 
24h.
💡 Após 24h, adicionar cloreto férrico (FeCl3) a 10% sobre o crescimento 
bacteriano.
Interpretação
Reação positiva: Há o aparecimento de cor verde escuro imediata, após 
acrescentar cloreto férrico ( esse reativo vai revelar o ácido fenilpirúvico produzido), o 
que indica que houve a desaminação fenilalanina e, para isso, a presença da enzima 
fenilalanina desaminase.
Reação negativa: Não desenvolve a coloração
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Fermentação da glicose
Essa prova analisa a capacidade de um microrganismo em fermentar a glicose. No 
meio haverá caldo contendo glicose e um tudo de Durham e indicador de vermelho 
fenol.
💡 Lembre-se que o vermelho fenol age pH ácido- cor amarela; pH alcalino- 
cor vermelha
Procedimento de semeadura:
1. Inocular o meio com o microrganismo a ser testado com o auxílio da alça de 
platina.
2. Incubar 35-37oC por 24h.
Interpretação: 
Reação positiva indicador torna-se amarelo graças à produção de ácidos durante a 
fermentação, se houver produção de gás, será coletado pelo tubo de Durham.
Reação positiva: A glicose é utilizada como substrato pelas bactérias para produzir 
energia no processo de fermentação como produto há a produção de ácido e o 
indicador torna-se, assim, amarelo. Se houver a produção de gás, será coletado 
pelo tubo de Durham.
Produção de urease
Esse experimento determina a capacidade de um microrganismo hidrolisar a uréia, 
pela ação da enzima urease, formando amônia. No meio haverá a uréia (substrato) 
e o vermelho de fenol (indicador de pH).
💡 O produto da reação é amônia e CO2
Procedimento de semeadura
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1. Inocular o meio com o microrganismo a ser testado, com o auxílio de uma alça 
bacteriológica.
2. Incubar 35-37oC por 24h (pode ser necessário incubar mais 24h)
Interpretação
Reação positiva: O microrganismo hidrolisou a ureia liberando amônia, como a 
amônia é básica, esse pH alcalino deixa o meio Rosa por conta do indicador.
Reação negativa: Não há hidrólise da ureia, logo, o meio não se altera.
💡 Classificação das enterobactérias a partir da provas bioquímica
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💡 Resumão: