Testes imunológicos

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Soro x plasma 
O plasma colhido em tudo de citrato ou EDTA 
mantem sua cascata de fibrinogênio, já no caso 
do soro a cascata consome essa substância, 
ficando a parte líquida sem fibrinogênio e uma 
massa no coágulo. 
 
 
Importância dos testes 
imunológicos 
 Importante no diagnóstico do paciente; 
 Acompanhamento de doenças que afetam 
diretamente o sistema imune (situações de 
imunodeficiência); 
 Dosagem de anticorpos e complemento (no 
caso de anticorpos contra o próprio tecido); 
 Pesquisa de autoanticorpos. 
 
Testes laboratoriais 
imunológicos 
Para doenças não imunológicas 
 Pesquisa e quantificação de antígenos e 
anticorpos; 
 Pesquisa de marcadores tumorais; 
 Dosagem de hormônios; 
 Dosagem de drogas medicamentosas e de 
abuso; 
 Dosagem de proteínas plasmáticas. 
 
Testes laboratoriais imunológicos 
permitem 
 Confirmação de uma suspeita clínica: Ex. Ag 
NS-1 (dengue). 
 Diagnóstico de infecção recente: Ex. Ac IgM 
para o Treponema pallidum (sífilis). 
 Exclusão de uma enfermidade: Ex. dois testes 
negativos para presença de anticorpos anti- 
Trypanosoma cruzi exclui a doença de 
Chagas. 
 Acompanhamento da progressão de uma 
doença: Ex. Aparecimento do Ac anti-HBe e o 
desaparecimento do Ag HBeAg (hepatite B) = 
bom prognóstico. 
 Avaliação da efetividade de um tratamento: 
Ex. Diminuição de dois títulos ou mais na 
quantidade de Acs no VDRL, 3 meses após o 
fim do tratamento = cura. 
 Triagem de doadores de sangue: Sífilis, 
chagas, HIV, hepatites B e C, HTLV. 
 
Teste imunológico ideal 
 Fácil execução, 
 Rápido e barato, 
 Resultado preciso. 
 Avaliar parâmetros: sensibilidade, 
especificidade, eficiência, valor preditivo positivo 
e valor preditivo negativo. 
 
Parâmetros para validação de um 
teste sorológico 
Validade intrínseca 
Comparado a um teste de referência 
 Sensibilidade: probabilidade de teste positivo 
nos doentes. 
 Especificidade: probabilidade de teste 
negativo nos não doentes. 
 Eficiência ou Acurácia: probabilidade de o 
teste fornecer resultados corretos (positivo 
nos doentes e negativo nos não doentes). 
 Valor Preditivo Positivo: é a probabilidade da 
presença da doença quando o teste é 
positivo. 
 Valor Preditivo Negativo: é a probabilidade da 
ausência de doença quando o teste é 
negativo. 
 
Em relação a doença em determinada 
população 
 Exatidão: resultados muito próximos ao 
verdadeiro valor. 
 Precisão: concordância dos resultados 
obtidos várias vezes (duplicata, triplicata). 
 Reprodutibilidade: concordância de 
resultados/ pessoas ou laboratórios 
diferentes. 
 
Possíveis resultados de 
um teste imunológico 
 
 
Sensibilidade 
S = VP/VP + FN 
Especificidade 
E = VN/VN + FP 
Eficiência 
Efic. = VP + VN/VP + VN + VP 
Valor preditivo positivo 
VPP = VP/VP + FP 
Valor preditivo negativo 
VPN = VN/VN + FN 
 
Teorema de Bayes 
Permite calcular VPP e VPN quando são 
conhecidos a prevalência da doença, a 
sensibilidade e a especificidade do teste utilizado: 
 VP = Sensibilidade x Prevalência 
 FN = (1 – Sensibilidade) x Prevalência 
 VN = Especificidade x (1 – Prevalência) 
 FP = (1 – Especificidade) (1 – Prevalência) 
 
Falso positivo 
Pode ocorrer quando o reste reconhece outra 
substância além da pesquisada (reação cruzada). 
Ex: Pode ocorrer falso positivo no método ELISA 
para HIV se o indivíduo tiver tomado vacina 
recentemente para H1N1, ocorrendo reação 
cruzada com os antígenos do teste de HIV. 
Também pode ocorrer se o paciente possuir a 
substância analisada devido outra causa que não 
seja a doença pesquisada. 
Ex: Falso positivo no VDRL (sífilis) devido a 
presença de anticorpos antifosfolipídeos 
formados no LES. 
 
Falso negativo 
Pode ocorrer falso negativo em caso de 
pacientes cuja a substância pesquisada esteja 
em baixas quantidades no organismo por não 
estar no dia ideal de coleta. 
Ex: Pesquisa de antígeno Sars-Cov-2 antes de 
48h de sintomas. 
Também ocorre quando o teste não possui 
sensibilidade analítica suficiente para detecção 
da substância. 
 
Os títulos das reações que se apresentarem de 
1/40 para baixo são negativos e acima disso são 
positivos, porém, existem doentes abaixo dessa 
média, sendo um Falso Negativo. 
Também pode ocorrer de ter não doentes acima 
de 1/40, ocorrendo um falso positivo. 
 
Limiar de reatividade 
 
Quanto maior a sensibilidade, menor a 
especificidade do teste. 
 
Classificação dos testes 
imunológicos 
Quanto à sua aplicação 
 Testes para detecção de antígenos, 
 Testes para detecção e quantificação de 
anticorpos, 
 Testes para avaliação da imunidade celular, 
 Testes para avalição do sistema 
complemento, 
 Testes de histocompatibilidade, 
 Testes de imuno-hematologia (tipagem 
sanguínea e fator Rh). 
 
Quanto à sua metodologia 
 Testes com reagentes marcados: 
enzimaimunoensaio, radioimunoensaio e 
imunocromatografia*. 
 Testes com reagentes não marcados: 
precipitação, aglutinação, floculação, 
neutralização e fixação do complemento. 
 
Diluição 
Definição 
É uma forma de tornar uma solução menos 
concentrada. 
 
Como realizar 
Adiciona-se um diluente até chegar na diluição 
desejada. 
 
Exprimir a diluição 1 unidade da solução original 
/ total de unidades da solução final 
Ex: 1/20 = 19 partes de salina fisiológica + 1 parte 
do soro 
 
Diluição seriada 
Definição 
Diluições realizadas um certo número de vezes 
 
Uso 
Utilizada para estimativa quantitativa, 
principalmente em reações não automatizadas. 
Ex: Solução original: soro 
 Diluente: salina fisiológica 
 Razão 2: 1/2 (1 parte de diluente + 1 parte da 
solução) 
 Escolher volume que representará 1 parte: 
100uL 
 
 
Títulos de anticorpos 
 Na imunologia título de anticorpos: medida 
do número de moléculas de Acs por unidade 
de volume de soro. Indica a concentração de 
Acs no soro. 
 Título de anticorpos em um soro: maior 
diluição deste, na qual se observar reação 
com uma quantidade fixa e conhecida de Ag. 
 
Ex: Em uma reação de precipitação, cuja 
sensibilidade do reativo é 10 UI/ml, foram feitas 
diluições seriadas a razão 2 (5 tubos) e 
acrescentada quantidade fixa e conhecida de 
antígeno. Após incubação, tivemos a seguinte 
leitura: 
 
O resultado é reagente até 1/8, pois foi a última 
diluição que apresentou precipitado. Quanto 
maior a diluição, mais anticorpos o paciente 
apresenta. 
 
Unidades internacionais 
por mililitro 
Inverso da maior diluição na qual se observar 
reação com quantidade fixa e conhecida de 
antígeno multiplicado pela sensibilidade do 
reativo. 
Ex: 8x10UI/mL 
 
Classe e avidez do anticorpo 
 Classes pesquisadas no soro: IgG, IgM, IgA e 
IgE 
 Avidez – força de ligação entre um antígeno 
multivalente com dois ou mais parátopos do 
anticorpo. O teste de avidez é utilizado para 
saber se a infecção é recente. 
Quando a avidez é baixa, a infecção é recente e 
quanto maior, a infecção já passou. 
 
 
A avidez é realizada quando o IgM é reagente, 
pois é para confirmar se a infecção é recente. 
 
Especificidade dos 
anticorpos 
 
Um antígeno tem vários epítopos. Cada epítopo 
induz a formação de um anticorpo. Para um 
antígeno forma-se uma coleção de anticorpos. 
 
Reação cruzada ou Reatividade Cruzada 
 
 
 
A reação cruzada (falso positivo) ocorre porque 
um anticorpo reagiu com um antígeno que 
estimulou sua formação. 
 
Como evitar 
 Fazer um teste mais específico. Ex. HIV 
 Repetir o teste 15 dias após e verificar se 
houve aumento no título de Acs. Ex. pesquisa 
de anticorpos na brucelose e ricketsioses. 
 Fazer absorção do soro, para remover Acs 
inespecíficos. Ex. FTA-ABS (sífilis). 
 
Fenômenos de zona 
 
Se passar pela zona de equivalência, é uma 
reação visível, agora se passar pelas outras 
áreas, é mais difícil de se analisar. 
A reação pode ter ocorrido, mas não é visível, 
tornando o resultado um falso negativo. Logo, 
excesso de anticorpo ou de antígeno atrapalha o 
diagnóstico.Reação Ag-Ac – proporções ideais 
 
É uma zona de equivalência pois as reações são 
visíveis. 
 
Excesso de anticorpos 
 
Julgada como fraca, duvidosa ou negativa, 
devido ao excesso de anticorpos. 
 
Excesso de antígenos 
 
Também julgada como fraca, duvidosa ou 
negativa devido ao excesso de antígenos, sendo 
mais difícil de saber se a reação realmente 
ocorreu. 
 
Fenômenos de zona 
Definição 
Não visualização da reação devido ao excesso de 
Ag ou Ac. Pode levar a resultados falso negativos 
em testes sorológicos. 
 
Como evitar 
Testando simultaneamente soro puro e diluído 
Ex. VDRL – soro com elevada concentração de 
Acs: puro fracamente reagente ou não reagente 
e diluído a 1/8 fortemente reagente.