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REVISÃO DE BIOLOGIA CELULAR GERAL 2ª AP PRÁTICA FARMÁCIA 2022.1 1 – METABOLISMO Objetivo da prática: Testar a atividade biológica dos organismos na bancada para os classificar se estão vivos ou mortos. Como esse teste foi feito? Através da análise qualitativa da emissão de CO2 pelos materiais biológicos testados. Mas o que significa a análise qualitativa? Significa que não pudemos quantificar quanto de CO2 foi emitido, mas pudemos observar visualmente uma mudança do indicador de pH denominado azul de bromotimol. Qual a razão do indicador de pH mudar de cor? Com a liberação do CO2 pelos organismos VIVOS vemos que a seguinte reação acontece: I - H2O + CO2 → H2CO3 II - H2CO3 (aq) → H+ + HCO3 – III – HCO3- → H+ + CO3 2- Logo, podemos observar que a interação do CO2 com a água tornará o meio ácido. Por isso, adicionamos o indicador de pH para verificar quanta mudança ocorreu no meio (fazendo o paralelo entre o quanto de CO2 foi emitido e o quanto ocorreu mudança na cor do indicador). O azul de bromotimol fica nas seguintes cores: Básico (azul), Ácido (amarelo) e Neutro (verde). Dos materiais utilizados: Utilizamos vários materiais biológicos para testar a emissão de CO2 no meio, sendo eles: Feijão vivo e feijão morto (cozido), folha viva e folha morta (seca), levedo vivo (ativado) e levedo morto (fervido). Da levedura utilizada (levedo) O nome da levedura utilizada para a prática é Saccharomyces cerevisiae. Ela também é usada para fermentar pães, pizzas e cervejas. NÃO FAZ MAL PARA A SAÚDE. TENDO VOCÊ MESMO COMIDO VÁRIAS VEZES. O QUE É IMPORTANTE SABER: a) Qual o objetivo da prática? Explicar como reconhecemos a atividade dos materiais biológicos os classificando como vivos ou mortos. b) Por que ocorre a mudança de pH? Explicar a relação da mudança de pH com a emissão de gás carbônico no meio. Se possível, colocar a reação química. c) O que é o azul de bromotimol e quais suas cores em cada pH correspondente. Quer cor ele fica no meio neutro? E no básico? E no ácido? d) Qual o nome da levedura que você utilizou na prática? Lembrar de indicar o Gênero e espécie com sublinhado e o nome da espécie em minúsculo. 2- TESTANDO A ATIVIDADE DA CATALASE FUNÇÃO DA CATALASE A catalase é uma enzima contida nos peroxissomos. Sua função é catalisar a reação química da decomposição do peróxido de hidrogênio (H2O2) nos organismos. OBJETIVO DA PRÁTICA Como não podemos ver o gás Oxigênio no meio (porque é um gás incolor) e não podemos quantificar também quanto de Oxigênio é emitido no meio, também faremos uma análise qualitativa, ou seja, apenas visual através da EMISSÃO DE BOLHAS. Quanto mais bolhas se formam em solução, mais catalase esse material possui, e mais catalisada será a reação, logo mais O2 se formará. Logo, o objetivo da prática é identificar, a grosso modo, quanta catalase cada material tem. A reação é a seguinte: catalase H2O2 → H2O + O2 MATERIAIS UTILIZADOS Utilizamos dois tipos de materiais. Materiais vegetais: Folha, tomate e batata. Materiais animais: Carne (músculo) e Fígado APRESENTAÇÃO DOS MATERIAIS Cada um desses matérias foram submetidos a no mínimo dois tratamentos: inteiro e picado Na carne também usamos o material assado (bem passado) No caso do fígado também usamos o macerado (extrato líquido) RESULTADOS: No caso, o material que mais reage é o fígado, em especial o fígado macerado, em razão dos peroxissomos estarem mais disponíveis devido a maior superfície de contato e pelo fígado ser um órgão desintoxicante. A carne (inteira e picada) é o segundo que mais reage devido sua natureza de célula animal, contém uma boa quantidade de catalase. Os materiais que reagem menos são os vegetais e isso se deve a dois motivos: A parede celular exerce resistência à entrada do peróxido de hidrogênio e as células vegetais possuem menos catalase devido a outros artifícios que possuem de se livrar dos radicais livres (como os corantes por exemplo). O material que não reage é a carne assada, devido a desnaturação da enzima catalase (que é de natureza proteica) e por isso perde sua conformação tridimensional com o aumento da temperatura, fenômeno similar de quando fritamos um ovo. O QUE É IMPORTANTE SABER: a) Em qual organela está contida a enzima catalase? b) Como conseguimos identificar a existência de gás Oxigênio no meio, já que é um gás invisível? c) Escreva a reação da decomposição do peróxido de hidrogênio e explique: a catalase participa da reação? Como uma enzima, ela é consumida no processo??? d) Por que o fígado foi o que reagiu mais? Explique um motivo plausível para esse resultado experimental. e) Qual motivo justifica a reação exagerada do material animal em comparação com o material vegetal? Explique. 3- EXTRAÇÃO DE DNA OBJETIVO DA PRÁTICA Extrair o DNA da cebola e observar macroscopicamente seus aglomerados filamentosos. ETAPAS DO PROCEDIMENTO I – Picar a cebola. II - Adicionar a solução de extração (composta por água, detergente e NaCl). III – Levar ao banho-maria por 15 minutos. IV – Levar ao banho gelado por mais 15 minutos. V- Filtrar e obter apenas o extrato líquido. VI – Adicionar álcool gelado ao poucos, com vagarosidade. VII – Obter os filamentos de DNA e agrega-los usando bastão de vidro. IMPORTÂNCIA DE CADA ETAPA, NA MESMA ORDEM I – Aumentar a superfície de contato, romper a parede celular II – Detergente irá romper a membrana plasmática e o núcleo, deixando o DNA livre. NaCl neutralizará as cargas de PO4- através da ligação do Na + com o PO4- desse DNA. Logo, ele perderá sua capacidade de se corar por corantes básicos. III – O calor desnaturará as proteínas que enovelam o DNA, chamadas de Histonas. IV – O banho gelado servirá para precipitar inicialmente o DNA e cessar qualquer reação que ainda esteja ocorrendo no meio intracelular. V – Desprezar os pedaços sólidos VI – O DNA é insolúvel em álcool, logo precipitará. O motivo dele estar muito gelado é pra diminuir sua solubilidade e assim precipitar mais o DNA. VII – Agregar os filamentos precipitados O QUE É IMPORTANTE SABER: a) Qual a função dos componentes da solução de extração? Dizer qual a função do detergente, do sal de cozinha. b) Por que você picou o material?? c) Qual a função do banho-maria nesse processo? d) Por que o álcool GELADO foi escolhido para esse processo? O álcool em temperatura ambiente teria o mesmo resultado?
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