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Livro de Conteúdo e Exercício
Site: Ambiente Virtual Acadêmico @ UFRJ
Curso: Farmacotécnica II - Noturno
Livro: Livro de Conteúdo e Exercício
Impresso por: MARIANNA TEIXEIRA DE MATOS - Aluno
Data: sexta, 22 jul 2022, 19:48
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Índice
Considerações Gerais
Tipos e Vias de administração parenteral
Aspectos Biofarmacêuticos
Aspectos Farmacotécnicos
Isotonia
Esterilidade
Pirogênios
Áudio-Slide
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Considerações Gerais
Os produtos parenterais são preparações estéreis destinadas a serem  injetadas por via intravascular, administradas nos tecidos do
corpo ou nas cavidades viscerais.
A via de administração parenteral é frequentemente escolhida para substâncias ativas que são pouco absorvidas por via oral ou
quando são necessários efeitos e disponibilidade sistêmica rápida, ou ambos. 
Os medicamentos parenterais podem ser formulados como soluções, emulsões ou suspensões. O conhecimento desses tipos de
produtos é prerrogativa para a boa educação dos pacientes e cuidadores no uso dos produtos. 
Vantagens e desvantagens da via parenteral 
As razões comuns para a administração parenteral de medicamentos são:  
A necessidade de atingir rapidamente as concentrações terapêuticas e os efeitos das substâncias ativas.  
Uma baixa biodisponibilidade quando administrado por via oral.  
A concentração plasmática da substância ativa deve ser cuidadosamente controlada para evitar subdosagem ou sobredosagem.  
O paciente está inconsciente ou resiste à cooperação, ou quando a via enteral não é possível (após uma grande cirurgia abdominal
ou uma doença crítica).  
Alguns medicamentos são administrados por via parenteral por uma combinação dessas razões.  
A via parenteral também tem algumas desvantagens: 
A produção é cara.  
Sempre existe o risco de infecção.  
Uma injeção é uma forma de administração inconveniente para a maioria dos pacientes.  
Há uma chance de dano ao tecido na área da injeção. Possíveis erros na via de administração.  
Os efeitos colaterais ou reações alérgicas podem aparecer rapidamente, requerem ação imediata e causar danos maiores em
comparação com outras vias de administração.  
O ar injetado acidentalmente pode produzir uma embolia.  
A administração requer conhecimentos e habilidades específicas de uma pessoa autorizada e qualificada.  
Uma infusão traz problemas específicos como:
- Oclusão do conjunto de infusão  
- Formação de um biofilme na linha de infusão que aumenta o risco de infecção  
A infusão não é amigável para o paciente, porque a mobilidade do paciente é reduzida e a inserção e manutenção da linha de infusão
é agravante. A inserção e manutenção da linha de infusão exige muito trabalho. 
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Produtos parentais mal preparados ou administrados podem causar danos ao paciente, como formação de trombos, reações de
hipersensibilidade graves e infecção. Devido às desvantagens da via parentérica, outras vias de administração são preferidas. A via
parenteral só é considerada quando outras vias não podem ser utilizadas ou quando a substância ativa só pode ser administrada por
via parenteral. Este é frequentemente o caso de pacientes hospitalizados e especialmente de pacientes em terapia intensiva e outros
pacientes em estado crítico. 
Definições
A Farmacopeia Europeia (Ph. Eur.) O Ph. Eur. define preparações parenterais como “preparações estéreis destinadas à administração
por injeção, infusão ou implantação no corpo humano ou animal”. 
Eles são categorizados como: 
Injeções (soluções, emulsões ou suspensões)  
Infusões (soluções aquosas ou emulsões com água como fase contínua, principalmente isotônicas com sangue, destinadas à
administração em grande volume)  
Concentrados para injeções ou infusões (destinados a serem administrados por injeção ou por infusão após diluição)  
Pós para injeções ou infusões (sólidos estéreis que resultam em uma solução quando misturados com a quantidade certa da
solução de reconstituição recomendada; a esta categoria pertencem as preparações liofilizadas)  
Géis para injeções (liberação prolongada da substância ativa após a injeção) 
Implantes (formas sólidas de administração que liberam a substância ativa por um período de tempo prolongado) 
Nos países europeus, volumes maiores que 10 mL são raramente administrados por injeção. Mas é difícil definir um limite estrito para
os volumes a serem injetados ou infundidos. 
De acordo com a Farmacopeia dos Estados Unidos (USP), a formulação parenteral pode ser dividida em duas categorias:
Produto Parenteral de Pequeno Volume (SVP) até um volume de 100 mL  
Produto Parenteral de Grande Volume (LVP) com um volume> 100 mL. 
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Tipos e Vias de administração parenteral
A forma e local apropriado de administração de forma farmacêutica parenteral  deve atender às necessidades médicas do paciente. 
Os critérios que devem ser considerados são: início e duração da atividade farmacológica, local de ação terapêutica, o volume a ser
administrado, internamento ou ambulatorial. 
As características farmacocinéticas e farmacodinâmicas da substância ativa determinam principalmente se uma injeção em bolus (�⁄�
uma grande quantidade de uma vez) ou uma administração contínua por infusão ou bomba de injeção é apropriada. 
Uma substância ativa com longa duração de ação ou meia-vida longa pode ser administrada por injeção em bolus. 
Substâncias com curta duração de ação ou meia-vida curta devem ser administradas continuamente se uma ação contínua for
necessária. 
A via de administração de parenterais depende também do tipo, isto é, solução, emulsão, suspensão. 
Soluções aquosas e emulsões do tipo O / A (tamanho de partícula da fase dispersa <1 μm) podem ser administradas por via
intravenosa. Os volumes de injeção geralmente chegam a 5–10 mL. Volumes maiores de soluções aquosas ou emulsões são
geralmente administrados por infusão em intervalos de tempo de 15 minutos até continuamente. 
Alguns medicamentos tóxicos (antineoplásicos, vasoconstritores) ou que causam lesões nos tecidos só podem ser administrados por
via intravascular. 
As suspensões parenterais e os produtos à base de óleo devem ser administrados por via subcutânea ou intramuscular. 
O volume da injeção subcutânea normalmente é de 1 mL. Para aumentar o volume aplicável no local da aplicação subcutânea, pode-
se adicionar hialuronidase à formulação. O volume de injeção intramuscular também é pequeno, geralmente 1–3 mL ou até 10 mL em
doses divididas. 
Métodos de administração
Os produtos parenterais podem ser administrados por: 
Injeção direta (bolus) 
Infusão por gravidade 
Injeção / infusão por bomba 
Durante a circulação extracorpórea. 
Diferentes tipos de veias podem ser perfurados para serem usados para administração intravenosa: 
Pequenos vasos venosos (por exemplo, veias no antebraço)  
Vaso venoso de tamanho médio (por exemplo, veia braquial)  
Grandes veias centrais (por exemplo, veia jugular ou veia subclávia)  
Uma infusão também pode ser administrada por via subcutânea. No entanto, o volume a ser administrado é limitado a 20–30 mL por
24 h. 
Durante os procedimentos de circulação extracorpórea, como a hemodiálise, um líquido parenteral pode ser administrado por meio
de portas nos dispositivos de diálise. 
Vias de Administração  
As vias de administração parenteral comumente usadas são: 
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Intravenosa  
Subcutânea  
Intracutâneo  
Intramuscular  
As injeções intravenosas são injetadas na veia, portanto, na direção do coração para diminuir a chance de sangramento no local da
punção (como ocorreria facilmente se fosse injetada por via intra-arterial). Por esta via, a substância ativa se espalha muito
rapidamente pelo sistema circulatório. 
As injeções subcutâneas são injetadas no tecido conjuntivo subcutâneo do braço, parte superior da perna, abaixo ou acima da cintura
ou na parte superior das nádegas. A absorção das substâncias ativas ocorre através da parede vascular dos pequenos vasos do tecido
conjuntivo. Heparinas e insulinas são geralmente injetadas por via subcutânea. 
A injeção intracutânea é feita na camada derme da pele, que é o tecido localizado sob a epiderme. É frequentemente feito como uma
medida diagnóstica, como para teste de tuberculose (teste de triagem para tuberculose conhecido como teste de dente) e teste de
alergia (colocar quantidades muito pequenas do antígeno ou alérgeno suspeito em uma solução sob a pele). 
As injeções intramusculares são administradas no músculo deltóide do braço ou músculos vasto lateral na face anterolateral do meio
ou da coxa. Outras vias mais específicas são empregadas para a administração da substância ativa diretamente no local terapêutico. 
Para administração no sistema nervoso central, é usada a via de injeção intra-tecal, epidural ou intracisternal. 
A injeção intratecal é uma injeção no canal espinhal, mais especificamente no espaço subaracnóideo, de modo que alcance o líquido
cefalorraquidiano e é útil em aplicações de anestesia espinhal, quimioterapia ou tratamento da dor. Essa via também é usada para o
tratamento de infecções com antibióticos, principalmente pós-neurocirúrgica. Os medicamentos administrados por via intratecal não
devem conter nenhum conservante. Métodos de Administração Os parenterais podem ser administrados por: Injeção direta (bolus)
Infusão por gravidade Injeção / infusão por bomba Durante a circulação extracorpórea. 
Diferentes tipos de veias podem ser perfurados para serem usados para administração intravenosa: Pequenos vasos venosos (por
exemplo, veias no antebraço); Vaso venoso de tamanho médio (por exemplo, veia braquial); Grandes veias centrais (por exemplo, veia
jugular ou veia subclávia). Uma infusão também pode ser administrada por via subcutânea. No entanto, o volume a ser administrado
é limitado a 20–30 mL por 24 h. Durante os procedimentos de circulação extracorpórea, como a hemodiálise, um líquido parenteral
pode ser administrado por meio de portas nos dispositivos de diálise. 
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Aspectos Biofarmacêuticos
A taxa de absorção da substância ativa e a subsequente duração da ação serão determinadas por: 
Natureza do veículo  
Características físico-químicas da substância ativa  
Interação da substância ativa com veículos, tecidos e fluidos corporais  
A ação rápida é requerida em casos de emergência, por ex. parada cardíaca, choque anafilático ou asma grave. Soluções aquosas
 administradas por via intravenosa são adequadas para um rápido início de ação. 
Enquanto a ação prolongada  é alcançada por uma via de administração diferente e por diferentes formulações. Em geral, por
exemplo, as suspensões parenterais têm um início tardio e uma atividade prolongada em comparação com as soluções parenterais. 
Administração intramuscular resulta em um início de ação retardado porque a substância ativa tem que ser absorvida no músculo,
passar através das paredes dos capilares para ser transportada através da corrente sanguínea para chegar ao local de ação. Como a
maioria dos capilares é fenestrado, todas as substâncias, sejam lipossolúveis ou não, cruzam a parede capilar a taxas extremamente
rápidas em comparação com suas taxas através de outras membranas corporais. Além disso, a natureza da formulação afeta a taxa de
absorção dos medicamentos administrados por via intramuscular. 
Efeitos colaterais e toxicidade 
A administração parenteral pode estar associada a dor e efeitos colaterais adicionais e reações tóxicas. Estas reações podem ser mais
rápidas e intensas do que na administração oral ou cutânea e podem necessitar de intervenção rápida. Os tipos relevantes de reações
adversas são hipersensibilidade a proteínas, (trombo) flebite, dor, extravasamento e danos por partículas estranhas.
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Aspectos Farmacotécnicos
Propriedades das preparações parenterais 
Como qualquer outra forma  farmacêutica, os produtos parenterais devem atender aos padrões de qualidade descritos nas
farmacopéias e  serem seguros para os fins a que se destinam. 
Essas preparações geralmente são fornecidas em recipientes de vidro ou plástico de dose única ou, mais frequentemente, em
seringas ou canetas pré-cheias para facilitar o uso. 
Devem atender aos seguintes critérios compendiais mínimos:
Ser estéril 
Livre de pirogênio  
Ser transparente ou praticamente isento de partículas visíveis e estar livre de partículas invisíveis (conforme exigido pela EP, USP e
JP)
Não mostrar evidências de separação de fases (emulsões) ou formação de agregados (dispersões aquosas, como preparações de
anticorpo monoclonal injetável).
Em suspensões, o uso de um tamanho de partícula apropriado de modo que qualquer sedimento se disperse prontamente após a
agitação para fornecer uma formulação estável e garantir que a dose correta possa ser retirada e injetada é fundamental. 
A esterilidade pode ser alcançada usando uma série de técnicas de esterilização adequadas à formulação. 
Se nenhum processo de despirogenação for usado durante a preparação dos medicamentos estéreis, o uso de ingredientes
farmacêuticos livres de pirogênios (substâncias medicamentosas ou ingredientes farmacêuticos ativos e excipientes) serão
necessários.
As preparações parenterais podem exigir o uso de excipientes biocompatíveis que são selecionados de acordo com a aplicação
específica e incluídos na concentração mínima eficiente. 
A funcionalidade desses excipientes é a seguinte: 
Tornar a preparação isotônica em relação ao sangue (glicose / dextrose, manitol, cloreto de sódio) 
Ajustar o pH aos níveis fisiológicos (minerais ou ácidos orgânicos ou sais) 
Prevenir a degradação das substâncias medicamentosas (estabilizador) 
Garantir ou aumentar a solubilidade da substância medicamentosa 
Fornecer preservação antimicrobiana adequada (aplicável apenas a preparações multidose). 
Deve-se enfatizar que os excipientes não devem afetar adversamente a ação medicamentosa pretendida do medicamento, nem na
concentração usada causar toxicidade ou irritação local indevida.
Desafios de formulação 
O principal desafio com as formas de dosagem parenteral é atingir a compatibilidade do fármaco e do excipiente (ou seja, eliminar a
formação de impurezas por degradação do fármaco ou a formação de uma nova entidade química entre o fármaco e os excipientes),
bem como evitar a lixiviação / questões de adsorção entre a preparação e o recipiente principal. 
No que diz respeito às soluções, as substâncias medicamentosas devem ser solúveis e permanecer solúveis durante todo o prazo de
validade do medicamento. Quando os fármacos são pouco solúveis, a dissolução pode ser conseguida usando co-solventes,
surfactantes ou um pró-fármaco solúvel, ou um intensificador de solubilidade como uma ciclodextrina, que formará um complexo de
inclusão. 
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O valor do pH é um dos aspectos críticos das preparações parenterais, que deve estar o mais próximo possível dos níveis fisiológicos.
Em certos casos, no entanto, pode ser necessário encontrar um meio-termo entre garantir a estabilidade da substância
medicamentosa(como para peptídeos que precisam de um pH alcalino ou proteínas que requerem um pH próximo ao seu ponto
isoelétrico) e o pH fisiológico. 
Em todas as situações, as preparações de grande volume (LVPs), definidas como superiores a 100 mL, não devem conter tampão de
pH; o sangue fornece um efeito tampão que pode competir com o medicamento injetado. 
A estabilidade da substância medicamentosa é outra questão crítica que os formuladores enfrentam durante o desenvolvimento do
medicamento. Substâncias medicamentosas instáveis levam à formação de impurezas que comprometem o uso seguro da
preparação. 
Quando o uso de um estabilizador for justificado (como o uso de manitol como eliminador de radicais livres ou cisteína em uma
solução injetável de paracetamol), ele deve ser incluído na concentração mínima demonstrada ser eficiente na liberação e durante
todo o prazo de validade .
Com pós para injeção ou infusões derivadas de um processo de liofilização, o uso de um agente de volume (como o manitol) e / ou
um crioprotetor pode ser necessário se a(s) substância(s) ativa(s) sozinha(s) forem incapazes de formar um " bolo." 
Finalmente, o processo de esterilização deve ser selecionado de acordo com as características da preparação parenteral (esterilização
a vapor para soluções aquosas e calor seco para soluções não aquosas) e a natureza do recipiente primário. 
Árvores de decisão, como demonstrado abaixo são utilizadas para a seleção do processo de esterilização apropriado para produtos
aquosos ou soluções não aquosas, incluindo produtos semissólidos e em pó seco. A eficiência do processo de esterilização deve ser
demonstrada por meio de estudos de validação, utilizando indicadores biológicos apropriados. 
Substância ativa  
A via parenteral é usada para tanto para a administração de moléculas "pequenas", bem como para moléculas "grandes" (proteínas,
anticorpos monoclonais, vacinas, imunoglobulinas). 
A solubilidade da substância ativa pode ser melhorada por modificações químicas (mudança de pH, uso de tampão, derivatização,
complexação, formação de sal) e outras técnicas (uso de excipientes como surfactantes, solubilizantes, ciclodextrinas e fosfolipídios). 
Tampões e ajuste de pH: Para substâncias que são ionizáveis, a solubilidade aquosa pode ser aumentada pelo ajuste do pH. 
Formação de Sal: Sais de substâncias ativas ácidas e básicas apresentam, em geral, maior solubilidade do que suas
correspondentes formas ácidas ou básicas.  
Ex. Haloperidol é quase insolúvel em água (<0,1 mg / mL), mas o cloridrato de haloperidol se dissolve até 3 mg / mL. A formação de
sal de haloperidol com ácido lático ou tartárico resulta em aumento da solubilidade em água e permite a produção de solução
injetável de haloperidol (Haldol®) com concentração de até 5 mg / mL. 
Por outro lado, a diminuição da solubilidade de uma substância e a formulação como suspensão podem ser vantajosas.
Ex. A duração da ação da insulina é aumentada pela formação de sais com protamina e zinco com menor solubilidade e menor taxa
de dissolução da insulina. 
Complexação: A solubilidade aquosa de uma substância ativa com baixa solubilidade em água pode ser aumentada por
complexação molecular com ciclodextrinas, polividona e macrogóis. 
Veículo 
Água para injetáveis é o veículo preferido para o preparo de soluções parenterais (injeções e infusões). Quando a substância ativa é
pouco ou não solúvel em água, podem ser utilizados co-solventes ou veículos não aquosos, ou podem ser utilizadas formas de
dosagem, tais como lipossomas ou microesferas. 
Co-solventes:  diminuem a tensão superficial da água, resultando no aumento da solubilidade de substâncias ativas pouco solúveis
em água. Os co-solventes mais usados em injeções licenciadas são etanol, glicerol, propilenoglicol e macrogóis. 
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A combinação de propilenoglicol e etanol é comumente usada para dissolver substâncias ativas lipofílicas. Após diluir o concentrado
para perfusão ou injeção com uma solução aquosa ou com sangue, a substância ativa pode precipitar. Isto é devido à diluição
concomitante do(s) co-solvente(s) e soluções supersaturadas. 
A ocorrência ou não de precipitação em misturas de água e co-solventes pode ser calculada em analogia ao cálculo da chance de
precipitação na água. 
Soluções supersaturadas de compostos fracamente solúveis em água são inerentemente propensas a recristalização com o tempo. Se
os princípios de formulação e processos de produção apropriados forem utilizados, tais sistemas podem representar uma opção de
formulação para injeção de substâncias ativas pouco solúveis em água. No entanto, a cristalização não é previsível. Sérios problemas
clínicos foram relatados quando precipitados causaram bloqueios venosos. 
Solventes Lipofílicos: Óleos vegetais como óleo de semente de algodão, óleo de amendoim e óleo de soja podem dissolver
substâncias muito lipofílicas. Também produtos lipofílicos semi-sintéticos, como miristato de isopropila e triglicerídeos de cadeia
média, são usados em líquidos parenterais licenciados. Eles são estáveis e incolores. 
As formulações oleosas injetáveis são administradas apenas por injeção intramuscular, proporcionando um depósito para a
administração sustentada do fármaco. 
Ex1. Um bom exemplo é o produto de injeção de liberação prolongada à base de óleo que contém haloperidol esterificado em um
decanoato dissolvido em óleo de gergelim. O volume a ser injetado é depositado profundamente no músculo glúteo e forma um
depósito de onde é lixiviado ao longo de um período de 1 mês para a corrente sanguínea de acordo com seu coeficiente de partição
óleo / água. Este fenômeno, juntamente com o tempo necessário para que as enzimas circulantes hidrolisem o éster na base ativa, é
responsável pelo prolongado tempo de ação dessa formulação. 
Ex2. Outro exemplo de formulação de ação prolongada é a injeção intramuscular de fulvestrant, dissolvido em óleo de rícino e
solventes orgânicos. É administrado uma vez por mês para tratar o câncer de mama. 
Para administração intravenosa ou intramuscular, os ativos solúveis em óleo podem ser formulados como uma emulsão óleo-água.
Quando administrado por via intravenosa, é essencial que o tamanho da gota seja aproximadamente do mesmo tamanho que as
partículas lipídicas que circulam no sangue, os quilomícrons (0,2–3 µm). 
Uma emulsão típica contém 10–20% de óleo de soja, 2% de glicerol e 1% de lecitina de ovo. Essas emulsões não podem ser
autoclavadas. A coalescência das gotículas da fase interna é um sinal típico de instabilidade. 
As misturas de nutrição parenteral total all-in-one são um exemplo típico de emulsão administrada por via parenteral.
Surfactantes 
Esses excipientes reduzem a tensão superficial e aumentam a solubilidade das substâncias ativas lipofílicas em meio aquoso;
Lecitina, vários fosfolipídios, polissorbato (Tween®) e óleos de rícino de polioxietileno, como Cremophor® EL, podem ser usados em
injeções. 
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Isotonia
Osmolaridade é a propriedade que em grande parte determina a aceitabilidade fisiológica de uma variedade de soluções usadas para
fins terapêuticos e nutricionais.
A consideração farmacêutica e terapêutica dos efeitos osmóticos tem sido, em grande parte, relacionada com os efeitos colaterais
dos medicamentos oftálmicos e parenterais. Mais recentemente, essa consideração foi estendida à nutrição parenteral total (central),
à hiperalimentação enteral (alimentação por “tubo”) e às fórmulas infantis com líquido concentrado. Além disso, nos últimos anos, a
importância da osmometria de soro e urina no diagnóstico de muitas condições patológicas foi reconhecido. 
Geralmente, é aceito que os efeitos osmóticos têm um papel importante na manutenção da homeostase (o estado de equilíbrio no
corpo vivo,no que diz respeito a várias funções e à composição química dos fluidos e tecidos, por exemplo, temperatura, frequência
cardíaca , pressão arterial, teor de água ou açúcar no sangue). Esses efeitos ocorrem dentro ou entre células e tecidos, onde não
podem ser medidos. Um dos problemas mais críticos na medicina clínica é a manutenção de fluidos corporais adequados e o
equilíbrio adequado entre os volumes de fluido extracelular e intracelular em pacientes gravemente enfermos. 
O fluido corporal oscila continuamente em torno de um estreito ponto de ajuste determinado geneticamente na faixa normal de
280–295 mOsmol / L. 
A osmolaridade é um aspecto importante em injeções parenterais, seus efeitos dependem de fatores como o grau da tonicidade, a
concentração, o local da injeção, o volume injetado, a velocidade da injeção e a rapidez de diluição e difusão.  
As soluções hipotônicas e hipertônicas  devem ser administradas lentamente, em pequenos volumes, ou em uma grande veia como a
subclávia, onde a diluição e distribuição ocorrem rapidamente.  
Soluções que diferem do soro em tonicidade geralmente causam irritação do tecido, dor na injeção e alterações eletrolíticas, os
efeitos dependendo do grau de desvio da tonicidade, variam: 
A infusão excessiva de fluidos hipotônicos pode causar inchaço dos glóbulos vermelhos, hemólise e invasão de água das células
do corpo em geral. Quando isso está além da tolerância do corpo, resultam em intoxicação por água, com convulsões e edema,
como edema pulmonar. 
A infusão excessiva de fluidos isotônicos pode causar um aumento no volume de fluido extracelular, o que pode resultar em
sobrecarga na circulação. 
A infusão excessiva de fluidos hipertônicos leva a uma ampla variedade de complicações. 
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        Por exemplo,  uma grande administração IV de fluido hipertônico, rico em glicose, pode ocasionar: hiperglicemia, glicosúria e
desidratação intracelular, diurese osmótica, perda de água e eletrólitos, desidratação e coma. 
Determinação da osmolaridade 
Quando os produtos parenterais são hipotônicos, geralmente podem ter tonicidade ajustada pela adição de glicose ou cloreto de
sódio. Enquanto que as soluções hipertônicas não podem ser ajustadas. Nesse caso, uma alternativa é prepará-las a partir de um pó
seco, que pode ser reconstituído em um volume de solvente diferente. 
A necessidade de determinação experimental da osmolalidade é estabelecida. Em relação a isso, existem quatro propriedades de
soluções que dependem apenas do número de partículas na solução:
Elevação da pressão osmótica 
Elevação do ponto de ebulição,  
Diminuição da pressão de vapor  
Diminuição  do ponto de congelamento.  
Essas são chamadas de propriedades coligativas e, se uma delas for conhecida, as outras podem ser calculadas a partir de seu valor. A
elevação da pressão osmótica é a mais difícil de medir de forma satisfatória. 
A elevação do ponto de ebulição pode ser determinada, mas os valores são bastante sensíveis às mudanças na pressão barométrica.
Além disso, para uma solução aquosa, a elevação do ponto de ebulição molal é consideravelmente menor do que a depressão do
ponto de congelamento. Portanto, é menos preciso do que o método do ponto de congelamento.  
A determinação da redução da pressão de vapor é muito fácil, rápida e conveniente, pode ser realizada através da utilização de um
osmômetro de pressão de vapor, que pode ter precisão de 2 mOsmol / kg. 
Outro método comumente usado é o da diminuição do ponto de congelamento, que pode ser determinado facilmente com um grau
razoável de precisão.  
Os resultados dos estudos de Lund et al.,  indicam que o ponto de congelamento do sangue humano normal e saudável é de –
0,52 ° C. Visto que a água é o meio no qual os vários constituintes do sangue são suspensos ou dissolvidos neste método, presume-
se que qualquer solução aquosa congelada a -0,52 ° C é isotônica com o sangue.  
É raro que uma solução aquosa simples do agente terapêutico a ser injetado por via parenteral tenha um ponto de congelamento de
–0,52 ° C, e para obter este ponto de congelamento é necessário adicionar algum outro soluto terapeuticamente inativo se a solução
for hipotônica (ponto de congelamento acima de –0,52 ° C) ou para diluir a solução se for hipertônica (ponto de congelamento
abaixo de –0,52 ° C).  
A prática usual é adicionar cloreto de sódio ou glicose para ajustar as soluções parenterais hipotônicas à isotonicidade. Certos
solutos, incluindo cloreto de amônio, ácido bórico, ureia, glicerina e propilenoglicol, causam hemólise mesmo quando estão
presentes em uma concentração que é isoosmótica, e tais soluções obviamente não são isotônicas e não agem como um solvente. 
De maneira semelhante, as soluções destinadas ao uso oftálmico podem ser ajustadas para ter um ponto de congelamento idêntico
ao do fluido lacrimal, ou seja, –0,52 °C. Soluções oftálmicas com pontos de congelamento mais altos geralmente são ajustados à
isotonia pela adição de ácido bórico ou cloreto de sódio. 
Se a solução for hipertônica, deve-se diluir para o preparo de uma solução isotônica, mas deve-se lembrar que algumas soluções não
podem ser diluídas sem prejudicar sua atividade terapêutica. Por exemplo, as soluções a serem usadas no tratamento de varizes
requerem uma alta concentração do ingrediente ativo (soluto) para tornar a solução eficaz. A diluição para concentração isotônica
não é indicada em tais casos. 
Na prática, em laboratórios onde o equipamento necessário está disponível, o método geralmente seguido para ajustar as soluções
hipotônicas é determinar a depressão do ponto de congelamento produzida pelos ingredientes de uma determinada receita ou
fórmula e, em seguida, adicionar uma quantidade de um soluto inerte adequado calculada para diminuir o ponto de congelamento a
–0,52 ° C, seja a solução para injeção parenteral ou aplicação oftálmica. Uma determinação final da depressão do ponto de
congelamento pode ser feita para verificar a precisão do cálculo. 
A observação do comportamento dos eritrócitos humanos quando suspensos em uma solução é o procedimento final e direto para
determinar se a solução é isotônica, hipotônica ou hipertônica.  
Se ocorrer hemólise ou alteração acentuada na aparência dos eritrócitos, a solução não é isotônica com as células. Se as células retêm
suas características normais, a solução é isotônica.
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A hemólise pode ocorrer quando a pressão osmótica do fluido nos eritrócitos é maior do que a da solução em que as células estão
suspensas, mas a reatividade química específica do soluto na solução muitas vezes é muito mais importante na produção de hemólise
do que é o efeito osmótico. Não há nenhuma evidência certa de que qualquer mecanismo de ação isolado cause hemólise. O
processo parece envolver fatores como pH, lipossolubilidade, tamanhos moleculares e iônicos das partículas de soluto e,
possivelmente, inibição da colinesterase nas membranas celulares e ação desnaturante nas proteínas da membrana plasmática.
Alguns pesquisadores testam a tonicidade das soluções injetáveis observando as variações do volume de glóbulos vermelhos
produzidos por essas soluções. Este método parece ser mais sensível a pequenas diferenças na tonicidade do que aqueles baseados
na observação de um efeito hemolítico. Muitas informações úteis sobre o efeito de vários solutos sobre os eritrócitos foram obtidas
por este procedimento.
Correção da osmolaridade 
Existem vários métodos para ajustar a tonicidade de uma solução aquosa, desde, é claro, que a solução seja hipotônica quando o
medicamento e os aditivos forem dissolvidos. 
Os métodos  mais comuns são:
Método da depressão do ponto de congelamento (abaixamento crioscópico) 
Método do equivalente de cloreto de sódio
Método do valor V da soluçãoisotônica.  
Os dois primeiros métodos seguem basicamente  três etapas, com base em cloreto de sódio. 
1. Identifique uma solução de referência e o parâmetro de tonicidade associado.  
2. Determine a contribuição do (s) medicamento (s) e aditivo (s) para a tonicidade total.  
3. Determine a quantidade de cloreto de sódio necessária subtraindo a contribuição da solução real da solução de referência.  
O resultado da terceira etapa também indica se a solução real é hipotônica, isotônica ou hipertônica. Se a solução real contribui
menos para a tonicidade total do que a solução de referência, então a solução real é hipotônica. 
Se, no entanto, a solução real contribui com uma quantidade maior para a tonicidade do que a solução de referência, a solução real é
hipertônica e pode ser ajustada para isotonicidade apenas por diluição. Isso pode não ser possível por motivos terapêuticos. 
A quantidade de cloreto de sódio resultante na terceira etapa também pode ser convertida em uma quantidade de outros materiais,
como glicose, para tornar a solução real isotônica. 
Método - Diminuição do Ponto de congelamento (Abaixamento crioscópico)
Os dados do ponto de congelamento muitas vezes podem ser empregados na solução de problemas de ajuste de isotonicidade. 
Obviamente, a utilidade de tais dados é limitada às soluções em que o soluto não penetra na membrana do tecido (por exemplo,
glóbulos vermelhos) com o qual está em contato. 
A diminuição do ponto de congelamento  de uma solução de um eletrólito não é absolutamente proporcional à concentração, mas
varia de acordo com a diluição;  
por ex., uma solução contendo 1 g de cloridrato de procaína em 100 mL tem uma depressão de ponto de congelamento de 0,12 ° C,
enquanto uma solução contendo 3 g do mesmo sal em 100 mL tem uma depressão de ponto de congelamento de 0,33 ° C , não 0,36
° C (3 × 0,12 ° C).  
Como os ajustes típicos de isotonicidade não precisam ser absolutamente exatos, são feitas aproximações. No entanto, os ajustes à
isotonicidade devem ser tão exatos quanto praticáveis ou confirmados experimentalmente. 
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Vídeos ilustrativos
Alterações morfológicas de hemáceas em meios com diferentes tonicidades.
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Esterilidade
A esterilidade pode ser definida como "a qualidade ou condição de ser estéril", enquanto a a esterilização se refere a qualquer
processo que elimina, remove, mata ou desativa todas as formas de vida presentes em uma região específica, como um medicamento
ou meio de cultura.
Embora a esterilização pareça ser um conceito absoluto, a realidade é que não é possível garantir a absoluta esterilização em nenhum
sistema real por meio de processos de esterilização acidental, devido à presença inicial de um enorme número de microrganismos
que devem ser tipicamente inativados e as condições excessivamente severas que deveriam ser alcançada uniformemente no material
a ser esterilizado para atingir a esterilidade total.  
Na verdade, a maioria dos compêndios oficiais afirmam que "esterilidade é interpretada como a liberdade de microrganismos
contaminantes viáveis. Por outro lado, o que é possível é implantar processos de esterilização que garantam que a probabilidade de
sobrevivência de microrganismos indesejados, tipicamente bactérias, seja reduzida a um nível arbitrário, mas predefinido
extremamente baixo. 
Uma maneira de classificar os métodos de esterilização é examinar o método pelo qual a inativação microbiana é alcançada.  
Os métodos de esterilização podem ser classificados como: 
1.Métodos destrutivos.  
Esses métodos alcançam a obliteração completa da biomassa microbiana, transformando os componentes das células biológicas
(proteínas, aminoácidos, ácidos nucléicos, etc.) em água, dióxido de carbono e espécies químicas inorgânicas. Isso pode ser alcançado
apenas pela imposição de temperaturas extremas sobre a biomassa, como as encontradas em incineradores, por circuitos de
inoculação diretamente flamejantes no laboratório ou pelo uso de ácidos oxidantes altamente concentrados. Este tipo de abordagem
tem uso muito limitado, uma vez que muitos produtos podem ser submetidos a um tratamento extremo sem danos. Portanto, esses
métodos não são comumente usados industrialmente, exceto para a incineração de resíduos. 
2. Métodos de inativação microbiana permanente. 
Esses métodos dependem do uso de tratamentos físicos ou químicos para alterar componentes-chave da máquina biológica da
célula para tornar as células, incluindo os endosporos, inviáveis. Como resultado, no final do tratamento, a conformação básica das
células possivelmente ainda pode ser observada sob um microscópio, mas a bioquímica das células foi tão gravemente perturbada
que as células não são mais capazes de conduzir qualquer processo biológico (ou seja, as células não são mais viáveis). 
Esses processos são muito comumente usados industrialmente e incluem o seguinte:  
            a. Métodos de esterilização térmica, como esterilização a vapor (úmido) e esterilização por calor seco, consistindo em
manter os microrganismos a uma temperatura suficientemente alta por um período de tempo suficientemente longo. A esterilização
térmica é baseada nos efeitos disruptivos da temperatura na química da vida e, portanto, é o método de esterilização mais antigo,
confiável e comum. Além disso, é o método mais importante usado industrialmente para esterilizar líquidos de alto volume, incluindo
meios de fermentação, e muitas vezes é um dos mais econômicos.
             b. Métodos de irradiação e esterilização de alta energia, baseados no uso de radiação de alta energia (por exemplo,
radiação gama) ou estado físico de alta energia (plasma). As radiações ionizantes penetrantes de alta intensidade, como os raios
gama emitidos pelo decaimento de materiais radioativos, têm um efeito esterilizante significativo. Eles são agora usados em muitas
aplicações industriais, incluindo todos aqueles casos em que a esterilização térmica não é aplicável devido à instabilidade térmica do
produto (por exemplo, droga) ou dos dispositivos (por exemplo, seringas) em esterilização. Além disso, os emissores de radiação de
intensidade mais baixa são frequentemente utilizados na manutenção da assepsia (ou seja, o estado contínuo de exclusão de
organismos prejudiciais) em áreas específicas, como laboratórios, gabinetes estéreis, circuitos de água para injeção e
equipamentos. A radiação ultravioleta (UV) é especialmente útil para este propósito. Devido ao seu poder de penetração limitado, a
luz UV é usada especialmente para manter a esterilidade no ar, em paredes e em outras superfícies planas, sem criar condições de
trabalho extremamente perigosas. 
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             c. Métodos de esterilização química, consistindo em exposição os microorganismos a alguns líquidos altamente tóxicos ou,
muito mais frequentemente, gases esterilizantes. Os produtos químicos gasosos esterilizantes mais comumente usados são cloro,
óxido de etileno, óxido de propileno, peróxido de hidrogênio, ozônio e dióxido de cloro. Eles são usados principalmente para
esterilizar equipamentos ou suprimentos médicos. Suas principais desvantagens são que têm uma eficácia de penetração
relativamente baixa, podem não ser particularmente eficazes contra esporos e seus resíduos podem interferir nos processos
subsequentes ou no produto. Além disso, sua reatividade química os torna um perigo potencial para a saúde dos operadores, e
precauções especiais devem ser tomadas para evitar ou minimizar a exposição humana.Isso, por sua vez, apresenta problemas de
manuseio. Os esterilizantes químicos também são amplamente usados como desinfetantes em laboratórios, salas limpas e outras
instalações fixas em que o objetivo principal é uma redução significativa da contagem microbiana (desinfecção) em vez da completa
inativação de todos os microrganismos (esterilização). Líquidos tóxicos, como soluções de cloro dissolvido, formaldeído, sais de
amônio quaternário, ozônio, peróxido de hidrogênio e ácido peracético, são usados principalmente para desinfecção.
3. Métodos baseados na remoção / exclusão física de microrganismos (métodos de filtração). Esses métodos se baseiam na
utilização de algum tipo de filtro, como os de profundidade e, principalmente e mais importante, os filtros membranesterilizantes,
permitindo a passagem do líquido ou do gás esterilizado, mas evitando que os microorganismos passem. A filtração estéril é obtida
usando filtros de membrana com tamanhos de poro uniformemente pequenos (0,22 ou 0,11 μm) capazes de bloquear até mesmo a
menor bactéria conhecida, Brevundimonas diminuta. Claramente, tanto o filtro quanto o sistema a jusante dele, como um recipiente
ou aparelho receptor, devem ter sido previamente esterilizado usando um dos outros métodos de esterilização. A filtração é
amplamente utilizada para a esterilização de gases (especialmente ar) por causa dos grandes volumes de fluido envolvido, baixa
contagem inicial de bactérias e menor consumo de energia e custos associados a ela. A filtração de líquidos, e especialmente a
filtração estéril, encontra aplicações importantes, especialmente na fabricação de biofarmacêuticos, mas impõe demandas intensas
sobre o elemento de filtragem (por exemplo, a capacidade de suportar diferenças de alta pressão em todo o elemento filtrante, área
de alta filtração, resistência ao método de esterilização convencional, como esterilização térmica, para esterilizar o filtro). Além disso,
a prova absoluta em processo da eficácia da filtração é difícil de estabelecer, apesar das muitas melhorias feitas na fabricação dos
filtros (por exemplo, distribuição de tamanho de poros bem definida, diferenciais de pressão previsíveis, compatibilidade química
melhorada).
A escolha de um dos métodos de esterilização e, a partir deste, a seleção do processo de esterilização específico a ser usado em cada
caso dependerá do tipo de material a ser esterilizado, seu uso pretendido, o efeito do método de esterilização no produto, e os
equipamentos e os custos operacionais. Nas indústrias farmacêutica e de biotecnologia, diferentes métodos de esterilização são
aplicados a materiais, equipamentos e produtos de diferentes composições químicas e características físicas. Os correspondentes
métodos de esterilização mais adequados dependerão de tais propriedades e, especialmente, do efeito do método de esterilização
no produto. Em resumo, quase todos os processos de esterilização atualmente usados na prática industrial se enquadram em uma
das seguintes categorias:  
Processos de esterilização térmica 
Processos de esterilização por radiação 
Processos de esterilização química
Processos de filtração estéril
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Pirogênios
No final do século 19 e particularmente no início do século 20, depois que a importância da esterilidade foi avaliada e o potencial das
terapias injetáveis foi investigado, o fenômeno da febre da injeção foi comumente relatado. A natureza do agente causador da febre
(ou pirógeno) não era conhecida, mas foi reconhecido que resistia à esterilização. 
Este pirogênio era endotoxina. 
A endotoxina é um potente modificador da resposta biológica, com uma ampla gama de efeitos, incluindo febre, choque e morte. 
A contaminação por endotoxinas de medicamentos parenterais é particularmente preocupante porque esses produtos são
administrados diretamente no corpo, contornando as barreiras protetoras da pele e da parede intestinal. Conseqüentemente, esse
tipo de contaminação  deve ser estritamente controlada para prevenir efeitos deletérios.
Em contraste, a contaminação por endotoxinas em terapias administradas por via oral e tópica geralmente não é uma preocupação
devido à eficácia da pele e da parede do intestino na prevenção da entrada de endotoxinas no sangue e em outros tecidos. 
O teste de endotoxinas bacterianas (TEB) é um dos dois testes de liberação microbiológica críticos mais comuns aos produtos
parenterais, sendo o outro o teste de esterilidade. 
Esse teste é obrigatório devido aos efeitos nocivos causados pela endotoxina. 
A alta potência da endotoxina é ilustrada por uma comparação com produtos terapêuticos. A dose mínima de endotoxina esperada
para provocar uma resposta febril em humanos em uma única administração (a dose pirogênica limite) é de cinco unidades de
endotoxina por quilograma de peso corporal (5 EU / kg) (1), que é equivalente a aproximadamente 0,5 ng / kg de Endotoxina de
Escherichia coli. 
Essa  ordem de magnitude é menor do que as doses da maioria dos medicamentos, que normalmente têm doses na faixa do
miligrama por quilograma. 
A endotoxina é claramente uma substância muito potente e seus efeitos são predominantemente deletérios. E está quase
universalmente presente no ambiente natural, é resiliente e persistente.
Protocolos restritos e específicos devem ser obedecidos para garantir que os produtos parenterais não sejam significativamente
contaminados com endotoxinas, seja de materiais componentes ou por introdução durante o processo de fabricação. 
Os produtos parenterais acabados não devem conter quantidades de endotoxina que excedam os limites especificados nas
monografias dos compêndios ou nas submissões aprovadas. Baixos níveis de endotoxina, abaixo desses limites, são tolerados por
humanos (e outras espécies).
A endotoxina é um componente estrutural do envelope celular das bactérias gram-negativas, que consiste em uma membrana
interna e outra externa. A membrana interna (citoplasmática) é uma membrana biológica típica que consiste em uma bicamada
fosfolipídica com proteínas incorporadas e é semelhante em estrutura à membrana citoplasmática de células gram-positivas. A
membrana externa compreende um folheto fosfolipídeo interno (camada) e um folheto externo, cujo principal componente é o
lipopolissacarídeo (LPS), e não o fosfolipídeo. Essencialmente, LPS é endotoxina.  
O tamanho ou peso molecular da subunidade individual de um LPS particular depende de sua estrutura. LPSs com longas cadeias de
oligossacarídeos de repetição são significativamente maiores do que aqueles com cadeias mais curtas ou sem oligossacarídeos. Dito
isto, o peso molecular de uma subunidade LPS típica é de cerca de 10.000 Da, mas pode ser menor (até alguns milhares de daltons)
ou mais, dependendo do comprimento da cadeia de oligossacarídeo de repetição. No entanto, a endotoxina raramente ocorre como
subunidade individual. 
A partir da discussão da estrutura, fica claro que o LPS é anfifílico. Ou seja, uma extremidade da estrutura é hidrofóbica (o lipídeo A) e
a outra (o polissacarídeo) é hidrofílica. Consequentemente, em solução aquosa, a tendência é que o lípido A se agregue enquanto o
oligossacárido repetido é exposto ao meio aquoso. A conformação das agregações de LPS depende dos detalhes da estrutura do
lipídio e da natureza química do meio. As estruturas incluem bicamadas e fitas micelares, hexagonais, lamelares e arranjos cúbicos. 
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A endotoxina nativa (de ocorrência natural), que é o contaminante potencial de produtos de saúde, não é uma preparação de LPS
altamente purificada. A conformação da endotoxina nativa, com suas proteínas associadas e outros fragmentos de membrana não
LPS, difere novamente e tende a ser menos ordenada, mas normalmente estará presente como agregados. 
Os fatores ambientaisque influenciam o estado de agregação da endotoxina incluem temperatura, pH, sais (particularmente cátions
divalentes), surfactantes, sais biliares e proteínas. Mudanças na bioatividade da endotoxina foram relatadas com mudanças no estado
de agregação (conforme medido pelo coeficiente de sedimentação). 
A noção de que a agregação da endotoxina é necessária para sua atividade, incluindo a endotoxicidade, e sustentada por alguns
autores,  enquanto outros sustentam que são as subunidades individuais é que são a forma ativa. 
É importante ressaltar, que nem o estado de agregação da endotoxina nem sua atividade são fixos. Ambos podem mudar com as
condições químicas e com a entrada ou remoção de energia. 
É bom que aqueles que estão realizando TEBs tenham isso em mente. Além disso, diferentes endotoxinas podem não se comportar
da mesma maneira quando as condições mudam. Aqueles que realizam testes de endotoxina podem encontrar diferenças entre o
comportamento da endotoxina nativa em uma amostra e o da endotoxina purificada (LPS) da preparação padrão. 
Quando isso ocorrer, será necessário determinar as condições de teste nas quais ambas as endotoxinas se comportam de maneira
semelhante. Além de ser anfifílica, a endotoxina carrega uma carga negativa líquida, pelo menos em soluções aquosas de pH 4 ou
superior. A carga negativa evita o grau de agregações que poderiam ocorrer à medida que cargas semelhantes se repelem,
contrariando a tendência da porção lipídica hidrofóbica da estrutura de se agregar. Isso explica, pelo menos em parte, o mecanismo
pelo qual os cátions no meio permitem formações de agregações maiores. Os cátions neutralizam as cargas negativas e a tendência
dos LPS de se repelirem. Os cátions divalentes podem neutralizar as cargas negativas de duas subunidades adjacentes e formar
pontes catiônicas ligando as duas, promovendo ainda mais a agregação. 
Finalmente, a endotoxina é muito estável e não é destruída facilmente. As condições normais de esterilização geralmente não são
suficientes para destruir a endotoxina. Isso se aplica não apenas ao calor seco e esterilização a vapor, mas também ao óxido de
etileno (EtO) e à radiação-gama.  
Detecção de pirogênio
Quando o objetivo é verificar o conteúdo de endotoxinas que existem em uma amostra, o LAL (Limulus Amebocyte Lysate) método
substituiu amplamente o teste de pirogênio que costumava ser conduzido através do uso de coelhos, não apenas no experimentos
que são conduzidos em pesquisa, mas também na indústria farmacêutica e alimentar, bem como outras indústrias.  
Existem várias razões pelas quais o método LAL é usado para o detecção de endotoxinas bacterianas como método preferível ao de
coelhos. 
O teste de pirogênio em coelhos é baseado na medição do aumento da temperatura do coelho ao ser injetado um produto que pode
conter um contaminante do tipo pirogênico. 
Os pirogênios, como o próprio nome sugere, referem-se a todas as substâncias que causam o aumento da febre, também conhecidas
como pirexia. Ao entrar em contato com os pirogênios, os coelhos apresentam aumento de temperatura, assim como os humanos.
Por esse motivo e por se tratarem de animais utilizados em laboratórios para diversos fins, foram escolhidos para realizar este teste. 
As desvantagens do teste de pirogênio utilizando coelhos para a determinação de endotoxinas bacterianas são numerosas: É um
teste longo e, portanto, a temperatura do animal deve ser medida durante as 3 horas após a injeção, em intervalos de
aproximadamente 30 minutos. 3 animais precisam ser usados para cada dissolução a ser testada. É necessário que esses animais não
tenham apresentado aumento de temperatura nas duas semanas anteriores e os mesmos animais não devem ser utilizados até
decorridos dois dias após o teste. 
Além disso, vários animais que apresentam temperatura estável devem ser escolhidos para o grupo controle, por isso é necessário ter
uma grande quantidade de coelhos para realizar o teste, principalmente em indústrias com grande volume de produção. Portanto,
pode ser considerado um teste trabalhoso. Se se pensa que muitas outras substâncias endógenas e exógenas podem estar causando
o aumento da temperatura dos coelhos, isso pode se revelar um fator altamente limitante para usar este teste para a determinação
de endotoxinas em uma amostra. 
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Embora seja difícil que este teste dê um falso positivo como resultado devido às substâncias endógenas devido ao grande número de
assuntos usados para o teste, é muito comum ver que ele fornece resultados errados quando as amostras estão contaminadas com
um vírus, fungo ou qualquer outro tipo de substância que possa causar febre em todos os animais utilizados no teste. É um método
inadequado para determinar os pirogênios em medicamentos, como os esteroides, os que são usados na quimioterapia e outros que
pertencem a um grande grupo de substâncias, que, quando administradas, podem fazer com que os organismos respondam com
mecanismos que levam a aumento da temperatura, sendo este mais um dos fatores altamente limitantes deste teste quando são
feitas pesquisas com medicamentos ou quando se trata de controle de endotoxinas na indústria farmacêutica. Uma desvantagem
muito importante é o fato de que o conteúdo de endotoxinas presentes em uma amostra não pode ser quantificado por meio desse
teste, que oferece apenas um resultado qualitativo. Existem produtos, como os que contêm plasma sanguíneo, em que as
endotoxinas se encontram na forma inativa que não provoca febre ao serem inoculadas, mas que, com o passar do tempo, devido
aos processos metabólicos pelos quais passa o plasma no organismo, torna-se tóxico. Nessas ocasiões, o método do pirogênio em
coelhos dá um resultado falso negativo. 
O método LAL leva o nome do fato de ser realizado com a hemolinfa do caranguejo-ferradura, cujo nome científico é Limulus
Polyphemus. A hemolinfa desse caranguejo passa por um processo de coagulação na presença de endotoxinas bacterianas, que é o
pirógeno que tem maior probabilidade de ser encontrado como contaminante de material de laboratório e reagentes. A coagulação
da hemolinfa no caranguejo Limulus foi descoberta na década de 60 e, após vários anos, a mesma equipe de pesquisadores
desenvolveu um teste para a determinação qualitativa e quantitativa de endotoxinas usando um lisado de amebócito do caranguejo-
ferradura. Este teste passou rapidamente a ser utilizado como método de determinação de endotoxinas bacterianas, oferecendo as
vantagens de possuir baixo limite de detecção, melhor especificidade, menor custo, menor variabilidade dos resultados e
possibilidade de quantificação do teor de endotoxinas. 
Embora esse teste também utilize animais, devido às suas consequências éticas, a extração da hemolinfa não afeta a vida dos
caranguejos. 
O teste LAL é o método atualmente recomendado pelas principais empresas farmacêuticas e organismos internacionais que
regulamentam o controle de qualidade de medicamentos e alimentos. Há casos, como é o caso da vacina contra hepatite B, em que o
teste de pirogênio em coelhos ainda continua a ser usado para detecção de endotoxinas. Porém, tem-se estudado que, ao se realizar
o teste LAL com o método gel-coágulo e preparar as amostras de vacina de maneira adequada, é mais conveniente utilizar o método
LAL também nas amostras onde há interferência que provoca falsa resultados. 
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Embora o teste LAL seja específico para endotoxinas e não detecte outras substâncias pirogênicas, as endotoxinas são os pirogênios
mais comuns e prejudiciais em muitos medicamentos, razão pela qual um resultado negativo do teste LAL é suficiente para
determinar que a amostra é adequada para uso. Desde o início da procura de reagentes e kits para a realização do teste LAL,
diferentesempresas em todo o mundo têm trabalhado nesta área. 
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Áudio-Slide
Parte 1 - https://youtu.be/t4kBo12iGDk 
Parte 2 - https://youtu.be/Fvbe3Zh-IDE 
Parte 3 - https://youtu.be/bRLyy48m05g 
Parte 4 - https://youtu.be/3pWA-QU5gdQ 
Slides pdf(Link) 
https://youtu.be/t4kBo12iGDk
https://youtu.be/Fvbe3Zh-IDE
https://youtu.be/bRLyy48m05g
https://youtu.be/3pWA-QU5gdQ
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