PCC - BIOLOGIA MOLECULAR

Prévia do material em texto

LICENCIATURA EM CIÊNCIAS BIOLÓGICAS
PRÁTICA COMO COMPONENTE CURRICULAR
BIOLOGIA MOLECULAR
NOME: PAULA LOPES GONÇALVES
MATRÍCULA: 2052350
POLO SERRA II - ES
2020
ENZIMAS DE RESTRIÇÃO
As enzimas de restrição são endonucleases que clivam em sequências específicas do DNA. Quase todas as enzimas de restrição reconhecem sequência palíndrômicas, isto é, quando uma das fitas for lida de 5’ --> 3’ e a outra no mesmo sentido, elas serão as mesmas. 
Exemplos: 
1) A enzima EcoRV reconhece a seguinte sequência: 5’ GATATC 3’ 
3’ CTATAG 5’ 
2) A enzima TaqI reconhece a seguinte sequência : 5’ TCGA 3’ 
3’ AGCT 5’
 A enzima 1 foi isolada da Escherichia coli (Eco) e a enzima 2 foi isolada de Thermus aquaticus (Taq). A sequência reconhecida pela enzima de restrição é chamada de sítio de restrição. 
As enzimas de restrição são muito utilizadas em laboratórios de Biologia Molecular. 
Atividade 
A sequência abaixo foi obtida de um banco de dados que armazena sequências. Essa sequência é fita simples e está representada seguindo a convenção, ou seja, de 5’ --> 3’. 
GCCTTCAATGGCAAGCGGTCTGGAATCCTACTTCTTGAATCGGCACGGTGTCATTACGGGCGGGGGCCAGAACAACGTCCCTGGACATCACACCTAGCCCGTGCGACGGCGGAAACCTTCGCCGGCGCAGGCTTCGACGTGACCCTCATCGCGGAACCCTCCCCCACCCCAGTGTTGGCGTGGCTGGTGCGCTCACGGCGAATGGACGTGGGCGTGCAGATCACCGCCTCGCACAATCGAATTCAGGACAACGGCTACAAGCTGTACCTGGACGGCGGCTCTCAGCTGGTCTCCCCCGCCGACCGGCAGATCGAGGAGCACATTGCCGCCCAGCCAACTGACGCGGCGAAGATCCCCCGCTCCGAGGCGAAGTCTGTAGACCTGTCCGTAGTCTCCGGCTATGTCACCGAGCTAAGTACCCTGGTGGCCACCGGCCGCCAATCCGAGCTGGCGCCGCGGCGGAAGCTGAAGATCCTCTACACCCCCATGCACGGCGTGGGCGGCAATGCCCTGGAGTGGGCCTTACGTGAATTCGGCTTCGGCAACGTGCACGCGGTGGCCTCGCAGCGCTGGCCGGACCCGACCTTCCCGACTGTGGACTTCCCCAACCCTGAGGAGCCGGGTGCCACCGACGCGCTGCTGGAAGAAGCCCGCGCCATCGATGCGGACCTGCTGATCGCCCTGGATCCGGATGCGGACC
Sabe-se que a enzima de restrição BamHI corta um DNA fita dupla do seguinte modo e no seguinte sítio (veja figura).
a) Quantos sítios de restrição existem nessa sequência? 
	6 sítios de restrição.
b) Faça uma pesquisa sobre os tipos de cortes das enzimas de restrição.
Descreva-os e classifique o corte da enzima BamHI.
Enzimas são proteínas que possuem atividade catalítica dentro destas enzimas de restrição conhecida como endonuclease, são enzimas que cortam cadeias fosfodiéster a partir de uma sequência de reconhecimento, este reconhecimento específico de DNA nas quais são chamadas região de restrição, as enzimas de restrição são produzidas através das bactérias como mecanismo de defesa, contra infecções por fagos, as endonucleases tipo II são enzimas de restrição que pode gerar dois tipos diferentes de cortes, dependendo se eles cortam ambas as cadeias no centro da sequência de reconhecimento, ou cada fio mais perto de uma das extremidades da sequência de reconhecimento. 
O primeiro corte vai gerar “termina sem corte” sem saliências de nucleotídeos. Este último, gera “pegajoso” ou “coesa” termina, porque cada fragmento resultante de DNA tem uma saliência que complementa os outros fragmentos. Ambos são úteis em genética molecular para a tomada de ADN recombinante e proteínas.
c) O gel abaixo apresenta, na canaleta 1, um padrão de peso molecular onde as bandas representam sequências com 50bp, 80bp, 200bp e 1000pb. Suponha que o DNA acima tenha sido clivado pela enzima PvuII e represente, na canaleta 2, os fragmentos resultantes do corte.