PCR, ELETROFORESE EM GEL E ENZIMAS DE REPLICAÇÃO

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ALICE – MEDICINA – T4 
BIOLOGIA CELULAR E 
MOLECULAR 
 
PCR 
- Principais técnicas utilizadas: DNA » 
PCR » Sequenciamento; 
• Testagem para presença de 
mutações genéticas; 
• Estudos de alterações genéticas 
com implicações terapêuticas; 
• Estudos de imunogenéticas; 
• Presença de agentes patogênicos; 
• Estudos de diversidade genômica; 
• Investigações forenses (DNA 
fingerprinting); 
• Análises de expressão, mutagênese, 
estudos de associação (genômica e 
filogenia); 
- Reação em cadeia da polimerase; 
1. Componentes; 
2. Padronização; 
- Criação das curvas de amplificação, 
que, de início, é exponencial, e depois 
faz um platô e uma curva de 
amplificação, em decorrência do 
consumo de material ocorrido no 
processo; 
- A PCR permite quantificar a carga 
viral; 
- As vantagens da PCR em tempo real 
em relação à convencional; 
1. A PCR em tempo real: vem da 
leitura da interpretação do 
computador, sendo que as amostras 
positivas irão mostrar uma curvatura 
de amplificação, sendo refletida em 
fluorescência. Caso não tenha a 
curva de amplificação, não vai ser 
positivo; permite quantificar a carga 
viral (consegue visualizar na 
amplificação), é mais específica e 
mais sensível pela utilização da 
sonda; não é necessária a etapa da 
eletroforese; esta pode contaminar, 
mas é mais difícil. Porém, é mais cara, 
de não tão fácil acesso, além da 
necessidade de padronização; 
2. A PCR convencional: não consegue 
quantificar, apenas qualificar; 
- Sequenciamento de DNA é diferente 
da PCR. O sequenciamento de DNA é 
importante para entender o 
comportamento dos vírus no decorrer 
do tempo, e, assim, auxiliar no 
desenvolvimento de vacinas; 
- PROVA: Vai cair como são as 
aplicações, para que servem; 
- Toda vez que ocorre uma mutação 
nova, tem que haver um 
sequenciamento novo; 
 
ELETROFORESE EM GEL 
- Usa o peso molecular; 
- Diferença de potencial elétrico 
promove a migração dos fragmentos 
de DNA através do gel; 
- Quanto maior a molécula, menos ela 
se desloca na placa; 
- Quanto menor a molécula, mais ela 
se desloca na placa; 
 
ENZIMAS 
- DNA LIGASE: promove a junção de 
cadeias de DNA; 
- DNA POLIMERASE: é capaz de 
sintetizar uma nova fita de DNA a 
partir de uma fita molde e agrega 
nucleotídeos na extremidade 3' da 
fita de DNA; 
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- HELICASE: primeira enzima de 
replicação a se ligar na origem de 
replicação 3. A função da helicase é 
avançar os garfos de replicação 
“desenrolando” o DNA (quebrando as 
pontes de hidrogênio entre os pares 
de bases nitrogenadas); 
- DNA PRIMASE: sintetiza um primer 
de RNA, e, juntamente, com a DNA 
helicase e outros polipeptídeos, forma 
o primossomo. O prime servirá como 
material inicial para a adição de 
nucleotídeos pela RNA polimerase; 
- PRIMER: são sequências iniciadoras 
da replicação do DNA. 
Eles são necessários, pois a DNA 
polimerase precisa de uma 
extremidade 3' OH livre para iniciar a 
duplicação da fita.