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Resumo av1 biotec Coleta e manipulação do sêmen em bovinos e equinos · Antes da coleta - Preparo do macho Higienização do pênis com água corrente, para não causar mudanças na flora peniana, e secar com papel toalha - Preparo da fêmea Colocar a peia para que a fêmea não dê um coice no macho, prender a cauda para que os fios dela não acabem caindo no sêmen e para que não haja perigo de copulação e esvaziar o ânus para que a fêmea não acabe defecando e contaminando o sêmen. - Procurar indicativos de se os animais estão no cio ou não Reflexo de flehmen Utilizando rufiões · Coleta A coleta do sêmen de um animal serve para duas situações diferentes: 1- Avaliação do potencial de fertilidade do macho: antes dessa coleta fazer o esgotamento das reservas gonadais para padronizar a qualidade do sêmen 2- Coleta para armazenamento de sêmen para inseminação artificial · Método de coleta: - Vagina artificial: Usado em grandes animais. Esses animais devem ser condicionados desde novos para que a coleta seja feita de forma segura tanto para o animal quanto para quem está coletando. Coleta que garante a melhor qualidade do sêmen. Formas de coleta com a vagina artificial: a. Fêmeas no estro: o cavalo irá montar na fêmea, mas a penetração ocorrerá na vagina artificial. b. Fêmeas em diestro com aplicação de estrógeno: c. Manequim: o cavalo monta em um manequim com feromônios ou teremos uma fêmea no cio dentro do recinto, mas o animal montará o manequim. d. Outro macho: utilizado com touros Coisas que causam falhas nessa coleta: a. erro na temperatura da vagina artificial b. excesso de pressão c. erro de posicionamento na hora da coleta - Por eletroejaculador: Usado em ruminante. Nesse método, pequenos choques estimulam a ejaculação. O sêmen tem menos qualidade - Ejaculação química: Utilização de xilazina e imipramina para causar a ejaculação. Usado para animais mais velhos que já não conseguem fazer a monta. A qualidade do sêmen coletado não é tão boa. · Manipulação e análise do sêmen Dividida em: 1) Exames imediatos- Logo após a coleta. Neles vemos: A. Volume: ( não importa desde que a concentração espermática seja a ideal ): Equinos- 20 a 80ml Bovinos- 2 a 10ml B. Cor: Branco acinzentado Se tiver avermelhado o animal pode ter uma lesão ou a coleta pode ter sido mal feita e lesionado o animal C. Odor: “ suis generis “ D. Aspecto: Aquoso/ leitoso E. Motilidade: percentual de spitz que se movimentam na amostra 0-100% F. Vigor: velocidade dos movimentos dos spitz 0-5 G. Turbilhonamento: movimento circular, relacionado a alta concentração espermática 1-5 2) Exames mediatos- Exames que podem ser feitos após o sêmen ser armazenado A. Concentração espermática feita com espermatozoides mortos, faz a contagem de espermatozóides Calculo da concentração: Ce = n de spitz x 10³ 1/10 x D x 5/25 D ( muda de acordo com a espécie): * Equinos e cães: 1/20 * Bovinos: 1/40 * Pequenos ruminantes: 1/80 B. Patologia espermática - Avalia o número de spitz defeituosos em uma amostra. - Os defeitos são divididos em primários ( afetam diretamente a reprodução ) e secundários (dificultam a movimentação, mas n impedem a reprodução ) - Para o sêmen poder ser utilizado ele deve ter no máximo 30% de spitz defeituosos 20% secundários e 10% primários C. Provas de integridade da membrana Avalia o número de spitz com membrana rompida · Diluição Preserva os spitz, reduz a contaminação bacteriana, impede choques térmicos e possui substancias antioxidantes. · Armazenamento O sêmen fresco e diluído dura até 2h, mas se houver a necessidade de armazenar este sêmen para ser utilizado depois, existem dois tipos de armazenamento: - Resfriamento Se mantido a 5°c conserva por até 48h - Congelamento Congelamento com nitrogênio, sêmen fica conservado por anos, mas acaba sofrendo algumas lesões O armazenamento afeta a dose mínima para a inseminação. Se for um sêmen fresco, a dose inseminante será de 500 milhões Se for um sêmen resfriado ou congelado de 800 milhões a 1 bilhão de spitz Inseminação artificial ( IA ) em bovinos O sêmen utilizado sempre será congelado · Vantagens do ia - Melhoria genética - Controle sanitário, impede a transmissão de dsts - 1 reprodutor emprenha várias fêmeas - Uniformidade do lote - Melhor qualidade da carcaça · Materiais necessários para a ia Bainhas descartáveis ( protege o aplicador ) Aplicador Termômetro Cortador de palhetas · Conservação do sêmen O sêmen deve ser mantido em palhetas dentro de um botijão com nitrogênio liquido a -196°C ou no vapor de nitrogênio a -125°C Quantidade de sêmen na palheta: 0,25ml Dose inseminante: 50 milhões · Seleção de matrizes - As fêmeas devem ter um escore corporal: 3 ou 4 - Devem estar saudáveis · Identificação do cio Podemos observar através de mudanças comportamentais ( as vacas permitem que outras montem nelas ) e físicos ( saída de muco da vagina ). Uma das formas de saber se uma vaca esta no cio sem ficar observando o tempo inteiro é a utilização de rufiões que usam um instrumento que marca a tinta as vacas que eles tentam montar · Momento da inseminação A vaca ovula de 12 a 16h após o cio ( no metaestro ) e o cio delas dura de 8 a 12h, então a inseminação é feita 12h após a observação dos comportamentos de cio. - Método de Trimberger É um método que deixa mais claro o horário de inseminação *Observação de cio de manhã → insemina a vaca a tarde *Observação de cio a tarde → insemina a vaca pela manhã · Inseminação Nos bovinos a inseminação ocorre do corpo do útero a. Higienizar a fêmea b. Aquecer o sêmen a 37°C por 30 segundos c. Montar o aplicador com a palheta e introduzir na vagina da fêmea *No ia da vaca, é necessário introduzir a mão no reto da vaca para manipular o cérvix e posicionar os anéis fibrocartilaginosos de forma que o aplicador consiga chegar ao corpo do útero Inseminação artificial ( IA ) em equinos O sêmen utilizado pode ser congelado, resfriado ou fresco · Observação do cio As éguas são poliéstricas estacionais fotoperíodo positivo e só entram no cio durante a primavera e verão. Para reconhecer o cio das éguas é necessário fazer uma ultra do trato genital ou usar a presença de um rufião e observar o comportamento. O rufião fica em um piquete diferente para garantir sua proteção, éguas normalmente n aceitam a presença de machos. Comportamento das fêmeas no cio quando veem o rufião: Passividade, elevação da cauda, micção, contração do clítoris. *Fêmeas com potro ao pé não aceitam a presença de machos mesmo estando no cio · Indução do cio Nas éguas é possível induzir a ovulação com programas de luz e aplicação de Gnrh. Após a aplicação, a égua entrará em cio após 36h a 42h - Sêmen fresco ou resfriado: Deve-se inseminar a fêmea 12 horas antes de ela entrar no cio -Sêmen congelado: Após a aplicação deve-se observar a fêmea de 2 em 2h pois só é possível fazer a inseminação até no máximo 4h após ela ovular. A taxa de sucesso de inseminação diminui com o tempo, após 4h é improvável. · Inseminação A égua ovula no terço final do estro O ideal é que seja feita 1 inseminação por cio pois o sêmen causa uma reação inflamatória no útero da fêmea Nas éguas a inseminação é mais profunda, a deposição do sêmen vai ocorrer na papila útero-tubárica A taxa de prenhez de éguas normalmente é de 30%, mas com a utilização das biotecnologias passa para 70% Inseminação artificial ( IA ) em cães O sêmen utilizado pode ser congelado, resfriado ou fresco · Cio As cadelas sincronizam o cio A observação do cio ocorre por meio de alterações comportamentais e físicas Fazemos perfil hormonal para saber quando acasalar a fêmea: Se a concentração de p4 estiver de 4 a 8 ng/ml esperar 2 dias e botar para acasalar · Método de coleta: Massagem digital · Frequência de coleta 1 a 2 coletas por semana com intervalo de 4 a 5 dias *Medicações contra ecto e endoparasitas não devem ser utilizadas durante o cio pois afetam a fertilização · Coleta Antes da coleta do material pra inseminação,fazer 2 coletas para retirada de células mortas. O ejaculado é dividido em 3 frações sendo a 2° com maior concentração de sptz Na 1° fração: o sêmen vai ser claro, o volume de até 3 ml e a concentração de 3 milhões de spitz por ml Na 2° fração: a amostra vai ser mais turva, volume de até 5 ml e a concentração de 400 milhões de spitz por ml 3° fração: amostra clara, com até 30ml de volume e sem spitz · Característica do sêmen ideal: a. Volume: ( depende do porte ) 8ml b. Motilidade: percentual de spitz que se movimentam na amostra 80% - 90% c. Vigor: Acima de 3 d. Ph 6,3 – 6,7 · Inseminação Pode ser: - Intra-vaginal: Usando uma sonda rígida ou sonda de osiris e inseminando a dose inseminal de 50 milhões de spitz - intra- uterina * Utiliza sêmen congelado Feita de forma: a. Cirúrgica; Aplicação após o cérvix b. Transcervical; Difícil de passar pelo cérvix pois é muito fechado. c. Endoscopia vaginal.