8- REPRODUCAO II (Exame andrologico de garanhoes)

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EXAME ANDROLÓGICODE GARANHÕES
INDICAÇÃO
1. Estação de monta
2. Problemas de fertilidade
3. Identificar puberdade
4. Seleção e comercialização de reprodutores
5. Criopreservação
OBS: A diferença maior dos equinos em relação à reprodução
canina e bovina é que na reprodução dos equinos tem uma
estação muito bem definida, porque ela é sazonal (depende
da fêmea estar ciclando. E atualmente tem trabalhado com o
sêmen congelado, o que não era comum). Também trabalha
com o refrigerado
A sazonalidade limita a ciclicidade dessa égua, por causa
da quantidade de horas/luz
Quando entra na estação, como a gente está entrando
agora (dias estão mais longos), têmmais horas-luz passando
pela retina da égua, e isso faz com que tenha a descarga do
GnRH pelo centro pré-ovulatório, com consequência de
liberação de FSH e LH, para ter maturação oocitária, levar
prófase 1 até metáfase 2, rearranjo dos grânulos corticais, e aí
tem a ovulação
A égua demanda mais tempo de observar o folículo
pré-ovulatório
O seu cio dura sete dias. Ela tem uma semana de estro e
duas de diestro (tem apenas as duas fases)
O veterinário precisa passar ultrassom todo dia para
acompanhar o crescimento folicular.
A égua tem folículos que podem chegar até 70
milímetros. E ele só é responsivo ao hormônio que serve como
“comida” para que eles cresçam e depois ovulem, a partir de
35 mm. E aí pode trabalhar com a indução de ovulação. O LH
é o primeiro a ser usado.
Normalmente não começa a indução pelo uso do LH, pois
ele é caro. Então usa-se o GnRH (só demora mais um pouco o
resultado)
Para começar uma estação de monta, a primeira coisa a
se fazer é esgotar ele se estiver em longo período de repouso
sexual. Então, a primeira coleta é descartada para tirar
aqueles milhões de espermatozóides que estão guardados,
dormindo na cauda do epidídimo
O garanhão não pode usar o eletroejaculador, assim
como o suíno
IDENTIFICAÇÃO
ANIMAL (nome, registro, data de nascimento, raça)
PROPRIETÁRIO
ETAPAS
1. AVALIAÇÃO CLÍNICA GERAL
2. AVALIAÇÃO CLÍNICA ESPECÍFICA
3. COLETA DE SÊMEN
4. AVALIAÇÃO SEMINAL
CLASSIFICAÇÃO E PROGNÓSTICODA FUNÇÃOREPRODUTIVA
1. Aptos
2. Inaptos temporários
3. Inaptos permanentes
OBS: inapto temporário é bem comum para garanhão e
inapto permanente é mais comum o criptorquidismo
(hereditário, então não serve para reprodução)
1- AVALIAÇÃOCLÍNICAGERAL
ANAMNESE
Histórico:
1. Manejo
2. Frequência de cobertura
3. Taxa de gestação
4. Doenças (medicação)
5. Aprumos
6. Cascos
7. Articulações
OBS: Impotência coeundi → deficiência ou incapacidade de
cópula (limita ele a subir na fêmea). Isso tem que vir no laudo,
pois ele pode ser usado como reprodutor, mas sua coleta terá
que ser apenas em estação
Pode ter problema de libido, que está associada às
células intersticiais (câncer nas células intersticiais)
Garanhões criptorquidas tem a libido mais alta do que os
que não têm criptorquidismo, pois as células intersticiais
funcionam normalmente
2- AVALIAÇÃOCLÍNICA ESPECÍFICA
INTEGRIDADE DOSÓRGÃOSGENITAIS
1. escroto
2. testículos
3. epidídimos
4. cordões espermáticos
5. prepúcio
6. pênis
OBS: Nesta espécie as glândulas anexas devem ser palpadas
somente em casos de hemospermia, azoospermia ou
piospermia após sedação e tranquilização do garanhão
TESTÍCULOS
Formato: ovóide
Posição: horizontal
Comprimento: 5 -12 cm
Largura: 4 – 8 cm
Altura: 4 – 8 cm
OBS: o perímetro escrotal não existe em garanhão
o pênis é músculo membranoso, ou seja, demanda fluxo
sanguíneo para ter ereção
As glândulas do garanhão têm fácil acesso. Só que
normalmente a gente não tem esse hábito de ficar palpando
a glândula para poder avaliar essa atividade hormonal, a não
ser que já tenha suspeita de patologia endócrina
Se for palpar em casos que tenha suspeita (semen com
sangue, ou que tem quantidade muito pequena de
espermatozóides, ou um semen que estava lotado de
leucócitos) é necessário dar uma tranquilizada nele
(medicamentosa)
Testículo está deitado, cabeça para frente, cauda para
trás
Em garanhão é comum ter quadro de hidrocele
parênquima fica hipoecoico; veia fica anecóica
O plexo rouba o calor da artéria. A artéria que está
descendo precisa esfriar o sangue e plexo que está subindo
precisa esquentar
Antes e depois da ejaculação. As glândulas desembocam na
uretra pélvica
O plasma seminal, ele é importante para o
espermatozóide, pois ele protege essa célula de não lesionar
essa membrana plasmática antes da hora, pois se lesiona, o
as enzimas que estavam na acrossoma serão liberadas antes
da hora
HEPARINA → mostra para o espermatozóide que ele está na
tuba uterina
GAGs → mostra para o espermatozóide que ele está na tuba
uterina certa
Outra característica do garanhão é a lavagem antes de
fazer a coleta, pois a região fica suja.
Na sua glande ele tem o processo uretral (é o miolinho) e
em volta tem o sulco, onde tem um monte de sujeira
acumulada. Então vai tendo uma esmegma que fica ali, que
normalmente vai formando carocinhos, endurece, chamado
de “beans”, beans de feijão
Para a lavagem, é necessário que ele exponha o pênis
LAVAGEM:
● Água MORNA na barriga
● Gentilmente, insira a mão no
prepúcio. A esmegma
(secreções secas)
geralmente descamará e
sairá em sua mão
● Mova-se ao longo do
prepúcio até encontrar o
pênis. Remova a esmegma
ao redor da glande
● Verifique a existência de um
caroço (um pedaço de
esmegma) na uretra
● Enxague bem e seque
Tem que secar de cima para
baixo
A primeira coisa a ser observada após ele ter montado na
fêmea é o posicionamento de monta
Se é um animal que não está muito condicionado, ele
monta do jeito que dá. Ele está tão “tarado” que ele só quer
entrar. E se ele monta torto, tem que pedir a pessoa que está
segurando o cabresto para descer, rodar e subir de novo
3- COLETA DE SÊMEN
A mucosa de látex não é descartável, mas colocamos
plástico em cima dessa mucosa para prevenir o contato do
pênis com essa mucosa, logo, o plástico é retirado no final da
coleta
1L de água (55°C) para a parte interna estar entre 42 a
45°C resto é ar
Lado onde o pênis entra é maior. O outro lado, que é a
boca mais fina, é onde vai montar o copinho coletor
Se colocar uma vagina frouxa, ele introduz o pênis e tira
na mesma hora, porque não dá pressão pra ele fazer o
movimento e ejacular
Vai montar a vagina só depois que você já avaliou tudo
Depois que coloca a água dentro, precisa colocar
pressão, que é o ar. E aí, para saber se a pressão está certa
tem que colocar a mão dentro da vagina. Se estiver com
muita pressão, o garanhão vai enfiar o pênis e não vai
conseguir passar
No garanhão, a glândula vesicular vai ser responsável por
esse gel muito mais do que a bulba uretral, que é o comum
que acontece nas outras espécies
Na hora que eu terminar de coletar, eu tenho que ir lá e passar
esse sêmen pelo filtro, pois depois de poucos minutos vai
começar a formar um gel de verdade que é igual a gelatina.
Se não filtrar, a desvantagem do gel misturado no meio
do sêmen é que vai formar “grumos” e vai aglutinar várias
células
Então tem que ter o filtro na hora da coleta, ou passar
esse sêmen imediatamente pelo filtro quando chegar ao
laboratório
4- AVALIAÇÃO SEMINAL
EXAMES (MACROSCÓPICOS):
VOLUME: Mensurado em vidraria graduada
COR: Pode variar desde branco acinzentado a amarelo
ASPECTO: Variação desde aquoso a cremoso
ODOR: Sui generis
EXAMES (MICROSCÓPICOS):
MOTILIDADE ESPERMÁTICA (0-100%) *com lamínula
VIGOR ESPERMÁTICO (0-5) *com lamínula
CONCENTRAÇÃO ESPERMÁTICA
ESPERMOGRAMA
OBS: não olha turbilhonamento, pois é o sêmen que mais faz
movimento circular, pois ele tem a inserção abaxial, ou seja,
ele “anda” mais de lado
ESPERMOGRAMA E INTEGRIDADE DEMEMBRANA PLASMÁTICA
BOTUVITAL é um corante muito caro que permite ver a
integridade da membrana. Como o sêmen do garanhão já é
sensível, isso possibilita a análise
isso não interfere na motilidade
OBSERVAÇÕES
Inserção abaxial→ não é considerado um defeito
● Ejaculado→ cinco a oito jatos
● 70% dos sptz estão presentes nos três primeiros jatos
● 1ª fração→ bulbouretrais, translúcida (pois elealcaliniza a uretra)
● 2ª fração→ rica em sptz, secreções prostáticas e
ampolares
● 3ª fração→ pobre em sptz, secreções das vesículas
seminais
O volume do ejaculado do garanhão é 10 a 20 vezes
maior do que o touro e 50 a 100 vezes maior do que o do
carneiro
número total de espermatozóides por ejaculado é
semelhante
EFEITOS BENÉFICOS DO PLASMA SEMINAL
● substâncias moduladoras da inflamação uterina
pós-cobertura
● auxilia na eliminação dos sptz danificados
(macrófagos)
● presença de vesículas ricas em colesterol
● substâncias antioxidantes
● fatores envolvidos na capacitação e reação
acrossomal
proteínas no plasma protege o espermatozóide de liberar
seu conteúdo antes da hora (capacitação prematura), ou
seja, há receptores que vão se ligar aos GAGs e a heparina, e
assim a capacitação acontece no momento certo
colesterol protege o espermatozóide, pois ele está na
bicamada fosfolipídica
EFEITOS DELETÉRIOS DO PLASMA SEMINAL (PRESERVAÇÃO)
● HSP-1, HSP2 e HSP-12 20% do total de proteínas do
plasma induzem ao EFLUXO de lipídios da MP
são as proteínas que promovem o efluxo. quanto mais tira
o colesterol, mais frágil a célula fica e mais fácil de fazer a
capacitação antes da hora
CENTRIFUGAÇÃO
● manutenção de 5-20% de plasma seminal
adicionado ao diluidor (1:1)
● 600 g/10 min
Então precisa centrifugar para tirar uma parte desse
plasma
tirar no máximo 80% do plasma
perda de espermatozóide por conta da centrifugação
(choque com a parede do tubo). O espermatozoide bate na
parede do vaso e fica inviável de usar
há substâncias próprias para proteger o sptz na
centrífuga
FILTRAÇÃO
gera menos lesão na parede do sptz
SEPARAÇÃO PORGRADIENTE DE DENSIDADE
(REPROCESSAMENTO)
● Muitos sptz anormais
● Baixa motilidade
● Ressuspender:
○ refrigerado: 100x10*6 sptz/mL
○ congelado: 200x10*6 sptz/mL
EQUIPURE (vidro amarelo)
remédio que funciona como um filtro. os vivos passam
pela malha e os mortos não conseguem. assim, consegue
separar
os bons ficam em baixo, porque conseguiram passar e os
ruins ficam em cima, pois não passaram
o EQUIPURE é colocado primeiro e por cima coloca o
sêmen. Assim, lá na centrífuga ocorre a separação
REDCUSHION (vidro vermelho)
funciona como uma almofada, diminui a lesão no
espermatozóide
ele se adere na parede do tubo, ou seja, protege os sptz
da centrifugação
500 a 1.000.000.000 (bilhão) de espermatozóides
OBS: esquenta a água até 55ºC e depois ela desce até uns
42ºC para colocar na vagina artificial e fazer a coleta
o refrigerado só pode ser usado até 48h após a coleta
tem que tirar o plasma seminal para poder refrigerar, pois
se deixar, as HSP vão fazer com que todos morram ( induzem
ao EFLUXO de lipídios da MP)
Seleção espermática por meio de gradiente de
concentração
Diluentes → depois de coletar, tem que testar o sêmen
com cada diluente. De acordo com a avaliação da motilidade
e vigor
Então há kits que vem com os testes para fazer em cada
diluente e como o sêmen do garanhão vai se comportar
diante de cada diluente, assim, é possível fazer a escolha de
qual melhor diluente para aquele sêmen (aquele que
mantiver melhor motilidade e vigor é o correto de se usar)
BOTUSÊMEN
é a base de leite em pó desnatado
esse foi o primeiro
BOTUSÊMEN SPECIAL
adição de colesterol, isso vai fortalecer a bicamada
lipídica
para garanhões que não congelam muito bem (bad
cooler)
quando há o congelamento. o sêmen que estava em
uma temperatura ambiente de 37ºC, vai para 4 a 5ºC e depois
para -196ºC que é a temperatura do nitrogênio, portanto é
normal a membrana do sptz desestabilizar
BOTUSÊMENGOLD
adição de caseína e colesterol
caseína (proteína) inativa as proteínas do plasma que
desestabilizam a membrana, as HSP
BOTUTURBO
adição de pentoxifilina: aumenta a motilidade
espermática
esse não tem a ver com a membrana, mas sim
motilidade
TESTDILUENTES
é o kit de testes e contém:
1 BotuSêmen
1 BotuSêmen GOLD
1 BotuSêmen SPECIAL
1 BotuTURBO
o que responder melhor é o que será usado
posso usar um diluente junto com o botuturbo para
melhorar a motilidade
BotuTAINER: 5°C por 48 horas
BOTUFLEX: 15°C por 24 horas (1 gelo) ou 5°C por 48 horas (2
gelos)
Se eu quiser fazer uma entrega mais rápida, eu não posso
mandar ele em temperatura ambiente, mas eu posso colocar
ele em uma temperatura superior a 5ºC, que além de
conservar, também causa menos lesão aos sptz. Para isso,
pode usar apenas um gelo dentro do botuflex
Com um gelo só dura até 24h, pois o sptz não está
“dormindo”, ele está meio acordado e isso faz com que ele
gaste sua energia e assim ele morre com o passar das horas
BotuBox: 15°C por 24 horas (só cabe um gelo)
INSEMINAÇÃOARTIFICIAL
se a fêmea estiver com CL, tem que pôr PGF2-alfa
Tem que ter a regressão do corpo lúteo, aí depois coloca
o estrógeno
Ela pode ter um folículo pequeno, de 30 milímetros, e já
está demonstrando o cio, e ainda está muito longe de
inseminar, pois o folículo precisa ter no mínimo 35mm
quando se fala de inseminação, o mais importante é a
monitoração do folículo
existe um mínimo de tamanho para o folículo, pois a
indução de ovulação só será eficiente quando esse folículo
tiver receptores
as “comidas” para o folículo, ou seja, para fazer a indução
são o GnRH e LH. A diferença de ambos é o tempo de ação,
pois o GnRH demora mais por ser indireto
CICLO ESTRAL→ 21 dias
ESTRO→ fase folicular (estrogênica): 7 dias
DIESTRO→ fase luteal (progesterônica): 14 dias
ESTRO
● 7 dias
● Ovulação (últimas 24 - 48 h do estro)
● Cérvix relaxada
● Perda de tonicidade do útero
● Edema uterino
ESTROGIN é o medicamento de estrógeno mais indicado
ACOMPANHAMENTODOÚTERO E DESENVOLVIMENTO
FOLICULAR
● Edema uterino (dobras endometriais bem evidentes)
● Taxa de crescimento folicular
● Ecogenicidade da parede folicular
● Formato do folículo
Precisa conferir o diâmetro de folículo pré-ovulatório. Só
vai responder a indução de ovulação se tiver pelo menos 35
milímetros. Se induzir antes disso, perde o hormônio
Quanto mais deformado for ficando o folículo, mais perto
da ovulação está. Além disso, vai formando um monte de
pontinhos hiperecóicos (brancos).
Se estiver tudo preto significa que está mais longe da
ovulação
DIA 0 do FPO (folículo pré-ovulatório):
● Início do comportamento de cio
● Acompanhamento em dias alternados
● θ do FPO com 35 mm (IA + acompanhamento diário
até ovulação)
STRELIN e SINCRORRELIN são os indutores de ovulação
mais indicados (GnRH)→ 48h
CHORULON é o indutor de ovulação mais caro, pois é o LH
puro→ aprox. 36h
SÊMEN
● Fresco
● Refrigerado
● Congelado
DOSE INSEMINANTE
● Mínimo de 500 a 1000x106 sptz móveis
● Volume ≤ 50 mL
● Proporção 1:1
● [ ] abaixo de 50x106 sptz/mL → centrifugação ou
filtração
SÊMEN FRESCO (1:1)
[ ] 100x106 sptz/mL (sempre achada pela contagem na
Câmara de Neubauer);
volume: 100 mL;
motilidade total: 80%
● 1º passo [ ] x volume = 10.000x106 sptz TOTAIS (vivos e
mortos)
● 2º passo sptz totais / [] espermática de envio = 200
mL solução
● 3º passo solução total – sêmen = 100 mL de diluente
● 4º passo sptz TOTAIS x motilidade = 8000x106 VIVOS
● 5º passo sptz vivos/dose inseminante = 8 doses
● 6º passo solução/nº de doses = 25 mL
simplificada:
● 1º passo [ ] x motilidade = 80x106 sptz vivos/mL
● 2º passo dose inseminante/sptz móveis = 12,5 mL de
sêmen
● (1:1) = volume final = 25 mL solução para envio
Para transportar na Botuflex:
● SEMGELO
● TRANSPORTE→ ATÉ 2 HORAS
➔ Nome do garanhão
➔ Data e hora da coleta
➔ [ ] espermática TOTAL
➔ Nº de sptz/mL
➔ Diluente utilizado
SÊMEN REFRIGERADO (2:1)
[ ] 150x106 sptz/mL;
volume: 80 mL;
motilidade total: 70%
● 1º passo [ ] x volume = 12.000x106 sptz TOTAIS (vivos e
mortos)
● 2º passo sptz totais / [] espermática de envio = 240
mL solução
● 3º passo solução total – sêmen = 160 mL de diluente
● 4º passo sptz TOTAIS x motilidade = 8400x106 VIVOS
● 5º passo sptz vivos/dose inseminante = 8,4 doses
● 6º passo solução/nº de doses = 28,5 mL
simplificada:
● 1º passo [ ] x motilidade = 105x106 sptz vivos/mL
● 2º passo dose inseminante/sptz móveis = 9,5 mL de
sêmen
●(2:1) = volume final = 30 mL solução para envio
1000 x 10*6 ________ 30ml
x ____________ 1ml
x= 33,3 x 10*6 sptz/ml
INSEMINAÇÃOARTIFICIAL
● Intrauterina
● Via VAGINAL
● Mão enluvada guia a pipeta até a passagem da
cérvix
ETAPAS DA IA
1. Enrole e amarre a cauda
2. US (folículo e útero)
3. Higienize a região (3x) com água e sabão neutro
4. Secar bem com papel toalha
5. Introduzir a pipeta à 45º
IA COMSÊMEN FRESCO
● Coletado e utilizado imediatamente
● Corpo uterino
● Volume de 10 a 30 mL (às vezes dá para colocar
mais, mas tem que tomar cuidado com o processo
inflamatório que vai gerar na fêmea e pode ser tão
exacerbado a ponto de perder a prenhez)
● Após a detecção do estro a cada 48h
● A cada 48h (≥ 35 mm) até a ovulação (pós ovulação
no máximo 6 h)
IA COMSÊMEN REFRIGERADO
● corpo uterino
● 24 horas após a indução da ovulação
IA COMSÊMENCONGELADO
● IA no ápice do corno uterino, ipsilateral ao folículo
dominante
● Taxa de prenhez: 25 e 40%
● 12 horas antes e até 6 horas após a ovulação
OBS: pipeta flexível de 75cm de comprimento