Coloração de GRAM

Prévia do material em texto

Coloração de GRAM
O que é uma bactéria GRAM – e o que é uma bactéria GRAM + ?
A coloração de Gram é um dos principais fatores na caracterização e classificação inicial das bactérias. Isso porque esse método de coloração permite que as bactérias sejam visualizadas no microscópio óptico, não sendo necessário um eletrônico; uma vez que sem a coloração é impossível observá-las ou identificar sua estrutura no óptico. O método de coloração de Gram recebeu esse nome em homenagem ao patologista dinamarquês Hans Christian Joachim Gram que realizou a descoberta em 1884 e, aliás, até hoje continua sendo a mais utilizada nos laboratórios de análises clínicas e microbiologia. Através da coloração é possível identificar e diferenciar os dois principais grupos de bactérias, sejam Gram-positivas ou Gram-negativas.
Coloração de GRAM 
Princípios
Resumidamente, o procedimento de Gram permite que as bactérias retenham a cor com base nas diferenças nas propriedades químicas e físicas de suas paredes celulares. De fato, o uso dos corantes permite aumentar o contraste e evidenciar a estrutura bacteriana. 
A coloração envolve 3 etapas principais: 
• Coloração com violeta de cristal (um corante solúvel em água, roxo); 
• A descoloração (utilizando etanol / acetona); 
• A contra-coloração (utilizando corante Safranina, vermelho).
Diferenças entre uma Gram Negativa e uma Gram Positiva
A princípio, microrganismos Gram negativos e Gram positivos possuem diferenças em seu grau de permeabilidade em suas paredes celulares. As bactérias Gram-positivas retém o cristal violeta devido à presença de uma espessa camada de peptideoglicano (polímero constituído por açúcares e aminoácidos que originam uma espécie de malha na região exterior à membrana celular das bactérias) em suas paredes celulares, apresentando-se na cor roxa. Já as bactérias Gram-negativas possuem uma parede de peptideoglicano mais fina que não retém o cristal violeta durante o processo de descoloração e recebem a cor vermelha no processo de coloração final.
Exemplos de bactérias Gram Negativas: Escherichia, Helicobcater, Hemophilus, Neisseria, Klebsiella, Enterobacter, Chlamydia, Pseudomonas, Salmonella, Shigella.
Exemplos de bactérias Gram positivas: Bacillus, Nocardia, Clostridium, Propionibacterium, Actinomyces, Enterococcus, Cornyebacterium, Listria, Lactobacillus, Gardnerella, Mycoplasma, Staphylococcus, Streptomyces, Streptococcus
Coloração de Gram - Metodologia
1. Cubra o esfregaço com violeta-de-metila e logo após deixe por aproximadamente 15 segundos; 2. Adicione igual quantidade de água sobre a lâmina coberta com violeta-de-metila e então deixe agir por mais 45 segundos; 3. Escorra o corante e lave em um filete de água corrente; Cubra a lâmina com lugol diluído (1/20) e deixe agir por aproximadamente 1 minuto; 4. Escorra o lugol e lave em um filete de água corrente; 5. Adicione álcool etílico (99,5º GL) sobre a lâmina; descorando-a, até que não desprenda mais corante; 6. Lave em um filete de água corrente; 7. Cubra a lâmina com safranina e deixe agir por aproximadamente 30 segundos; 8. Lave em um filete de água corrente; 9. Deixe secar ao ar livre, ou seque suavemente com o auxílio de um papel de filtro limpo; 10. Visualize no microscópio. Logo após leia em objetiva de imersão (100 X).
Suas aplicações e benefícios na área da saúde
De fato a metodologia de Gram ajuda na identificação de uma infecção bacteriana, determinando qual é o tipo de bactéria. Em outras palavras, a diferenciação das bactérias Gram-negativas e Gram-positivas permite ao dentista/médico determinar um tratamento eficaz ao paciente, dessa forma aplicando a terapia adequada em cada caso. Mesmo que nem todas as bactérias possam ser diferenciadas através da coloração de Gram, com certeza a metodologia tem grande aplicação no diagnóstico clínico e pesquisa biológica.