Laboratório- COLORAÇÃO DE GRAM

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PRÉ-TESTE 
 
1) Qual a diferença entre as bactérias Gram positivas das Gram 
negativas? 
 
a) Presença do lipopolissacarídeo (LPS) em sua composição 
estrutural; 
 
b) Presença de uma camada espessa de peptideoglicano; 
RESPOSTA CORRETA 
A parede celular das bactérias Gram positivas é composta por uma 
espessa camada de peptideoglicanos (proteínas + carboidratos), o 
que permite que o lugol auxilie na fixação do cristal violeta, 
corando as bactérias de roxo. 
 
c) Presença de LPS e peptídeoglicano em sua composição 
estrutural. 
 
2) Quais são os componentes utilizados pelo método de Gram? 
 
a) Azul de metileno e fucsina fenicada; 
 
b) Violeta genciana, lugol, álcool cetona e Safranina; 
RESPOSTA CORRETA 
A violeta genciana cora a parede celular da bactéria; o lugol 
auxilia a fixação da violeta; o álcool cetona promove a 
descoloração da bactéria que não possuem uma camada espessa de 
peptideoglicano, enquanto a Safranina promove o contraste das 
estruturas que foram descoloridas pelo álcool cetona. 
 
c) Azul de metileno, lugol, álcool cetona e fucsina. 
 
3) As bactérias são transparentes, sendo frequente o uso de 
corantes para a visualização da forma e do tipo de arranjo desses 
microrganismos. Sobre o termo “Gram”, muito utilizado neste 
método, marque a assertiva que indica a sua origem. 
 
a) O termo Gram se origina do nome Christian Gram, pesquisador 
dinamarquês que, em 1884, desenvolveu o método de coloração que 
passou a dividir as bactérias em dois grandes grupos: Gram 
positivas e Gram negativas; 
RESPOSTA CORRETA 
A afirmativa está correta. 
 
b) O termo surgiu com a pesquisa do bacteriologista alemão, 
Robert Koch, sobre métodos de fixação e de coloração de bactérias 
e suas respectivas identificações e classificações através do 
microscópio; 
 
c) O termo Gram surgiu após uma modificação do método de Ziehl 
Neelsen, classificando as bactérias em dois grandes grupos: 
bactérias álcool-ácido resistentes e não álcool-ácido 
resistentes. 
 
4) Considerando o Gram uma etapa crucial no processo de 
identificação do agente etiológico, marque a assertiva correta. 
 
a) Esse método de coloração nos permite visualizar a morfologia 
bacteriana, auxiliando a escolha correta das provas bioquímicas 
utilizadas na identificação do microrganismo; 
RESPOSTA CORRETA 
A identificação das características morfológicas e tintoriais 
das bactérias é crucial para a identificação final desses 
microrganismos. 
 
b) As bactérias apresentam pigmentos em suas estruturas, o que 
facilita sua visualização através da microscopia; 
 
c) O lipopolissacarídeo permite a classificação das bactérias 
como Gram positivas por ter a capacidade de absorver a violeta 
genciana. 
 
5) Em relação aos conhecimentos adquiridos sobre o método de 
coloração de Gram, marque a assertiva correta. 
 
a) Uma bactéria Gram positiva, após a coloração por esse método, 
apresenta uma coloração rosada; 
 
b) As bactérias apresentam pigmentos azuis em suas estruturas, o 
que facilita a visualização de bactérias Gram positivas; 
 
c) Uma bactéria Gram negativa, após a coloração por esse método, 
apresenta uma coloração rosada. 
RESPOSTA CORRETA 
As bactérias Gram negativas apresentam uma camada delgada de 
peptideoglicano, o que dificulta a absorção da violeta genciana, 
facilitando a descoloração pelo álcool cetona. Esse fato auxilia 
a coloração rosada após a etapa da Fucsina ou Safranina. 
 
PÓS-TESTE 
 
1) Quais são as etapas para uma correta coloração de Gram? 
 
a) Confecção do esfregaço com a bactéria a ser analisada; fixação 
do esfregaço; cobrir a lâmina com violeta de genciana por 1 
minuto; lavar; cobrir a lâmina com lugol por 1 minuto; lavar; 
lavar com álcool rapidamente (10 segundos); lavar; lâmina com 
fucsina por 30 segundos; lavar; 
RESPOSTA CORRETA 
As etapas descritas seguem a ordem e o tempo correto de aplicação. 
 
b) Confecção do esfregaço com a bactéria a ser analisada; fixação 
do esfregaço; cobrir a lâmina com violeta de genciana por 2 
minutos; lavar; cobrir a lâmina com lugol por 2 minutos; lavar; 
lavar com álcool rapidamente (10 segundos); lavar; lâmina com 
fucsina por 30 segundos; lavar; 
 
c) Confecção do esfregaço com a bactéria a ser analisada; fixação 
do esfregaço; cobrir a lâmina com violeta de genciana por 1 
minuto; lavar; lavar com álcool rapidamente (10 segundos); 
lavar; lâmina com fucsina por 30 segundos; lavar. 
 
2) Em relação as etapas do método de coloração de Gram, marque a 
assertiva correta. 
 
a) Durante o processo da coloração de Gram, podemos suprimir a 
etapa da fixação sem que ocorra uma redução da qualidade da 
microscopia; 
RESPOSTA CORRETA 
A utilização da violeta de metila ao invés da violeta genciana 
permite que a etapa de fixação seja suprimida. 
 
b) Durante a etapa de descoloração, é necessário deixar o álcool 
cetona agir no esfregaço por 1 minuto; 
 
c) A etapa da Safranina ou fucsina pode ser suprimida no método de 
coloração de Gram. 
 
3) Qual afirmativa não interfere diretamente na visualização das 
estruturas bacterianas após a coloração de Gram? 
 
a) Realizar um esfregaço bem concentrado de material bacteriano; 
 
b) Esperar secar a suspensão de salina / material bacteriano para 
fixar o material na lâmina; 
RESPOSTA CORRETA 
A secagem da lâmina durante o processo de fixação pode interferir 
na visualização das estruturas bacterianas. 
 
c) Realizar um esfregaço com uma quantidade extremamente baixa do 
material bacteriano. 
 
4) A imagem abaixo do Gram corresponde a: 
 
 
a) cocos Gram negativos; 
 
b) bacilos ou bastonetes Gram negativos; 
RESPOSTA CORRETA 
O Gram evidenciou a presença de estruturas em bastões com 
coloração rosada, o que significa ausência de uma camada espessa 
de peptídeoglicano, ou seja, Gram negativos. 
 
c) bacilos os bastonetes Gram positivos. 
 
5) A imagem abaixo do Gram corresponde a: 
 
 
a) bastonetes Gram negativos; 
 
b) cocos Gram positivos; 
RESPOSTA CORRETA 
O Gram evidenciou a presença de cocos com coloração roxa, o que 
significa presença de uma camada espessa de peptídeoglicano, ou 
seja, cocos Gram positivos. 
 
c) bacilos ou bastonetes Gram positivos. 
 
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