Patologia Molecular

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Estudos no tecido íntegro parafinado 
- Morfologia 
- Imuno-histoquímica 
- Hibridização in situ 
Extração de DNA ou RNA 
- Sequenciamento (NGS) de mutações, 
inserções, amplificações, fusões; carga 
mutacional (quantidade de mutação – 
TMB) 
- Tipos de sequenciamento: genoma, 
exoma, painéis HotSpots (genes que são 
drivers do tumor – transformam o tecido 
em maligno) 
- Surgimento na década de 1970 e foi 
incorporada na rotina em 80’s 
- Usa marcador tecidual 
- Identificação de PROTEÍNAS (no 
citoplasma, núcleo ou membrana celular) 
• é o final do processo de tradução e 
transcrição do DNA 
• Marcador substituto ou screening 
- HER2: presente na membrana e 
característico de carcinoma de mama 
- PAN-CK: citoplasma, metástase 
carcinoma 
• Faz parte do citoesqueleto 
- Ki-67: expressa no núcleo da célula que 
está se dividindo, linfoma linfoblástico 
- Utilidades 
• Diagnóstico diferencial de 
neoplasias poucos diferenciadas 
• Diagnóstico diferencial entre lesões 
benignas e tumores malignos 
o Saber selecionar os 
marcadores 
o Mutações no gene BRCA1 
estão mais associadas aos 
tumores de mama triplo-
negativos e maior risco de 
câncer de ovário 
o Mutações no gene BRCA2 
estão mais associadas ao 
câncer de mama masculino 
e no câncer de pâncreas 
• Pesquisa de sítio primário em 
tumores metastáticos 
• Identificação de micrometástases 
• Screening para alterações 
genéticas 
o Instabilidade microssatélite: 
sequências de DNA 
repetitivas e em sequência 
que levam a genes de reparo 
de DNA, com erros ocorre a 
inativação desses genes 
o Ca de colon e de endométrio 
na síndrome de Lynch 
o Ca de ovário 
o Análise do tecido tumoral 
para perda de expressão dos 
genes de reparo de DNA 
usando IHQ (MLH1, MSH2, 
MSH6, PMS2): negativo – sem 
a proteína de reparo e o 
tumor está crescendo 
usando a via de 
microssatélite 
o 2 proteínas faltando: alta 
instabilidade → candidato 
para imunoterapia 
• Pesquisa de marcadores preditivos 
de resposta ao tratamento 
- Usa uma sonda 
- Marcador tecidual que preserva a 
morfologia 
- Método direto de detectar e localizar 
alterações no DNA cromossômico 
- Baseia-se na detecção de pequenas 
sequências de DNA a partir de sondas 
específicas 
-Sondas são sequências de nucleotídeos 
complementres conhecidos que irão 
 
 
 
“combinar” com a sequência de interesse 
no material que está sendo estudado 
- Precisa colocar no formol para manter 
integridade do DNA 
- Sondas que precisam estar associadas a 
moléculas de visualização 
• Substância fluorescentes (FISH), 
perda de fluorescência com o 
tempo 
• Substâncias biotiniladas, 
cromógeno semelhante ao 
utilizado na IHQ (CISH) 
• METAIS (SISH) 
- Sondas de tipos diferentes podem 
identificar diversos locais do cromossomo: 
centroméricas, locus-específicas e 
teloméricas 
Utilização na oncologia 
- Pesquisa de amplificações gênicas 
• HER2 em carcinomas mamários 
• EGFR em tumores do SNC 
• NMYC no neuroblastoma 
• MDM2 em lipossarcomas 
- Deleções 
- Pode ser usada ainda em detecções de 
vírus 
• Sarcoma de Kaposi - HHV8 
• HPV 
• Câncer de estômago 
indiferenciado – EBV 
- 2001: projeto genoma – 
sequenciamento do genoma humano 
- Conhecimento do genoma da célula 
normal → identificar alterações nas 
células neoplásicas “TCGA”: mais de 3 
milhões de mutações identificadas 
- Metodologias que determinam a ordem 
das bases nitrogenadas em uma porção 
de DNA 
- Sanger 1977: 1 gene por vez 
• Extração por eletroforese 
• Padrão ouro para validação 
• Contraprova para validar os 
achados 
- NGS (next Generation sequencing) 2005 
– milhões de sequências 
simultaneamente: diferentes plataformas 
• Pirosequenciamento 
• Sequenciamento por síntese 
• Sequenciamento por ligação 
• Sequenciamento por 
semicondutores de íons 
• NGS pode substituir o FISH, 
citogenética (ganhos e perdas 
cromossômicas), ensaios em PCR 
 - Atualmente se faz em 1 mês 
IHQ 
• Usado para detectar mudanças na 
expressão de proteínas 
• Mais acessível 
FISH 
• Usado para detectar fusão e e 
amplificações de genes 
NGS 
• Usado para identificar mutações e 
fusões genéticas 
• Mais caro e mais demorado 
• É necessário interpretação por 
bioinformáticos, equipamentos 
esoecializados