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PRÁTICA - OBSERVAÇÃO DE CÉLULAS VEGETAIS 1 INTRODUÇÃO As células vegetais são eucariontes, ou seja, possuem o núcleo delimitado por uma membrana intitulada carioteca ou membrana nuclear que separa nitidamente o DNA do citoplasma. Elas possuem diversas semelhanças com as células animais, tanto na sua estrutura molecular de membranas como pelas diversas organelas presentes, a replicação do DNA, a transcrição em RNA, toda a síntese proteica e a energia proveniente das mitocôndrias (JUNQUEIRA; CARNEIRO, 2011). Estas células em geral possuem a maior parte do citoplasma ocupado por uma grande estrutura chamada vacúolo central. Ou seja, o que difere das células animais é, principalmente, a presença de parede celular, grandes vacúolos muitas vezes ocupam espaços muito grandes na célula e também a presença de plastídeos. A Citologia têm nos mostrado cada vez mais o papel imprescindível das células nos seres vivos, e esta prática permitirá que você visualize as células de diferentes partes de dois vegetais. Ela se divide, portanto, em duas etapas para que você aplique e permita a diferenciação e o comparativo entre as duas. É importante destacar que o conteúdo desta prática relaciona-se com outras disciplinas do curso e/ou áreas afins, especialmente Botânica, Genética, Microbiologia, Hematologia, Imunologia e Histologia. Desejamos bom estudo ao longo desta disciplina. Que você perceba a cada leitura e/ou atividade realizada, a satisfação de consolidar a formação do seu conhecimento, tanto profissional como pessoal. Lembre-se de que, além do seu Professor-Tutor Externo, Coordenador, Articulador do Polo de Apoio Presencial, você também pode contar com o Apoio dos Supervisores de Disciplina e os Professores-Tutores Internos. Boa prática! 2 OBJETIVOS Os objetivos desta prática são: - visualizar as células de epiderme de tomate e da cebola; - diferenciar a metodologia utilizada em cada processo de visualização. 3 MATERIAIS 3.1 Prática de observação de células da epiderme do tomate - frasco contendo lâminas de vidro para microscopia; - frasco de conta-gotas contendo água; - frasco para o descarte das lâminas de vidro usadas; - lápis e folha de papel para desenho; - máquina fotográfica se necessário; - microscópio; - pacote de papel de filtro cortado em tiras de aproximadamente 7 x 25 cm; - pedaço de lâmina de barbear (recobrir parte da lâmina com esparadrapo) ou faca; - pedaço de papel (± 60 cm x 40 cm) para cobrir a bancada se necessário; - pedaços de tomate; - pinça de ponta fina; - placa de Petri com lamínulas; - rolo de papel higiênico fino e macio. 3.2 Prática de observação de células da epiderme - frasco com lâminas de vidro para microscopia; - frasco conta-gotas contendo azul de metileno 0,5%; - frasco para o descarte das lâminas de vidro usadas; - lápis e folhas de papel para desenho; - pacote de papel de filtro cortado em tiras de aproximadamente 7 x 25 cm; - pedaço de lâmina de barbear ou faca; - pedaço de papel (± 60 x 40 cm) para cobrir a bancada se necessário; - pedaço de ¼ de cebola sem casca, como pode ser visualizado na Figura 2; - pinça de ponta fina; - placa de Petri contendo lamínulas; - rolo de papel higiênico fino e macio; - máquina fotográfica se necessário; - microscópios. 4 PROCEDIMENTO 4.1 Procedimento da prática para visualização das células da epiderme do tomate 1. Usando o frasco conta-gotas, pingue, sobre a região central de uma lâmina, uma gota de água. 2. Com o auxílio de uma lâmina de barbear, recorte um triângulo com cerca de 1 cm de lado na superfície de um tomate maduro. 3. Com uma pinça de ponta fina, retire a epiderme do pedaço recortado (primeira camada externa) e coloque-a sobre a gota de água na lâmina. 4. Cubra a preparação com a lamínula. 5. Retire as bolhas de ar pressionando levemente a lamínula com a pinça. 6. Coloque a lâmina com a preparação dentro de um pedaço de papel de filtro dobrado. 7. Pressione levemente para retirar o excesso de líquido. 8. Observe ao microscópio: focalize usando a objetiva de 10x e em seguida a de 40x. Gire vagarosamente o micrométrico para obter o melhor foco. 9. Faça um desenho das células observadas. Na Figura 1 você poderá visualizar um esquema representativo destas etapas: FIGURA 1 – PROCEDIMENTO PARA VISUALIZAÇÃO DAS CÉLULAS DA EPIDERME DO TOMATE FONTE: CENTRO DE ESTUDOS DO GENOMA HUMANO. Disponível em <www.genoma.ib.usp.br/educacao/Observacao_Celulas_Vegetais_web.pdf>. Acesso em: 9 mar. 2012. 4.1 Procedimento da prática para visualização das células de cebola 1. Com o auxílio de um conta-gotas, coloque, na região central de uma lâmina, uma gota de azul de metileno. 2. Com o auxílio de uma lâmina de barbear, recorte um triângulo, com cerca de 1centímetro de lado, na parte interna de um catafilo de cebola. 3. Com a pinça de ponta fina, retire a epiderme inferior do pedaço recortado e coloque-a sobre a gota de azul de metileno. 4. Com o frasco conta-gotas pingue mais uma gota de azul de metileno sobre a epiderme da cebola. Aguarde 2 minutos. 5. Cubra a preparação com a lamínula. 6. Retire as bolhas de ar pressionando levemente a lamínula com a pinça. 7. Coloque a lâmina com a preparação dentro de um pedaço de papel de filtro dobrado. Pressione levemente para retirar o excesso de líquido. 8. Observe ao microscópio: focalize usando a objetiva de 10x e em seguida a de 40x. Gire vagarosamente o micrométrico para obter o melhor foco. 9. Faça um desenho das células observadas. Na Figura 3 você poderá visualizar um esquema representativo destas etapas: FIGURA 3 – PROCEDIMENTO PARA VISUALIZAÇÃO DAS CÉLULAS DE CEBOLA FONTE: CENTRO DE ESTUDOS DO GENOMA HUMANO. Disponível em <www.genoma.ib.usp.br/educacao/Observacao_Celulas_Vegetais_web.pdf>. Acesso em: 9 mar. 2012. 5 INTERPRETAÇÃO DOS RESULTADOS Após a realização da prática descreva os resultados obtidos e discuta-os a partir dos questionamentos a seguir: 1. Por que na prática com a cebola foi necessário o uso de corante e na prática para visualização da epiderme do tomate não foi preciso? 2. Diante disso, qual a função do azul de metileno? 3. O que poderia ser visualizado em uma folha de uma planta qualquer, além do que foi verificado nos tomates e cebolas? REFERÊNCIAS ALBERTS, Bruce. Fundamentos da biologia celular. 8. ed. reimp. Porto Alegre: Artmed, 2008. JUNQUEIRA, Luís Carlos Uchoa; CARNEIRO, José. Biologia celular e molecular. 8. ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2011.