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GÊNERO STAPHYLOCOCCUS ANÁLISES MICROBIOLÓGICAS • Cocos Gram- Positivos; • Imóveis; • Não-esporulados; • Catalase: Positivo; • Produção de COAGULASE; • Anaeróbios facultativos – EXCETO: S. aureus subesp. anaerobius e S. saccharolyticus; Staphylococcus aureus • Microbiota normal; • Infecções oportunistas; • Fatores predisponentes: Lesões cutâneas (queimaduras, incisões), corpos estranhos, infecções secundárias, doenças crônicas, terapia profilática com antimicrobianos; Fatores de Virulência Importância Clínica • Foliculite: Infecção dos folículos; • Furúnculo: Lesão elevada, centro necrótico, material purulento; • Carbúnculo: Associados a calafrios e a febre; • Impetigo: Infecção superficial em áreas expostas (Rosto); Máculas vermelhas, vesículas sorossanguinolentas – Crosta de Mel; S. aureus – 80-80% dos casos; • Síndrome do Choque Endotóxico: Toxina TSST- 1; Febre, hipotensão, tontura, vômito, diarreia, insuficiência renal, calafrios; Mulheres durante a menstruação; Complicações de abcessos estafilocócicos; • Intoxicação Alimentar: Enterotoxinas termostáveis; Contaminação por manuseio ou por colonização por nasofaringe; Carnes processadas, massas recheadas, salada de batata e sorvete; Náuseas, vômito, cólicas abdominais e diarreia – 2-6h; Estafilococos Coagulase Negativa Staphylococcus epidermidis • 50-80% dos isolados; • Aquisição em hospital; • Microbiota normal da pele; • Bacteremia, endocardite, feridas cirúrgicas, cateter intravascular, ITU, fluído cerebrospinal; • Fator de Virulência: Biofilme; GÊNERO STAPHYLOCOCCUS ANÁLISES MICROBIOLÓGICAS 24H / 35-37º C Lisas, borda contínua, tam. variado 24H / 35-37º C + 3 dias a TA Pigmento amarelo / amarelo-alaranjado S. aureus • PS/A: Adesina associada ao polissacarídeo capsular, aderência a materiais biológicos; • PIA: Adesina intercelular polissacarídica; Staphylococcus saprophyticus • ITU em mulheres jovens, sadias e sexualmente ativas; • 2ª Causa de cistite não complicada; • Colonização do reto: 40%; Staphylococcus haemolyticus • 2ª espécie coagulase negativa mais frequente; • Bacteremias, infecções de feridas, infecções neonatais e pediátricas; Diagnóstico Laboratorial Exame Direto • Método de Gram: Cocos Gram-Positivos; • Aos pares, cadeias curtas, em grupos; Isolamento • Ágar Sangue; • Colônias lisas e convexas; Diferenciação Preliminar Teste da Catalase • Diferencia a família Micrococcacea e a família Streptococcaceae; • H2O2 = H2O + CO2; • Evitar colônias de Ágar Sangue; • Positivo: Staphylococcus sp., Micrococcus sp.; • Negativo: Streptococcus sp.; Identificação de S. aureus Teste da Coagulase em Lâmina • Coagulase ligada; • Fator de agregação na superfície da parede celular; • Reage com fibrinogênio: Aglutinação; • Diferencia S. aureus de outros estafilococos; • Confirmação com coagulase em tubo; • Não fazer a partir de meios com sal; Teste da Coagulase em Tubo • Coagulase extracelular (livre) + fator de reação a coagulase + fibrinogênio = Fibrina; • Incubação a 35ºC em banho maria; NÃO PODE ser utilizada para diferenciar Estafilococos de outros gêneros GÊNERO STAPHYLOCOCCUS ANÁLISES MICROBIOLÓGICAS • Negativo: Manter a TA por 18-24H; • Utilizar Plasma de Coelho com EDTA e nunca com CITRATO; Ágar Manitol Salgado • Meio seletivo; • Diferencia S. aureus de outros estafilococos; • Composição: Manitol (1%), NaCl (7,5%), Vermelho de Fenol e Peptonas; Ágar DNAse • DNAse ou nuclease termoestável – Hidrólise do DNA; • Indicador: Azul de Toluidina; • DNA degradado após 24h de incubação a 35ºC: Cor rosa ao redor da colônia; Identificação de Estafilococos Coagulase - Teste de Resistência a Novobiocina • Identificação de S. saprophyticus; • Ágar Muller- Hinton, escada de McFarland 0,5, disco de Novobiocina 5µg; • Halo <16 mm: Resistência; Teste PYR (Pirrolidonil Arilamidase) • Baseado na hidrólise do L- pirrolidonil-β-naftilamida, pela enzima Arilamidase; • Positivo: Vermelho – S. haemolyticus; S. lugdunensis; • Negativo: Amarelo ou Alaranjado – S. epidermidis; S. aureus; Gênero Staphylococcus Gram Positivo Catalase Positivo Coagulase em Tubo / Lâmina (+) S. aureus S. lugdunensis DNAse S. aureus Teste Manitol Salgado S. aureus Coagulase em Tubo / Lâmina (-) S. saprophyticus S. epidermidis S. haemolyticus Resistência a Novobiocina (R) S. saprophyticus Resistência a Novobiocina (S) S. epidermidis S. haemolyticus PYR (+) S. haemolyticus PYR (-) S. epidermidis
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