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ROTEIRO DA PRÁTICA DE ANTIBIOGRAMAS
WAAW 2022
PROCEDIMENTO TÉCNICO
1. Retirar as placas e os discos do refrigerador da geladeira e/ou freezer cerca
de 20 a 30 minutos para que adquiram a temperatura ambiente antes da
execução do procedimento;
2. Utilizar as colônias provenientes de cultura recente e, com uma alça
bacteriológica, tocar na colônia a ser testada;
3. Suspendê-la em salina estéril (NaCl 0,85%) até se obter uma turvação
compatível com a Escala 0,5 de Mac Farland (1x108 UFC/mL). A amostra
não pode ficar mais de 15 minutos em salina.;
4. Embeber um swab estéril na suspensão bacteriana, comprimindo-o contra as
paredes do tubo para tirar o excesso da suspensão;
5. Semear em seguida de forma suave em pelo menos 5 direções na placa,
abrangendo toda a superfície;
6. Aguardar aproximadamente 10 a 15 minutos para a superfície do ágar secar;
7. Com auxílio de uma pinça flambada e resfriada, colocar os discos de
antimicrobiano sobre a superfície do meio inoculado, exercendo uma leve
pressão com a ponta da pinça para uma boa adesão dos discos;
8. Inverter as placas e verificar se os discos não se desprendem da superfície
do ágar.;
9. Incubar em até 15 minutos após a aplicação dos discos em estufa à 36°C por
18 a 24 horas. Se as placas forem deixadas em temperatura ambiente após a
aplicação dos discos, a pré-difusão pode resultar em halos de inibição
erroneamente aumentados.
LEITURA E INTERPRETAÇÃO
1. Com o auxílio de uma régua ou paquímetro medir o diâmetro dos halos
inibitórios de cada disco;
2. Consultar a tabela apropriada para determinar a sensibilidade ao
antimicrobiano testado, como o BrCAST e o CLSI;
3. As bordas dos halos de inibição devem ser medidas no ponto de completa
inibição do crescimento, a olho nu com a placa posicionada a cerca de 30 cm
dos olhos, sendo consideradas algumas exceções;
4. A visualização deve ser realizada no fundo da placa (parte posterior) de
Mueller Hinton, preferencialmente sob luz refletida e contra um fundo escuro.
Sensível (S): A infecção pode ser tratada com a dosagem recomendada do
antimicrobiano.
Resistente (R): Concentrações sistêmicas usuais do antimicrobiano, não inibem o
microrganismo, gerando ineficácia clínica.
Intermediário (I): Microrganismos com CIMs do antimicrobiano que alcançam níveis
sistêmicos e teciduais, mas a resposta é baixa.
PRECAUÇÕES E CUIDADOS ESPECIAIS
● Seguir padronização técnica para execução da prova;
● As placas devem ter espessura média de 4 mm;
● O inóculo deve seguir o padrão de turbidez do tubo 0,5 da escala de
Macfarland, ou seja, a concentração de 1x108 UFC/mL;
● Inóculos mais carregados (acima do padrão 0,5 da escala Mac Farland)
fornecem resultados falsamente diminuídos e inóculos mais fracos resultados
falsamente aumentados;
● A pré-incubação da placa em estufa por 5 minutos após a inoculação com o
swab é importante para remover o excesso de umidade, que pode causar a
difusão errática do antibiótico após a implantação dos discos;
● Observar critérios para escolha dos antibióticos apropriados para a bactéria
em análise e suas resistências intrínsecas;
● Aguardar para que os materiais atinjam a temperatura ambiente no momento
do uso, e guardá-los em temperatura apropriada imediatamente após o uso;
● A temperatura de incubação deve ser controlada;
● O tempo de incubação indicado não deve ser nem abreviado e nem
aumentado, sob risco de se obterem resultados falsamente diminuídos
(pouco tempo) ou aumentados (mais tempo);
● Para as placas com tamanho 90x15mm recomenda-se a colocação de no
máximo 6 discos, já para a placa com 140x15mm podem ser colocados até
12 discos. Isso pode impedir o contato entre os antimicrobianos difundidos no
meio, o que poderia gerar as distorções ligadas ao sinergismo ou aos outros
tipos de interação;
● Discos de penicilina e derivados devem ter a umidade controlada para evitar
a degradação dos antimicrobianos;
● O método deve ser realizado no tempo 15 x 15 x 15 (15 minutos para
semeadura x 15 minutos para aplicação dos discos e 15 minutos para levar
as placas à estufa);
● A temperatura, tempo e atmosfera de incubação devem ser verificada em
cada tabela
REFERÊNCIA BIBLIOGRÁFICA:
BrCAST - Método de Disco-Difusão para Teste de Sensibilidade aos
Antimicrobianos Versão 9.0, janeiro de 2021 do EUCAST. Versão para o português
em 24/6/2021-http://brcast.org.br/
http://brcast.org.br/