ED CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLOGICO - UNIP - FARMACIA (8 SEMESTRE)

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Exercício 1
As cabines de segurança biológica são usadas para contenção de aerossóis que podem ser
espalhados durante o trabalho, contaminando a superfície e também o filtro
HEPA. Apresentamos a seguir uma tabela com a classificação das cabines de segurança
biológica.
	Classe I 
	Similar às Capelas de Laboratório, não requer proteção ao produto, 100% de
exaustão através de filtro HEPA.
	Classe II 
	Tipo A: 70% de recirculação no interior da cabine; 30% de exaustão através de
filtro HEPA; plenum de configuração comum; ar que sai do filtro HEPA de
exaustão pode retornar para o laboratório.
Tipo B1: 30% de recirculação no interior da cabine; 70% de exaustão através do
filtro HEPA, plenum de configuração separada, deve ser exaurido para o
exterior.
Tipo B2: 100% de exaustão através de filtro HEPA para o exterior.
Tipo B3: 70% de recirculação no interior da cabine; 30% de exaustão através do
filtro HEPA; plenum de configuração comum; deve ser exaurido para o exterior.
	Classe III 
	Aplicações especiais; 100% de exaustão através de filtro HEPA para o exterior;
manipulação reservada de materiais através de barreiras físicas (luvas).
A superfície de trabalho e as paredes interiores devem ser descontaminadas, diariamente, com
desinfetantes, preconizados pelo Ministério da Saúde. Para descontaminação profunda e antes
das trocas dos filtros, preconiza-se utilizar EXCETO
A) álcool etílico 70%.
B) álcool isopropílico 70%.
C) formaldeído.
D) ácido peracético 0,5%.
E) hipoclorito de sódio 0,02% a 1%.
Justifique sua resposta: O uso de formaldeído é extremamente tóxico para as mucosas gástricas e nasais, além de ser classificado como cancerígeno para humanos segundo o IARC.
Exercício 2
Observe e analise com atenção a tabela abaixo referente aos conceitos importantes no
controle de qualidade microbiológico de produtos farmacêuticos e cosméticos.
	Nomenclatura
	Descrição
	Pasteurização
	Este processo consiste em submeter o leite a um nível de aquecimento
onde todos os microrganismos patogênicos presentes neste alimento
sejam destruídos. É importante que este processo não cause alterações
físico-químicas e organolépticas e, também, não deve alterar o valor
nutritivo do produto. Sendo assim, o leite pasteurizado deve ser
garantido do ponto de vista higiênico-sanitário, deve apresentar
características semelhantes, ao máximo, ao produto natural e, por
último, apresentar mais conservação, pois há a destruição de,
aproximadamente, 99% da microbiota presente no leite. Não é eficiente
contra esporos bacterianos. Na pasteurização, o leite é elevado a uma
temperatura de 72ºC e 75ºC por um tempo de 15 a 20 segundos e, em
seguida, é resfriado rapidamente a 3ºC para garantir a conservação do
produto.
	Radiação UV
	A luz ultravioleta compreende a porção do espectro que vai de 150 a
3900 A, porém o comprimento de onda que possui maior atividade
bactericida está ao redor de 2650 A. A radiação não ionizante é
absorvida por várias partes celulares, mais o maior dano ocorre nos
ácidos nucléicos, que sofrem alteração de suas pirimidas. Formam-se
dímeros de pirimida e se estes permanecem (não ocorre reativação), a
réplica do DNA pode ser inibida ou podem ocorrer mutações. A radiação
ultravioleta não pode ser utilizada como processo de
esterilização. Fatores como matéria orgânica, comprimento de onda,
tipo de material, tipo de microrganismo e intensidade da
radiação interferem na sua ação germicida. Além disso, a radiação não
ionizante não tem poder de penetração, age apenas sobre a superfície
onde os raios incidem e não atravessam tecidos, líquidos, vidros, nem
matéria orgânica. Alguns autores relatam ainda que o vírus HIV tem alta
resistência à luz ultravioleta. A aplicação da luz ultravioleta em hospitais
se restringe à destruição de microrganismos do ar ou inativação destes
em superfície.
	Autoclave
	Autoclave é um tipo de equipamento que realiza o processo de
esterilização através de vapor aquecido e sob pressão. É reconhecido
em todo o mundo como o mais eficiente método de esterilização. É
utilizada com temperatura de 121º C, por 30 minutos de ciclo.
	Álcool Etílico 70%
	A sua atividade microbiana ocorre provavelmente pela desnaturação de
proteínas e remoção de lipídios, inclusive dos envelopes de alguns
vírus. Para apresentar sua atividade germicida máxima, o álcool deve
ser diluído em água, que possibilita a desnaturação das proteínas. A
concentração recomendada para atingir maior rapidez microbicida com
o álcool etílico é de 70% em peso.
	Filtração Membrana de
Nitrocelulose
	É a passagem de um líquido ou gás através de um material semelhante
a uma tela, com poros pequenos o suficiente para reter os
microrganismos, menos virus. A filtração é usada para esterilizar os
materiais sensíveis ao calor, como alguns meios de cultura, enzimas,
vacinas e soluções antibióticas. Filtros de membrana compostos de
substâncias como ésteres de celulose ou polímeros plásticos, tornaram
se populares para uso industrial e laboratorial. Filtros HEPA (High
Efficiency Particulate Air) removem quase todos os microrganismos
maiores que cerca de 0,3 micrometros de diâmetro.
De acordo com os dados da tabela acima e dadas as afirmativas abaixo quanto aos métodos
de controle de microrganismos:
I. A autoclave utiliza vapor sobre pressão e pode alcançar a temperatura de 121 ºC, em nível
do mar, que é capaz de eliminar vírus, microrganismos vegetativos e esporos bacterianos,
após 10 minutos.
II. O álcool etílico a 98% é um agente bactericida mais eficaz que o álcool etílico (etanol) a
70%.
III. A pasteurização do leite promove a destruição dos microrganismos patógenos, mas pode
ser ineficiente na eliminação de esporos bacterianos.
IV. A filtração com membranas de nitrocelulose com 0,22 μm de diâmetro é eficaz para
eliminação de bactérias e esporos bacterianos.
V. A luz ultravioleta inibe a duplicação do DNA dos microrganismos e pode ser utilizada para
desinfecção de superfícies de instrumentais.
Verifica-se que estão CORRETAS apenas
A) I e II.
B) II e IV.
C) III, IV e V.
D) I, III e V.
E) I, III e IV.
Justifique sua resposta: A afirmação I, está errada pois a autoclave a 121°C o tempo necessário é de 30 minutos.
A afirmação II, também está errada porque o álcool etílico 70% é mais eficiente que o álcool etílico 98%, como agente bactericida já que sua porcentagem de água facilita a entrada do álcool no interior da célula bacteriana, e retarda a evaporação, permitindo maior tempo de contato.
Exercício 3
Os medicamentos estéreis são produzidos em processos mais controlados a fim de garantir a
esterilidade dos produtos até o momento da sua utilização. Esterilização é o processo pelo qual
os micro-organismos vivos são removidos ou mortos a tal ponto que não seja mais possível
detectá-los no meio de cultura padrão no qual previamente haviam se proliferado.
De acordo com as orientações da ANVISA e da Farmacopeia Brasileira, a esterilidade de um
produto pode ser comprovada analiticamente através do teste de esterilidade. Apesar desta
exigência, o teste de esterilidade não é obrigatório para o FDA, USP e Farmacopeia Europeia.
Para garantir a esterilidade de um produto é importante estudar o método a ser usado na
esterilização, incluindo as influências da embalagem e recipiente na qualidade microbiológica
do produto, uma vez que existem diversos métodos de esterilização que podem ser mais
aplicáveis em determinadas situações e menos em outras.
Para se obter uma esterilização mais eficaz, menos tóxica e de baixo custo, qual das
alternativas a seguir apresenta a resposta correta?
A) Formaldeído.
B) Glutaraldeído a 2%.
C) Ácido peracético.
D) O calor úmido na forma de vapor saturado sob pressão.
E) Óxido de etileno e glutaraldeído.
Justifique sua resposta: Como vantagens do vapor úmido na forma de vapor saturado sob pressão, é possível considerar o rápido aquecimento e a penetração do calor e a destruição de esporos microbianos em curto período de exposição, além de ser um processo econômico, de fácil controle de qualidade e não deixa resíduos tóxicos nosmateriais submetidos ao processo de esterilização.
 Exercício 4
A produção de medicamentos está sujeita a um rigoroso controle por parte da própria empresa
e por parte de agências reguladoras como a Agência Nacional de Vigilância Sanitária
(ANVISA). O controle total e seguro da produção de medicamentos estéreis são dependentes
da qualidade dos processos em todos os setores produtivos, mas os setores da Garantia e
Controle de Qualidade assumem papel importante na questão dos registros das informações e
na validação do processo. Os medicamentos estéreis são produzidos em processos mais
controlados a fim de garantir a esterilidade dos produtos até o momento da sua utilização. O
teste de esterilidade é a demonstração de que um produto é estéril por meio da realização de
um ensaio microbiológico em uma quantidade pré - estabelecida de amostras conforme a
apresentação e tamanho do lote, mas apresenta desvantagens como a incapacidade de
detectar amostras contaminadas em lotes com baixa porcentagem de contaminação (2% de
contaminação, por exemplo) e o tempo necessário para a realização do ensaio que impede a
liberação do medicamento para a venda. O teste de esterilidade é um ensaio aplicado em
insumos farmacêuticos, medicamentos e produtos para a saúde que, de acordo com a
Farmacopeia Brasileira, 6ª ed. (2019), devem ser estéreis.
A interpretação do ensaio se dá pela avaliação dos meios de cultura empregados, quanto à
presença ou ausência de microrganismos durante o tempo de incubação. Esse tempo deve ser
de:
A) 14 dias.
B) 21 dias.
C) 07 dias.
D) 05 a 07 dias.
E) 10 dias.
Justifique sua resposta: Segundo a Farmacopeia Brasileira 6ª edição – volume 1 (página 417) para se confirmar a esterilidade, a amostra representativa deve ser incubada nas condições específicas por 14 dias, e não devem ocorrer crescimento microbiano.
Exercício 5
Um medicamento na forma líquida foi submetido ao ensaio de contagem microbiana por meio
de diluição em placas contendo ágar, para verificação do número de microrganismos totais no
produto. As leituras das placas com as diluições são apresentadas na tabela abaixo.
(Considere que o método utilizado foi o de semeadura em profundidade)
	Diluição
	Colônias por placa
	1:1000
	228
	1:1000
	245
	1:10000
	37
	1:10000
	22
É correto afirmar que o número de unidades formadoras de colônia, por mL, no produto
(UFC/mL) é:
A) 1,06 x 105 UFC/mL.
B) 2,66 x 105 UFC/mL.
C) 2,66 x 106 UFC/mL.
D) 1,06 x 106 UFC/mL.
E) 2,06 x 105 UFC/mL.
Justifique sua resposta:
228 + 245 = 473 / 2 x 1000 = 236500 
37 + 22 = 59 / 2 x 10000 = 295000 
 
236500 + 295000 = 531500 / 2 = 265750 
2,66 x 105 UFC/ml
Exercício 6
Entre os equipamentos de laboratório apresentados nas figuras abaixo, o equipamento
adequado para a esterilização de soluções empregando-se calor úmido é o:
A) 1
B) 2
C) 3
D) 4
E) 5
Justifique sua resposta: As autoclaves utilizadas para esterilização por calor úmido são constituídas de uma câmara em aço inox.
2ª imagem é um destilador
3ª imagem é uma estufa
4ª imagem é uma centrífuga
5ª imagem é uma capela
Exercício 7
A avaliação da qualidade microbiológica de medicamentos e cosméticos consistem na
determinação da carga microbiana viável e na comprovação da ausência de microrganismos
específicos considerados de risco para o usuário. A seguir analise a tabela abaixo com atenção
e responda a questão.
	Contagem em
Placa
	Um dos métodos quantitativo direto de crescimento de microrganismos.
Técnica mais utilizada na determinação do tamanho da
população bacteriana. Vantagem: qualificação de células viáveis.
Desvantagem: tempo – 24 horas para o aparecimento das colônias.
Cálculo: nº de colônias na placa x índice de diluição da amostra = nº de
bactérias/mL
	Contagem direta
ao microscópio
	Um volume conhecido de suspensão bacteriana é colocado em uma
área definida da lâmina de microscópio. A amostra pode ser corada ou
analisada a fresco. Utilizam câmaras de contagem (Petroff-Hausser).
Desvantagens: a) não separa células mortas e vivas, b) pode haver
erros de contagem e c) difícil contagem para bactérias móveis.
	Filtração em
membrana
	Concentração de bactérias sobre a superfície de uma membrana de
filtro de poros muito pequenos após a passagem de um volume de 100
mL de água. O filtro posteriormente é transferido para uma placa de
Petri contendo meio sólido.
	Tubos múltiplos
	Utilizado para microrganismos que não crescem bem em meio
sólido.Contagem do nº de tubos positivos. Cálculo de estimativa do nº
de células/mL de bactérias (Tabela de combinações – NMP).
	Turbidimetria
	A turbidimetria é um método de medida da redução da transmissão de
luz em um meio provocado pela formação de partículas. Ela é
determinada graças a um sistema ótico que mede a absorbância de um
raio luminoso que atravessa a suspensão. Tal absorbância será maior
ou menor a depender da concentração do espécime analisado e do
tamanho da partícula. O equipamento utilizado para realizar o teste
chama-se turbidímetro.
São métodos para quantificar o crescimento microbiano:
A) contagem em placas, tubos multiplos, filtração em membrana, turbidimetria e contagem
direta no microscópio.
B) somente a contagem em placas.
C) somente a turbidimetria.
D) somente os tubos múltiplos.
E) somente filtração em membrana.
Justifique sua resposta: São métodos para quantificar o crescimento microbiano em amostras de medicamentos e cosméticos.
Exercício 8
Apresentamos abaixo a tabela estatística utilizada para os testes do NMP. Observe
atentamente a tabela e depois responda a questão.
Sobre a estimativa do quantitativo de agentes microbianos na análise de controle de qualidade
microbiológico, todas as afirmativas estão corretas, EXCETO:
A) As técnicas de contagem em placas permitem a visualização de formação de colônias, a
partir de um número "fixo" de células viáveis. São utilizadas, portanto, para obter a contagem
de unidades formadoras de colônias (UFC) presentes na amostra sob análise.
B) Como os meios de cultura utilizados na técnica de NMP têm por objetivo recuperar células
sob "stress", esta técnica permite maior confiabilidade no resultado e a confirmação do
microrganismo pesquisado no mesmo período de tempo do que a contagem em placas.
C) A técnica do Número Mais Provável (NMP) é um método que permite estimar a densidade
de organismos viáveis presentes em uma amostra sob análise. Esta técnica tem por base a
probabilidade estatística relacionada com a frequência e a ocorrência de resultados positivos
mais prováveis, em função do número real dos microrganismos presentes.
D) A técnica do NMP não permite contagem "fixa" de células viáveis ou de UFC, como
acontece com a técnica de contagem em placas. O uso da técnica do NMP se justifica
principalmente quando é necessário estimar o número de células viáveis não detectadas
(visualizadas) pela contagem em placas.
E) Como os meios de cultura utilizados na técnica de NMP não têm por objetivo recuperar
células sob "stress", esta técnica permite menor confiabilidade no resultado e a confirmação do
microrganismo pesquisado no mesmo período de tempo do que a contagem em placas.
Justifique sua resposta: Esta técnica não permite confiabilidade ou confirmação do microrganismo pesquisado no mesmo tempo do que a contagem em placa (Portaria nº101, de 11 de agosto de 1993).
Exercício 9
(ENADE–2007) Pela RDC 67, de 08/10/2007, todas as farmácias com manipulação devem
garantir a qualidade físico-química e microbiológica da sua água potável. Esta será o ponto de
partida para a obtenção da água purificada, a ser utilizada em todas as preparações
farmacêuticas. Para melhorar a qualidade da água potável podem ser realizados alguns pré-
tratamentos, além de um tratamento posterior de purificação, de forma a se obter a água
purificada. Este método será escolhido pelo Farmacêutico responsável, de acordo com suas
necessidades. Uma combinação possível das etapas de pré-tratamento e tratamento,
respectivamente, é:
A) filtração e abrandamento.
B) filtração e osmose reversa.
C) troca iônica e destilação.
D) destilaçãoe troca iônica.
E) destilação e osmose reversa.
Justifique sua resposta: Na alternativa A está incorreta pois o processo de abrandamento é um pré-tratamento, utilizado apenas para remover a dureza da água, não removendo contaminantes críticos.
Na alternativa C e D estão incorretas, pois ambas são usadas em técnicas de tratamento, já que troca iônica é uma reação química reversível, e a destilação é um processo no qual a água é aquecida até evaporar.
Na alternativa E, a destilação não pode ser utilizada como pré-tratamento, pois esta não remove sólidos em suspensão.
Portanto a alternativa B é a correta, pois a filtração e uma etapa de pré-tratamento, e tem propriedades de reter praticamente todos os sólidos em suspensão; E a osmose trata a água, pois tem a capacidade de remover um amplo espectro de contaminantes.
Exercício 10
Analise as afirmativas a seguir e julgue-as em verdadeira (V) ou falsa (F) com base na
Resolução RDC Nº 275, de 21/10/2002, da ANVISA sobre requisitos específicos para
elaboração dos procedimentos operacionais padronizados.
	( )
	Os estabelecimentos produtores/industrializadores de alimentos devem desenvolver,
implementar e manter para cada item relacionado abaixo, Procedimentos
Operacionais Padronizados - POPs.
a) Higienização das instalações, equipamentos, móveis e utensílios.
b) Controle da potabilidade da água.
c) Higiene e saúde dos manipuladores.
d) Manejo dos resíduos.
e) Manutenção preventiva e calibração de equipamentos.
f) Controle integrado de vetores e pragas urbanas.
g) Seleção das matérias-primas, ingredientes e embalagens.
h) Programa de recolhimento de alimentos.
	( )
	Os POPs devem ser aprovados, datados e assinados pelo responsável técnico, pelo
responsável pela operação, pelo responsável legal e/ou pelo proprietário do
estabelecimento, firmando o compromisso de implementação, monitoramento,
avaliação, registro e manutenção dos mesmos.
	( )
	A frequência das operações e nome, cargo e ou função dos responsáveis por sua
execução devem estar especificados em cada POP. Os funcionários devem estar
devidamente capacitados para execução dos POPs. Quando aplicável, os POPs
devem relacionar os materiais necessários para a realização das operações assim
como os Equipamentos de Proteção Individual.
	( )
	A empresa deve se prever de registros periódicos suficientes para documentar a
execução e o monitoramento dos Procedimentos Operacionais Padronizados, bem
como a fazer a adoção de medidas corretivas. Esses registros consistem de anotação
em planilhas e ou documentos e devem ser datados, assinados pelo responsável pela
execução da operação e mantidos por um período superior ao tempo de vida de
prateleira do produto.
	( )
	A implementação dos POPs deve ser monitorada periodicamente de forma a garantir
a finalidade pretendida, sendo adotadas medidas corretivas em casos de desvios
destes procedimentos. As ações corretivas devem contemplar o destino do produto, a
restauração das condições sanitárias e a reavaliação dos Procedimentos
Operacionais Padronizados.
Assinale a opção que apresenta a sequência correta.
A) V, V, V, V e V.
B) F, F, V, V e V.
C) V, F, F, V e V.
D) F, V, V, F e V
E) F, F, F, F e F.
Justifique sua resposta: Todas as opções estão corretas, pois atendem as normas e procedimentos operacionais padrões para o controle de qualidade microbiano.
Exercício 11
Abaixo representamos esquematicamente uma série de diluições seriadas de amostras para
análises microbiológicas através de contagem microbiana.
Na preparação de uma amostra para análise microbiológica, foram preparadas três (3)
diluições sequenciais. 1:10, 1:100 e 1:1000. De cada uma dessas três diluições, foi retirada
uma alíquota de 0,1 mL e semeada em três (3) placas de Petri, contendo meio de cultura
adequado para a análise. O resultado de crescimento de colônias, após 48 horas de incubação
a 35ºC e observado através do contador de colônias, foi de:
- 25 colônias na placa nº 01 (diluição 1:10)
- 13 colônias na placa nº 02 (diluição 1:100)
- 4 colônias na placa de nº3 (diluição 1:1000)
A quantidade de bactérias por UFC/mL presentes na amostra é de
A) 1,85 x 103 UFC/mL
B) 5,55 x 103 UFC/mL
C) 2,75 x 103 UFC/mL
D) 1,15 x 104 UFC/mL
E) 1,76 x 103 UFC/mL
Justifique sua resposta:
CM = média x fator de diluição
R x 10-1 + R x 10-2 + R x 10-3
25 x 10 = 250 
13 x 100 = 1.300 
4 x 1000 = 4000 
 
X = 5500
5500 / 3 = 1833,3333
X = 1833,3333 / 1000
X = 1,833333 x 103 UFC/ml
Exercício 12
Considerando a tabela abaixo, que apresenta a classificação dos microrganismos segundo
suas faixas ótimas de temperaturas para multiplicação, assinale a opção correta.
A) No grupo IV, estão representados os microrganismos termófilos.
B) No grupo III estão os microrganismos que crescem melhor em temperaturas altas, acima de
55 °C.
C) No grupo II estão incluídos os microrganismos psicrófilos.
D) No grupo III estão os microrganismos que crescem em uma ampla faixa de temperaturas.
E) No grupo I, estão incluídos os microrganismos mesófilos.
Justifique sua resposta: No Grupo I, estão incluídos os microrganismos mesófilos, pois os mesófilos são os microrganismos que crescem em temperatura corporal e as outras opções não correspondem os microrganismos com suas faixas de crescimento. No grupo II, estão os microrganismos termófilos, que crescem em altas temperaturas. E no grupo III estão os psicrófilos, que se desenvolvem em temperaturas amenas (entre 15°C).
Exercício 13
Abaixo apresentamos uma tabela com os métodos mais utilizados de contagem de
microrganismos, no controle de qualidade microbiológico de produtos farmacêuticos e
cosméticos. Após análise criteriosa desta tabela, responda a questão.
	Contagem em Placa 
	É um método de inoculação, onde se introduz uma quantidade de
amostra num meio de cultura adequado.
	Filtração em
membrana
	Concentração de bactérias sobre a superfície de uma membrana de filtro
de poros muito pequenos após a passagem de um volume de 100 mL de
água. O filtro posteriormente é transferido para uma placa de Petri
contendo meio sólido.
	Tubos múltiplos
(NMP)
	Utilizado para microrganismos que não crescem bem em meio
sólido.Contagem do nº de tubos positivos. Cálculo de estimativa do nº de
células/mL de bactérias (Tabela de combinações – NMP).
Assinale a opção correta sobre os métodos utilizados para contagem de microrganismos.
A) A técnica de determinação do número mais provável é feita colocando-se uma amostra em
uma lâmina especial, com um poço com dimensão conhecida, a qual é levada ao microscópio
para contagem das células.
B) A contagem em placas é um método utilizado para determinar a quantidade de células vivas
e mortas.
C) A contagem por plaqueamento só pode ser usada para materiais com alta concentração
microbiana.
D) A contagem por plaqueamento é o principal método de contagem de células por ser um
método rápido.
E) A técnica de determinação do número mais provável é uma técnica estatística e bastante útil
para contagem de microrganismos que apresentam uma determinada característica
metabólica.
Justifique sua resposta: Na opção A não é feito em lâmina especial, a opção B não determina células mortas, a opção C não é feita em alta concentração, e a opção D o método de plaqueamento não é um método rápido
Exercício 14
Em relação à técnica do Número Mais Provável (NMP) é correto afirmar que essa técnica apresenta resultados, lidos em uma tabela.
A) menos exatos que a contagem em placas e está baseada na chance estatística de uma
determinada combinação de tubos serem positiva, sendo normalmente usada quando se
espera um baixo número de microrganismos.
B) mais exatos que a contagem em placas e está baseada na chance estatística de uma
determinada combinação de tubos serem positiva, sendo normalmente usada quando se
espera um alto número de microrganismos.
C) menos exatos que a contagem em placas e está baseada na chance estatística de uma
determinada combinação de tubos serem positiva, sendo usada apenas da determinação de
coliformes totais e termotolerantes.
D) baseados na chance estatísticade uma determinada combinação de tubos serem positiva,
sendo usada apenas quando se espera um alto número de microrganismos.
E) baseados na chance estatística de uma determinada combinação de tubos serem positiva,
sendo usada apenas para recuperar microrganismos que foram submetidos a stress.
Justifique sua resposta: Essa técnica não permite uma contagem exata de células como ocorre com a contagem em placas. A técnica NMP permite enumerar diferente grupos e espécies de microrganismo estimando a contagem a partir de referências estatísticas.
Exercício 15
A atividade da coagulase é utilizada para distinguir espécies patogênicas de Staphylococcus de
espécies não patogênicas, sendo um bom indicador da patogenicidade do S.aureus. A prova
da coagulase em tubo consiste em colocar 0,5 mL de plasma em tubo de ensaio; Adicionar
uma alçada de colônia diretamente no plasma de coelho com EDTA; Incubar por 4 h a 35±2ºC
em estufa ou banho-maria; caso não haja formação de coágulo, incubar por 24 h. Formação de
coágulo inteira ou parcial identifica Staphylococcus aureus; Não há formação de coágulo,
identifica Staphylococcus coagulase negativa, conforme figura abaixo:
A) que determina a capacidade do microrganismo de produzir coagulase uma enterotoxina
capaz de coagular o plasma.
B) que verifica a capacidade dos estafilococos (produtores de coagulase) de coagularem o
protoplasma de coelhos.
C) de identificação de Staphylococcus aureus com base na reação antigênica da coagulação.
D) que determina a capacidade do microrganismo de produzir coagulase, uma enzima
produzida por espécies de S. aureus e S. epidermidis.
E) que determina a capacidade do microrganismo de produzir coagulase e está diretamente
relacionada a capacidade de produzir catalase.
Justifique sua resposta: É a análise bioquímica que identifica S. aureus, pois ligada a superfície da parede celular, produz a enzima coagulase, que reage com o fibrinogênio do plasma, causando a coagulação do mesmo, sendo considerados causadores de infecção no homem.
Exercício 16
Os meios de cultura são ferramentas importantes nos mais diversos estudos microbiológicos,
permitindo a obtenção de informações sobre a biologia destes. Apresentamos a seguir uma
figura que representa de forma geral o preparo de um meio de cultura:
Nesses meios, os microrganismos podem ser mantidos por longos períodos, uma vez que
vários nutrientes são adicionados em sua formulação. No meio de cultura, a adição de ágar 1-
2% tem a finalidade de atuar como:
A) fonte de carboidrato.
B) doador de nitrogênio.
C) fornecedor de energia.
D) substrato para a reprodução.
E) agente solidificante.
Justifique sua resposta: Os meios de cultura podem ser classificados de acordo com seu estado físico. Os meios de cultura sólidos são preparados a partir da adição de um agente solidificante (ágar). O ágar é um polímero espessante de algas, pois mantém sua firmeza em temperaturas necessárias para o crescimento de muitos patógenos.
Exercício 17
Assinale a alternativa que descreve o procedimento correto referente à operação da autoclave
para esterilização de meios e vidrarias em condições normais:
A) verificar o nível da água; carregar a autoclave; ligar a resistência; fechar hermeticamente a
tampa inclusive a válvula de saída de vapor; quando a temperatura de 121°C for atingida,
marcar o tempo; desligar; esperar a pressão baixar para abrir e retirar o material.
B) verificar o nível da água; carregar a autoclave; ligar a resistência; fechar hermeticamente a
tampa deixando a válvula de saída de vapor aberta; esperar o início da saída de vapor para
fechar a válvula de descarga de vapor; quando a temperatura de 121°C for atingida, marcar o
tempo; desligar; esperar a pressão baixar para abrir e retirar o material.
C) verificar o nível da água; carregar a autoclave; ligar a resistência; fechar hermeticamente a
tampa deixando a válvula de saída de vapor aberta; quando a temperatura de 115°C for
atingida, marcar o tempo; desligar; esperar a pressão baixar para abrir e retirar o material.
D) verificar o nível da água; carregar a autoclave; ligar a resistência; fechar hermeticamente a
tampa deixando a válvula de saída de vapor aberta; esperar o início da saída de vapor para
fechar a válvula de descarga de vapor; quando a temperatura de 121°C for atingida, marcar o
tempo; desligar; abrir completamente a válvula de descarga de pressão e, por último, abrir a
autoclave e retirar o material.
E) verificar o nível da água; carregar a autoclave; ligar a resistência; fechar hermeticamente a
tampa deixando a válvula de saída de vapor fechada; abrir a válvula de descarga de vapor;
quando a temperatura de 121°C for atingida, marcar o tempo; desligar; esperar a pressão
baixar e abrir a tampa para retirar o material.
Justifique sua resposta: Para esterilizar por autoclave é necessário seguir os seguintes passos: não encher o nível de água até o máximo, pois ficará espaço para a circulação do vapor, e nem deixar abaixo da resistência. Deve-se fechar a tampa mantendo a válvula de expulsão de ar aberta. Ligar a autoclave no máximo, e quando começar a sair vapor, fechar a válvula. 
Quando o aparelho atingir a temperatura de 121°C, mudar a temperatura para o médio, e esperar 15 minutos. Após esse período, desligar a autoclave e só abrir a tampa quando o manômetro estiver no zero.
Por esse motivo, as demais alternativas estão erradas, pois
A) A válvula de saída deve ficar aberta;
B) Não esperar o início de saída de vapor para fechar a válvula de descarga de vapor;
C) Não esperar a pressão baixar para abrir e retirar o material;
D) A válvula de saída deve estar aberta antes de iniciar a saída de vapor da válvula, e esperar a saída de vapor para fechar a válvula de descarga de vapor.
Exercício 18
A Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) é uma técnica de Biologia Molecular que permite
replicação in vitro do DNA de forma extremamente rápida. Com a PCR, quantidades mínimas
de material genético podem ser amplificadas milhões de vezes em poucas horas, permitindo a
detecção rápida e fiável dos marcadores genéticos de doenças infecciosas, cancro ou doenças
genéticas. A PCR está desenhada de acordo com o princípio natural de replicação de DNA.
Este é um processo que decorre em três passos, que em conjunto se designam como um ciclo
e que se repete um número específico de vezes. Assim, um ciclo de PCR consiste nos
seguintes passos: Desnaturação térmica, Hibridização ou Annealing e Extensão (Figura
abaixo). Este processo tem lugar num termociclador, um equipamento que automaticamente
controla e alterna as temperaturas durante períodos programados de tempo para o número
apropriado de ciclos de PCR (geralmente entre 30 e 40 ciclos). Portanto, a reação em cadeia
da polimerase (do inglês, Polymerase Chain Reaction, PCR) é uma metodologia que permite,
entre outras, a identificação de microrganismos patogênicos a um custo menor que o de uma
reação.
Com relação aos cuidados na execução da técnica do PCR para pesquisa de microrganismos,
é correto afirmar que:
A) pode ser realizada sem cuidados com contaminação ambiente, pois não se trata de método
de cultivo.
B) deve-se ter o cuidado com contaminações por produtos que foram anteriormente
amplificados, pois podem resultar em falsos positivos.
C) as bancadas devem ser descontaminadas, mas não há necessidade de cuidados com
formação de aerossóis durante a técnica de pipetagem.
D) as bancadas não precisam ser descontaminadas, mas há necessidade de cuidados com
formação de aerossóis durante a técnica de pipetagem.
E) as ponteiras com filtro não são usadas para evitar a contaminação do operador e não a
contaminação do sistema.
Justifique sua resposta: Como a PCR é muito sensível, contaminação com pequenas quantidades de material exógeno pode resultar na sua amplificação. Diante disto o analista deve ter uma postura diante do uso de equipamentos, materiais e vestimentas, ou seja, local de trabalho deve ser separado para cada procedimento para evitar a contaminação, os reagentes e solução devem ser autoclavados (isso nãofaz perder suas propriedades), e os equipamentos e reagentes devem ser de uso exclusivo para esta técnica.
Exercício 19
Todo pessoal que, direta ou indiretamente, esteja ligado à produção de medicamentos e
cosméticos devem ser adequadamente treinados em conceitos de higiene e sanitização e em
boas práticas de manipulação e produção. Esses procedimentos têm como finalidade evitar
que os produtos sejam contaminados por agentes físicos, químicos ou biológicos provenientes
do pessoal que manipula diretamente as matérias-primas. Quando se praticam cuidados com a
higiene do corpo, do ambiente e dos alimentos, podemos afirmar que:
A) a quantidade de bactérias presentes no ambiente diminui, porém o risco de contaminação
aumenta.
B) a quantidade de bactérias presentes no ambiente aumenta, e o risco de contaminação
também.
C) lavar as mãos não influencia na quantidade de bactérias presentes no ambiente e nem na
contaminação dos alimentos.
D) a higiene pessoal é suficiente para evitar a contaminação dos alimentos, principalmente por
quem os prepara.
E) a quantidade de bactérias presentes no ambiente diminui, e o risco de contaminação
diminui.
Justifique sua resposta: O controle de qualidade microbiológico e as ferramentas de prevenção e controle são processos importantes para evitar riscos de contaminação. A higienização, treinamento, limpeza, validação de métodos, esterilização, sanitização e as boas práticas de fabricação são etapas fundamentais para a redução e eliminação da carga microbiana e qualidade do produto.
Exercício 20
O teste do indol determina a capacidade de certas bactérias que possuem a enzima
triptofanase de degradar o triptofano, produzindo indol, ácido pirúvico e amônia. A presença de
indol pode ser detectada pela adição do Reativo de Kovac, ocorrendo a formação de um anel
de coloração vermelho na superfície do meio, indicando uma reação positiva. A ausência de
mudança de cor indica que o triptofano não foi hidrolisado e, portanto, a reação é negativa
conforme observado na figura abaixo. A razão desta cor se deve a reação que ocorre entre o
Indol e a seguinte substância:
A) o triptofano presente no reagente;
B) o p-dimetilaminobenzaldeído do reagente;
C) o triptofano junto com o vermelho de fenol do reagente;
D) o ácido pirúvico;
E) o piruvato.
Justifique sua resposta: As bactérias que possuem enzima triptofanase são capazes de degradar triptofano, produzindo indol, ácido pirúvico e amônia. O indol se acumula no meio e pode ser detectado pela adição do composto de um aldeído p-dimetilaminobenzaldeído, que reage desenvolvendo uma cor vermelha, indicando uma reação positiva. A ausência de mudança de cor indica que o triptofano não foi hidrolisado e, portanto, a reação é negativa.
8° SEMESTRE – FARMÁCIA (UNIP)