ED Controle de Qualidade Microbiológico

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Exercício 1: 
As cabines de segurança biológica são usadas para contenção de aerossóis que podem ser 
espalhados durante o trabalho, contaminando a superfície e também o filtro HEPA. Apresentamos 
a seguir uma tabela com a classificação das cabines de segurança biológica. 
 
A superfície de trabalho e as paredes interiores devem ser descontaminadas, diariamente, com 
desinfetantes, preconizados pelo Ministério da Saúde. Para descontaminação profunda e antes 
das trocas dos filtros, preconiza-se utilizar ​EXCETO 
A) álcool etílico 70%. 
B) álcool isopropílico 70%. 
C) formaldeído. 
D) ácido peracético 0,5%. 
E) hipoclorito de sódio 0,02% a 1%. 
Comentários: 
O formaldeído é utilizado para esterilização de artigos críticos como: cateteres, drenos e tubos de 
borracha, entre outros. O formaldeído tem ação lenta e deixa resíduos tóxicos em equipamentos, 
além de possuir alta toxicidade. 
 
Exercício 2: 
Observe e analise com atenção a tabela abaixo referente aos conceitos importantes no controle 
de qualidade microbiológico de produtos farmacêuticos e cosméticos. 
 
 
De acordo com os dados da tabela acima e dadas as afirmativas abaixo quanto aos métodos de 
controle de microrganismos: 
I. A autoclave utiliza vapor sobre pressão e pode alcançar a temperatura de 121 ºC, em nível do 
mar, que é capaz de eliminar vírus, microrganismos vegetativos e esporos bacterianos, após 10 
minutos. 
II. O álcool etílico a 98% é um agente bactericida mais eficaz que o álcool etílico (etanol) a 70%. 
III. A pasteurização do leite promove a destruição dos microrganismos patógenos, mas pode ser 
ineficiente na eliminação de esporos bacterianos. 
IV. A filtração com membranas de nitrocelulose com 0,22 μm de diâmetro é eficaz para 
eliminação de bactérias e esporos bacterianos. 
V. A luz ultravioleta inibe a duplicação do DNA dos microrganismos e pode ser utilizada para 
desinfecção de superfícies de instrumentais. 
Verifica-se que estão ​CORRETAS ​apenas 
A) I e II. 
B) II e IV. 
C) III, IV e V. 
D) I, III e V. 
E) I, III e IV. 
Comentários: 
I – Na autoclave o ciclo é de 30 min, e não 10 min. 
II – O álcool 98% é utilizado para desinfecção, sua atuação bactericida é ineficaz, devido à rápida 
volatilização do etanol nessa concentração. O álcool 70% possui concentração ótima para o efeito 
bactericida, nesta concentração, destrói bactérias vegetativas, porém esporos bacterianos podem 
ser resistentes. 
III, IV e V – de acordo com os dados da tabela estão corretos. 
 
Exercício 3: 
Os medicamentos estéreis são produzidos em processos mais controlados a fim de garantir a 
esterilidade dos produtos até o momento da sua utilização. Esterilização é o processo pelo qual 
os microorganismos vivos são removidos ou mortos a tal ponto que não seja mais possível 
detectá-los no meio de cultura padrão no qual previamente haviam se proliferado. 
De acordo com as orientações da ANVISA e da Farmacopéia Brasileira, a esterilidade de um 
produto só pode ser comprovada analiticamente através do teste de esterilidade. Apesar desta 
exigência, o teste de esterilidade não é obrigatório para o FDA, USP e Farmacopéia Européia. 
Para garantir a esterilidade de um produto é importante estudar o método a ser usado na 
esterilização, incluindo as influências da embalagem e recipiente na qualidade microbiológica do 
produto, uma vez que existem diversos métodos de esterilização que podem ser mais aplicáveis 
em determinadas situações e menos em outras. 
Para se obter uma esterilização mais eficaz, menos tóxica e de baixo custo, qual das alternativas 
a seguir apresenta a resposta correta? 
 
A) Formaldeído. 
B) Glutaraldeído a 2%. 
C) Ácido peracético. 
D) O calor úmido na forma de vapor saturado sob pressão. 
E) Óxido de etileno e glutaraldeído. 
Comentários: 
O calor úmido na forma de vapor saturado sob pressão é a autoclave, facilita a eliminação de 
todos os microrganismos, aquecendo os materiais dentro do dispositivo a temperaturas acima do 
ponto de ebulição da água. 
 
Exercício 4: 
A produção de medicamentos está sujeita a um rigoroso controle por parte da própria empresa e 
por parte de agências reguladoras como a Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA). O 
controle total e seguro da produção de medicamentos estéreis são dependentes da qualidade dos 
processos em todos os setores produtivos, mas os setores da Garantia e Controle de Qualidade 
assumem papel importante na questão dos registros das informações e na validação do 
processo. Os medicamentos estéreis são produzidos em processos mais controlados a fim de 
garantir a esterilidade dos produtos até o momento da sua utilização. O teste de esterilidade é a 
demonstração de que um produto é estéril por meio da realização de um ensaio microbiológico 
em uma quantidade pré - estabelecida de amostras conforme a apresentação e tamanho do lote, 
mas apresenta desvantagens como a incapacidade de detectar amostras contaminadas em lotes 
com baixa porcentagem de contaminação (2% de contaminação, por exemplo) e o tempo 
necessário para a realização do ensaio que impede a liberação do medicamento para a venda. 
O teste de esterilidade é um ensaio aplicado em insumos farmacêuticos, medicamentos e 
produtos para a saúde que, de acordo com a Farmacopéia Brasileira, 5ª ed. (2010), devem ser 
estéreis. 
A interpretação do ensaio se dá pela avaliação dos meios de cultura empregados, quanto à 
presença ou ausência de microrganismos durante o tempo de incubação. Esse tempo deve ser 
de: 
A) 14 dias. 
B) 21 dias. 
C) 07 dias. 
D) 05 a 07 dias. 
E) 10 dias. 
Comentários: 
De acordo com a Farmacopéia Brasileira, 5ª ed. (2010), TESTES DE ADEQUAÇÃO DOS MEIOS 
DE CULTURA Os meios de cultura utilizados devem cumprir o ​Teste de esterilidade da amostra​. 
Confirmando a esterilidade de cada lote de meio esterilizado incubando todos os frascos dos 
meios nas condições especificadas por 14 dias. Não deve ocorrer crescimento microbiano. 
A ocorrência de crescimento microbiano inutiliza o lote de meio para o teste de esterilidade. 
 
Exercício 5: 
Um medicamento na forma líquida foi submetido ao ensaio de contagem microbiana por meio de 
diluição em placas contendo ágar, para verificação do número de microrganismos totais no 
produto. As leituras das placas com as diluições são apresentadas na tabela abaixo. 
 
É correto afirmar que o número de unidades formadoras de colônia, por mL, no produto (UFC/mL) 
é: 
A)1,06 x 10​5​ UFC/mL. 
B) 2,66 x 10​5​ UFC/mL. 
C) 2,66 x 10​6 ​UFC/mL. 
D) 1,06 x 10​6​ UFC/mL. 
E) 2.06 x 10​5​ UFC/mL. 
Comentários: 
Multiplica-se o valor da diluição, pelo numero de colônias por placa: 1000x228=228000; 
1000x245=245000; 10000x37=370000; 10000x22=220000. Em seguida soma todos os valores 
obtidos da multiplicação: 228000+245000+370000+220000=1063000. O resultado divide-se pelo 
numero de diluições total (4), obtendo 1063000/4=265750=2,66x10^5 UFC/mL. 
 
Exercício 6: 
Entre os equipamentos de laboratório apresentados nas figuras abaixo, o equipamento adequado 
para a esterilização de soluções empregando-se calor úmido é o: 
 
A) 1 
B) 2 
C) 3 
D) 4 
E) 5 
Comentários: 
Autoclave sua esterilização é através de calor úmido facilitando a eliminação de todos os 
microrganismos aquecendo os materiais dentro do dispositivo a temperaturas acima do ponto de 
ebulição da água. 
Os outros não são aparelhos para esterilização são: 2 Destilador de água, 3 Estufa, 4 Centrifuga 
para laboratório, 5 Fluxo Laminar. 
 
Exercício 7: 
A avaliação da qualidade microbiológica de medicamentos e cosméticos consistem na 
determinação da carga microbiana viável e na comprovação da ausência de microrganismos 
específicos considerados de risco para o usuário. A seguir analise a tabela abaixo com atenção e 
responda a questão. 
 
São métodos para quantificar o crescimento microbiano: 
A) contagem em placas, tubos multiplos, filtração em membrana, turbidimetria e contagem direta 
no microscópio. 
B) somente a contagem em placas. 
C) somente a turbidimetria. 
D) somente os tubos múltiplos.E) somente filtração em membrana. 
Comentários: 
Pois em todos os métodos descritos conseguimos quantificar microrganismos. 
 
Exercício 8: 
Apresentamos abaixo a tabela estatística utilizada para os testes do NMP. Observe atentamente 
a tabela e depois responda a questão. 
 
Sobre a estimativa do quantitativo de agentes microbianos na análise de controle de qualidade 
microbiológico, todas as afirmativas estão corretas, ​EXCETO: 
A) As técnicas de contagem em placas permitem a visualização de formação de colônias, a partir 
de um número "fixo" de células viáveis. São utilizadas, portanto, para obter a contagem de 
unidades formadoras de colônias (UFC) presentes na amostra sob análise. 
B) Como os meios de cultura utilizados na técnica de NMP têm por objetivo recuperar células sob 
"stress", esta técnica permite maior confiabilidade no resultado e a confirmação do microrganismo 
pesquisado no mesmo período de tempo do que a contagem em placas. 
C) A técnica do Número Mais Provável (NMP) é um método que permite estimar a densidade de 
organismos viáveis presentes em uma amostra sob análise. Esta técnica tem por base a 
probabilidade estatística relacionada com a freqüência e a ocorrência de resultados positivos 
mais prováveis, em função do número real dos microrganismos presentes. 
D) A técnica do NMP não permite contagem "fixa" de células viáveis ou de UFC, como acontece 
com a técnica de contagem em placas. O uso da técnica do NMP se justifica principalmente 
quando é necessário estimar o número de células viáveis não detectadas (visualizadas) pela 
contagem em placas. 
E) Como os meios de cultura utilizados na técnica de NMP não têm por objetivo recuperar células 
sob "stress", esta técnica permite menor confiabilidade no resultado e a confirmação do 
microrganismo pesquisado no mesmo período de tempo do que a contagem em placas. 
Comentários: 
De acordo com a PORTARIA Nº 101, DE 11 DE AGOSTO DE 1993, MAPA, o uso da técnica 
NMP, se justifica quando é necessário estimar o número de células viáveis não detectadas 
(visualizadas) pela contagem em placas em razão do volume possível do inóculo por esta técnica 
e na recuperação de células em "stress" fisiológico, uma vez que são usados meios líquidos na 
técnica do NMP. 
Esta técnica não permite confiabilidade ou confirmação do microrganismo pesquisado no mesmo 
período de tempo do que a contagem em placas. A técnica do NMP não permite contagem "fixa" 
de células viáveis ou de UFC, como acontece com a técnica de contagem em placas. 
 
Exercício 9: 
(ENADE–2007) Pela RDC 67, de 08/10/2007, todas as farmácias com manipulação devem 
garantir a qualidade físico-química e microbiológica da sua água potável. Esta será o ponto de 
partida para a obtenção da água purificada, a ser utilizada em todas as preparações 
farmacêuticas. Para melhorar a qualidade da água potável podem ser realizados alguns 
pré-tratamentos, além de um tratamento posterior de purificação, de forma a se obter a água 
purificada. Este método será escolhido pelo Farmacêutico responsável, de acordo com suas 
necessidades. Uma combinação possível das etapas de pré-tratamento e tratamento, 
respectivamente, é: 
A) filtração e abrandamento. 
B) filtração e osmose reversa. 
C) troca iônica e destilação. 
D) destilação e troca iônica. 
E) destilação e osmose reversa. 
Comentários: 
Segundo a FARMACOPEIA BRASILEIRA - Anvisa 6ª EDIÇÃO Volume II, Água purificada é a 
água potável que passou por algum tipo de tratamento para retirar os possíveis contaminantes e 
atende aos requisitos de pureza estabelecidos. É preparada por destilação, troca iônica, osmose 
reversa ou por outro processo adequado. 
A água potável passa pelos processos de tratamento: captação, coagulação, floculação, filtração, 
desinfecção, fluoretação após esses processos é distribuída por uma rede de distribuição e chega 
à farmácia. 
Por tanto a água potável passa pela filtração que é um processo de pré-tratamento da água 
purificada, que passa pelo tratamento da osmose reversa. 
 
Exercício 10: 
Analise as afirmativas a seguir e julgue-as em verdadeira (V) ou falsa (F) com base na Resolução 
RDC Nº 275, de 21/10/2002, da ANVISA sobre requisitos específicos para elaboração dos 
procedimentos operacionais padronizados. 
 
 
Assinale a opção que apresenta a seqüência correta. 
A) V, V, V, V e V. 
B) F, F, V, V e V. 
C) V, F, F, V e V. 
D) F, V, V, F e V 
E) F, F, F, F e F. 
Comentários: 
Segundo a RDC nº 275, de 21 de outubro de 2002, que dispõe sobre o Regulamento Técnico de 
Procedimentos Operacionais Padronizados aplicados aos Estabelecimentos 
Produtores/Industrializadores de Alimentos e a Lista de Verificação das Boas Práticas de 
Fabricação em Estabelecimentos Produtores/Industrializadores de Alimentos todas as alternativas 
estão corretas. 
 
Exercício 11: 
Abaixo representamos esquematicamente uma série de diluições seriadas de amostras para 
análises microbiológicas através de contagem microbiana. 
 
Na preparação de uma amostra para análise microbiológica, foram preparadas tres (3) diluições 
sequenciais. 1:10, 1:100 e 1:1000. De cada uma dessas três diluições, foi retirada uma alíquota 
de 0,1 mL e semeada em três (3) placas de Petri, contendo meio de cultura adequado para a 
análise. O resultado de crescimento de colônias, após 48 horas de incubação a 35ºC e observado 
através do contador de colônias, foi de: 
- 25 colônias na placa nº 01 (diluição 1:10) 
- 13 colônias na placa nº 02 (diluição 1:100) 
- 4 colônias na placa de nº3 (diluição 1:1000) 
A quantidade de bactérias por UFC/mL presentes na amostra é de 
A) 1,85 x 10​3 ​UFC/mL 
B) 5,55 x 10​3​ UFC/mL 
C) 2,75 x 10​3​ UFC/mL 
D) 1,55 x 10​3​ UFC/mL 
E) 1,76 x 10​3​ UFC/mL 
Comentários: 
Multiplica-se o valor da diluição, pelo numero de colônias por placa: 25x10=250; 13x100=1300; 
4x1000=4000. Em seguida soma todos os valores obtidos da multiplicação: 
250+1300+4000=5550. O resultado divide-se pelo numero de diluições total (3), obtendo 
5550/3=1850ou 1,85x10^3 UFC/mL. 
**************************************************************************************************************** 
Exercício 12: 
Considerando a tabela abaixo, que apresenta a classificação dos microrganismos segundo suas 
faixas ótimas de temperaturas para multiplicação, assinale a opção correta. 
 
A) No grupo IV, estão representados os microrganismos termófilos. 
B) No grupo III estão os microrganismos que crescem melhor em temperaturas altas, acima de 55 
°C. 
C) No grupo II estão incluídos os microrganismos psicrófilos. 
D) No grupo III estão os microrganismos que crescem em uma ampla faixa de temperaturas. 
E) No grupo I, estão incluídos os microrganismos mesófilos. 
Comentários: 
Um organismo mesófilo desenvolve-se melhor em condições de temperatura moderada, entre 20 
e 45 °C. Faz parte deste grupo a maioria dos microrganismos patogênicos, pois esta faixa de 
temperatura está mais próxima da temperatura corpórea humana de 37ºC. 
 
Exercício 13: 
Abaixo apresentamos uma tabela com os métodos mais utilizados de contagem de 
microrganismos, no controle de qualidade microbiológico de produtos farmacêuticos e 
cosméticos. Após análise criteriosa desta tabela, responda a questão. 
 
Assinale a opção correta sobre os métodos utilizados para contagem de microrganismos. 
A) A técnica de determinação do número mais provável é feita colocando-se uma amostra em 
uma lâmina especial, com um poço com dimensão conhecida, a qual é levada ao microscópio 
para contagem das células. 
B) A contagem em placas é um método utilizado para determinar a quantidade de células vivas e 
mortas. 
C) A contagem por plaqueamento só pode ser usada para materiais com alta concentração 
microbiana. 
D) A contagem por plaqueamento é o principal método de contagem de células por ser um 
método rápido. 
E) A técnica de determinação do número mais provável é uma técnica estatística e bastante útil 
para contagem de microrganismos que apresentam uma determinada característica metabólica. 
Comentários: 
Atécnica do NMP é bastante versátil, permitindo a enumeração de diferentes grupos ou 
espécies de microrganismos, variando-se o meio de cultura e as condições de incubação. Suas 
principais aplicações são a contagem de coliformes totais, coliformes fecais e E. coli em água e 
alimentos. Pode também ser utilizada em outros ensaios quantitativos, quando a contaminação 
esperada na amostra está abaixo do limite de detecção do plaqueamento ou quando partículas 
do alimento interferem na contagem em placas. Uma outra aplicação é a adaptação de métodos 
qualitativos para quantitativos, como a contagem de Salmonella, Listeria monocytogenes e outros 
microrganismos tradicionalmente analisados por métodos de presença/ ausência. 
 
Exercício 14: 
Em relação à técnica do Número Mais Provável (NMP) é correto afirmar que essa técnica 
apresenta resultados, lidos em uma tabela, 
A) menos exatos que a contagem em placas e está baseada na chance estatística de uma 
determinada combinação de tubos serem positiva, sendo normalmente usada quando se espera 
um baixo número de microrganismos. 
B) mais exatos que a contagem em placas e está baseada na chance estatística de uma 
determinada combinação de tubos serem positiva, sendo normalmente usada quando se espera 
um alto número de microrganismos. 
C) menos exatos que a contagem em placas e está baseada na chance estatística de uma 
determinada combinação de tubos serem positiva, sendo usada apenas da determinação de 
coliformes totais e termotolerantes. 
D) baseados na chance estatística de uma determinada combinação de tubos serem positiva, 
sendo usada apenas quando se espera um alto número de microrganismos. 
E) baseados na chance estatística de uma determinada combinação de tubos serem positiva, 
sendo usada apenas para recuperar microrganismos que foram submetidos a stress. 
Comentários: 
A contagem de microrganismos em placas de petri com meios de cultura é um dos métodos mais 
utilizados em laboratórios, e ajuda a determinar o verdadeiro tamanho de uma população de 
bactérias. A principal vantagem de utilizar essa técnica está na possibilidade de quantificar a 
exata quantidade de células vivas presentes. 
A técnica do Número Mais Provável (NMP) é um método probabilístico, é possível determinar o 
Número Mais Provável de bactérias do grupo. O NMP visa estimar a densidade de 
microrganismos presente na amostra baseado na frequência de resultados positivos. 
 
Exercício 15: 
A atividade da coagulase é utilizada para distinguir espécies patogênicas de Staphylococcus de 
espécies não patogênicas, sendo um bom indicador da patogenicidade do S.aureus. A prova da 
coagulase em tubo consiste em colocar 0,5 mL de plasma em tubo de ensaio; Adicionar uma 
alçada de colônia diretamente no plasma de coelho com EDTA; Incubar por 4 h a 35±2ºC em 
estufa ou banho-maria; caso não haja formação de coágulo, incubar por 24 h. 
Formação de coágulo inteira ou parcial, identifica ​Staphylococcus aureus; ​Não há formação de 
coágulo, identifica ​Staphylococcus ​coagulase negativa, conforme figura abaixo: 
 
A) que determina a capacidade do microrganismo de produzir coagulase uma enterotoxina capaz 
de coagular o plasma. 
B) que verifica a capacidade dos estafilococos (produtores de coagulase) de coagularem o 
protoplasma de coelhos. 
C) de identificação de Staphylococcus aureus com base na reação antigênica da coagulação. 
D) que determina a capacidade do microrganismo de produzir coagulase, uma enzima produzida 
por espécies de S. aureus e S. epidermidis. 
E) que determina a capacidade do microrganismo de produzir coagulase e está diretamente 
relacionada a capacidade de produzir catalase. 
Comentários: 
O teste da coagulase verifica se o microrganismo possui a coagulase (ou fator aglutinante) livre e 
ligada, que, reagindo com um fator plasmático, forma um complexo que atua no fibrinogênio do 
plasma formando a fibrina. 
Staphylococcus aureus produz enzima coagulase, responsável pela coagulação do plasma. 
 
Exercício 16: 
Os meios de cultura são ferramentas importantes nos mais diversos estudos microbiológicos, 
permitindo a obtenção de informações sobre a biologia destes. Apresentamos a seguir uma figura 
que representa de forma geral o preparo de um meio de cultura: 
 
Nesses meios, os microrganismos podem ser mantidos por longos períodos, uma vez que vários 
nutrientes são adicionados em sua formulação. No meio de cultura, a adição de ágar 1-2% tem a 
finalidade de atuar como 
A) fonte de carboidrato. 
B) doador de nitrogênio. 
C) fornecedor de energia. 
D) substrato para a reprodução. 
E) agente solidificante. 
Comentários: 
Agar tem como característica a capacidade de continuar maleável mesmo quando exposto a 
temperaturas altas. Sua consistência gelatinosa permite uma manipulação fácil e segura dentro 
do ambiente laboratorial. Nesta concentração de 1-2% não tem atuação nutritiva. 
 
Exercício 17: 
Assinale a alternativa que descreve o procedimento correto referente à operação da autoclave 
para esterilização de meios e vidrarias em condições normais: 
A) verificar o nível da água; carregar a autoclave; ligar a resistência; fechar hermeticamente a 
tampa inclusive a válvula de saída de vapor; quando a temperatura de 121°C for atingida, marcar 
o tempo; desligar; esperar a pressão baixar para abrir e retirar o material. 
B) verificar o nível da água; carregar a autoclave; ligar a resistência; fechar hermeticamente a 
tampa deixando a válvula de saída de vapor aberta; esperar o início da saída de vapor para 
fechar a válvula de descarga de vapor; quando a temperatura de 121°C for atingida, marcar o 
tempo; desligar; esperar a pressão baixar para abrir e retirar o material. 
C) verificar o nível da água; carregar a autoclave; ligar a resistência; fechar hermeticamente a 
tampa deixando a válvula de saída de vapor aberta; quando a temperatura de 115°C for atingida, 
marcar o tempo; desligar; esperar a pressão baixar para abrir e retirar o material. 
D) verificar o nível da água; carregar a autoclave; ligar a resistência; fechar hermeticamente a 
tampa deixando a válvula de saída de vapor aberta; esperar o início da saída de vapor para 
fechar a válvula de descarga de vapor; quando a temperatura de 121°C for atingida, marcar o 
tempo; desligar; abrir completamente a válvula de descarga de pressão e, por último, abrir a 
autoclave e retirar o material. 
E) verificar o nível da água; carregar a autoclave; ligar a resistência; fechar hermeticamente a 
tampa deixando a válvula de saída de vapor fechada; abrir a válvula de descarga de vapor; 
quando a temperatura de 121°C for atingida, marcar o tempo; desligar; esperar a pressão baixar e 
abrir a tampa para retirar o material. 
Comentários: 
Operação: 1.Abrir a tampa e colocar água na caldeira, até cobrir o descanso do cesto, introduzir o 
material a ser esterilizado, fechar a tampa, apertando por igual os manípulos; 2.Abrir o registro de 
vapor e ligar a chave no calor máximo (MÁX); 3.Saindo vapor pela válvula, esperar 10 min. para 
que todo o ar seja expulso do interior da autoclave e, só então, fechar a válvula; 4.Quando a 
pressão (1,1 Kgf) e temperatura (121° C) de trabalho forem atingidas, mudar a chave para a 
posição MÉDIO, a fim de manter a pressão; 5.Terminado o tempo de esterilização, desligar a 
autoclave; 6.Esperar que o ponteiro do manômetro desça até o zero e, então, abrir a válvula de 
vapor; 7.Aguardar 5 minutos e abrir a tampa. 
 
Exercício 18: 
A Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) é uma técnica de Biologia Molecular que permite 
replicação ​in vitro ​do DNA de forma extremamente rápida. Com a PCR, quantidades mínimas de 
material genético podem ser amplificadas milhões de vezes em poucas horas, permitindo a 
detecção rápida e fiável dos marcadores genéticos de doenças infecciosas, cancro ou doenças 
genéticas. A PCR está desenhada de acordo com o princípio natural de replicação de DNA. Este 
é um processo que decorre em três passos, que em conjunto se designam como um ciclo e que 
se repeteum número específico de vezes. Assim, um ciclo de PCR consiste nos seguintes 
passos: Desnaturação térmica, Hibridização ou Annealing e Extensão (Figura abaixo). Este 
processo tem lugar num termociclador, um equipamento que automaticamente controla e alterna 
as temperaturas durante períodos programados de tempo para o número apropriado de ciclos de 
PCR (geralmente entre 30 e 40 ciclos). 
Portanto a reação em cadeia da polimerase (do inglês, Polymerase Chain Reaction, PCR) é uma 
metodologia que permite, entre outras, a identificação de microrganismos patogênicos a um custo 
menor que o de uma reação. 
Com relação aos cuidados na execução da técnica do PCR para pesquisa de microrganismos, é 
correto afirmar que 
 
A) pode ser realizada sem cuidados com contaminação ambiente, pois não se trata de método de 
cultivo. 
B) deve-se ter o cuidado com contaminações por produtos que foram anteriormente amplificados, 
pois podem resultar em falsos positivos. 
C) as bancadas devem ser descontaminadas, mas não há necessidade de cuidados com 
formação de aerossóis durante a técnica de pipetagem. 
D) as bancadas não precisam ser descontaminadas, mas há necessidade de cuidados com 
formação de aerossóis durante a técnica de pipetagem. 
E) as ponteiras com filtro não são usadas para evitar a contaminação do operador e não a 
contaminação do sistema. 
Comentários: 
Certos problemas técnicos podem interferir no resultado do PCR, como a contaminação do 
material por substâncias que conhecidamente inibem a reação, como é o caso da hemoglobina, 
bem como a contaminação por um material genético que não está sendo estudado. Deste modo, 
para reduzir as chances de erro, os profissionais que manuseiam as amostras devem adotar 
certas medidas, como o uso de luvas, tubos descartáveis, dentre outras. 
 
Exercício 19: 
Todo pessoal que, direta ou indiretamente, esteja ligado à produção de medicamentos e 
cosméticos deve ser adequadamente treinado em conceitos de higiene e sanitização e em boas 
práticas de manipulação e produção. Esses procedimentos têm como finalidade evitar que os 
produtos sejam contaminados por agentes físicos, químicos ou biológicos provenientes do 
pessoal que manipula diretamente as matérias-primas. Quando se praticam cuidados com a 
higiene do corpo, do ambiente e dos alimentos, podemos afirmar que: 
A) a quantidade de bactérias presentes no ambiente diminui, porém o risco de contaminação 
aumenta. 
B) a quantidade de bactérias presentes no ambiente aumenta, e o risco de contaminação 
também. 
C) lavar as mãos não influencia na quantidade de bactérias presentes no ambiente e nem na 
contaminação dos alimentos. 
D) a higiene pessoal é suficiente para evitar a contaminação dos alimentos, principalmente por 
quem os prepara. 
E) a quantidade de bactérias presentes no ambiente diminui, e o risco de contaminação diminui. 
Comentários: 
Segundo a RDC Nº 67, DE 8 DE OUTUBRO DE 2007, ANEXO I, BOAS PRÁTICAS DE MANIPULAÇÃO 
EM FARMÁCIAS, 3.2. Capacitação dos Recursos Humanos.​ 3.2.1. Todo o pessoal, inclusive de 
limpeza e manutenção, deve ser motivado e receber treinamento inicial e continuado, incluindo 
instruções de higiene, saúde, conduta e elementos básicos em microbiologia, relevantes para a 
manutenção dos padrões de limpeza ambiental e qualidade dos produtos. 
A falta de esclarecimentos entre as pessoas que lidam com a higiene e manipulação de 
medicamentos, cosméticos, ambientes e alimentos, contribui de forma significativa para a 
contaminação. Sendo necessário adotar, através de capacitações com Procedimentos 
Operacionais Padrão (POP), medidas sanitárias rigorosas na manutenção de um padrão 
adequado de higiene dos indivíduos que trabalham em serviços de medicamentos, cosméticos, 
ambientes e alimentação. E para isso todos os profissionais devem seguir rigorosamente o POP 
estabelecido para o local. 
 
 
Exercício 20: 
O teste do indol determina a capacidade de certas bactérias que possuem a enzima triptofanase 
de degradar o triptofano, produzindo indol, ácido pirúvico e amônia. A presença de indol pode ser 
detectada pela adição do Reativo de Kovac, ocorrendo a formação de um anel de coloração 
vermelho na superfície do meio, indicando uma reação positiva. A ausência de mudança de cor 
indica que o triptofano não foi hidrolisado e, portanto, a reação é negativa conforme observado na 
figura abaixo. A razão desta cor se deve a reação que ocorre entre o Indol e a seguinte 
substância: 
 
A) o triptofano presente no reagente; 
B) o p-dimetilaminobenzaldeído do reagente; 
C) o triptofano junto com o vermelho de fenol do reagente; 
D) o ácido pirúvico; 
E) o 3-fosfoglicerato. 
Comentários: 
O reagente de Kovacs, composto por álcool amílico ou isoamílico, p-dimetilaminobenzaldeído, 
ácido clorídrico, e é utilizado para determinar a capacidade do organismo para dividir indol a partir 
do triptofano. O indol é um dos produtos de degradação imediata da desaminação do triptofano. 
Este pode ser detectado pela reação com o Reativo de Kovacs produzindo um complexo 
vermelho o p-dimetilaminobenzaldeído.