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UNIVERSIDADE ESTADUAL PAULISTA 
FACULDADE DE CIÊNCIAS AGRÁRIAS E VETERINÁRIAS DE JABOTICABAL 
MÉT. PURIF. ANÁL. PROTEÍNAS – CIÊNCIAS BIOLÓGICAS – 1
o
 SEMESTRE, 2017 
DESENVOLVIMENTO DE PROJETO 
 
SDS-PAGE 
Preparação das amostras 
1. Coloque os tubos contendo as amostras preparadas na semana anterior (guardadas no freezer) no banho 
seco (95°C) por 3 minutos. 
2. Centrifugue rapidamente as amostras para trazer todo o volume das amostras para o fundo dos tubos. 
 
Preparação da cuba de eletroforese e Aplicação das amostras 
1. Coloque o gel (feito previamente) encontra-se dentro da cuba eletroforética, com tampão de corrida. 
2. O gel possui 12 canaletas, mas cada grupo só tem 9 amostras para serem analisadas. As amostras serão 
aplicadas na seguinte ordem: 
 
Canaleta 1 - Tubo 1 (Marcador Peso Mol.) - 10 μl 
Canaleta 2 - Tubo 2 (Não Induzida) - 20 μl 
Canaleta 3 - Tubo 3 (Induzida) - 20 μl 
Canaleta 4 - Tubo 4 (Solúvel) - 20 μl 
Canaleta 5 - Tubo 5 (Flow Through) - 20 μl 
Canaleta 6 - Tubo 6 (Wash) - 20 μl 
Canaleta 7 - Tubo 7 (Eluato 1) - 20 μl 
Canaleta 8 - Tubo 8 (Eluato 2) - 20 μl 
Canaleta 9 - Tubo 9 (Eluato 3) - 20 μl 
 
OBS.: Cuidado para não formar bolhas antes ou durante a aplicação das amostras! Estas vão atrapalhá-lo e 
poderão fazer com que as amostras se misturem no gel. 
 
Regulagem do sistema de eletroforese 
1. Coloque a tampa da cuba com os pólos ligados corretamente (vermelho no positivo e preto no negativo). 
2. Ligue a fonte e regule a voltagem constante para 200 Volts. 
3. Para verificar se a corrida está acontecendo, certifique-se de que há bolhas sendo formadas no tampão de 
corrida, dentro da cuba. Além disso, confira se a amperagem não encontra-se em zero. 
4. A corrida dura em torno de 1 hora. Neste período, acompanhe a marca do corante das amostras, até a 
mesma chegar próxima ao final da placa. 
 
Visualização do gel de poliacrilamida 
1. Terminada a corrida, desligue a fonte e retire o suporte de placas de dentro da cuba. 
2. Retire as placas do suporte e abra, com muito cuidado, as placas, com o auxílio de uma espátula (essa 
etapa deve ser feita com muita calma para o gel não rasgar!). 
3. Coloque o gel em um recipiente com a solução corante Azul de Coomassie (40% metanol, 20% de ácido 
acético, 0,5% Coomassie Brilliant Blue R-250) até cobrir o gel. 
4. Leve ao micro-ondas com a tampa do recipiente semi aberta por apenas 15 segundos. Cuidado, pois o 
metanol é muito volátil e tóxico! 
5. Retire do micro-ondas e retorne o corante para o frasco de origem. 
6. Enxague o gel, cuidadosamente, em água de torneira, e adicione a solução descorante (40% metanol, 20% 
de ácido acético) até cobrir o gel. 
7. Leve ao micro-ondas novamente com a tampa do recipiente semi aberta por apenas 30 segundos. Repita 
este passo se necessário. 
8. Coloque no shaker por 15-30 minutos, até conseguir visualizar as bandas. Fotografe o gel.