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Humanas / Sociais

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01/03/2023

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UNIVERSIDADE ESTADUAL PAULISTA
“JÚLIO DE MESQUITA FILHO”
INSTITUTO DE BIOCIÊNCIAS – RIO CLARO unesp

CURSO DE ESPECIALIZAÇÃO EM ENTOMOLOGIA URBANA: TEOR IA E PRÁTICA

INIBIDORES DA RESPIRAÇÃO CELULAR NO CONTROLE DE FOR MIGAS
CORTADEIRAS (HYMENOPTERA: FORMICIDAE)

MARCELA CECCATO

Monografia apresentada ao Instituto
de Biociências do Campus de Rio
Claro, Universidade Estadual
Paulista, como parte dos requisitos
para obtenção do título de
Especialista em Entomologia
Urbana .
12/2010

CURSO DE ESPECIALIZAÇÃO EM ENTOMOLOGIA URBANA:
TEORIA E PRÁTICA

INIBIDORES DA RESPIRAÇÃO CELULAR NO CONTROLE DE FOR MIGAS
CORTADEIRAS (HYMENOPTERA: FORMICIDAE)

MARCELA CECCATO

ORIENTADOR: ODAIR CORREA BUENO
CO-ORIENTADOR: FABIANA CORREA BUENO

Dedico aos meus pais, Edna Masson Ceccato e José
Nivaldo Ceccato, pois não sei precisar as noites que
a luz do meu quarto não os deixou dormir ou a
preocupação que a minha ausência lhes causou. Não
sei quantas vezes minhas provas foram suas provas
de amor. Não sei quantos sonhos renunciaram para
que os meus fossem realizados. Mas sei que só
vocês representam os verdadeiros heróis dessa
história! Obrigado por tudo!

Ofereço as minhas irmãs, pois sem
elas nada disso seria possível! Muito
obrigado por acreditarem e por me
apoiarem! Amo vocês!
AGRADECIMENTOS

Primeiramente agradeço a Deus e aos meus pais José Nivaldo e Edna ,
almas iluminadas por Ele, que me fizeram trilhar por caminhos seguros. Sem vocês
a minha vida não teria sentido e nem existência.
Ao Profº Dr. Odair Correa Bueno pela orientação, pelos conhecimentos e
experiências passadas, pela paciência, preocupação, pela amizade, risadas,
conversas e caronas nas idas e vindas de São Paulo. Muito obrigado pelas
oportunidades e por tudo, você é um exemplo a seguir!
À Fabiana Correa Bueno , pela co-orientação, pelas dicas, paciência,
preocupação, conversas e por se desdobrar para me ajudar a escrever com
qualidade esta monografia. Agradeço imensamente!
Ao Profº Dr. Osmar Malaspina , pela confiança, amizade e compreensão.
Ao CNPq, pela concessão da bolsa de estudo que permitiu a realização deste
trabalho.
Ao Centro de Estudos de Insetos Sociais (CEIS) – UNESP, Campus de Rio
Claro, pelo acesso aos laboratórios, às nossas queridas saúvas e equipamentos de
informática.
À querida Ita, pelos conselhos, companheirismo, dedicação e auxílio nas
diluições e montagem dos experimentos. Sem a sua alegria, o CEIS não seria o
mesmo!
À Nathália e a Natieli , dedicadas a cuidar dos bioensaios nos períodos de
aula em São Paulo.
À Necis Miranda de Lima e a Lucilene Amaro da Silva , pelo
companheirismo, auxílio com as declarações e compreensão nos momentos mais
urgentes.
A todos os meus queridos amigos do CEIS, que fazem e fizeram parte de
mim, pelo apoio, incentivo e carinho. Em especial a Eliane, Amanda Barbosa,
Amanda Picelli, Pâmela, Kauana, Keyla, Taís, Manuel a, Juliana, Cíntia, Maria
Fernanda, Daniel, Carlos, João, Fox, Rodrigo e Andr igo pelas muitas risadas,
conversas, experiências trocadas, festas e principalmente pela amizade! Cresci
muito no convívio de vocês! Sempre estarão guardados no meu coração!
Não posso deixar de agradecer a Ali , Nathália, Caroline , Deonise e
Catarina que são muito importantes na minha vida. Obrigado por todo apoio, por
acreditarem em mim e no meu potencial. Eu amo vocês infinitamente!
Aos meus amigos, Eduardo Diniz, Caroline, Sandra e Amanda Carlos (que
me auxiliaram na busca pelos artigos) e o Andrigo (nas informações sobre os
ingredientes ativos), me dando suporte e orientação e também pelos momentos de
risadas e companheirismo!
Aos amigos queridos Karla e Titi da UFSCar de São Carlos que tornaram o
Ciclo de Krebs mais simples em minha vida! Admiro toda dedicação e atenção que
tiveram comigo!
As minhas amadas irmãs, Luciana, Fernanda, Cristiane e também a Aline
Nondillo (a irmã de coração que mora longe), pela convivência, pelas infinitas
conversas, conselhos sobre a vida, sobre o futuro, pelas muitas risadas, muitas
lágrimas, festas, companheirismo, e principalmente pelo carinho e pelo amor que é
recíproco! Amo vocês de paixão! Vocês sempre serão muitos importantes na minha
vida! A presença de vocês durante essa fase foi essencial para eu me tornar uma
pessoa melhor e ser quem sou hoje! Muito obrigado por tudo!
Aos professores do curso de especialização em Entomolog ia Urbana:
Teoria e Prática , por todo carinho, atenção e dedicação nas agradáveis aulas e por
todo ensinamento e vivência passada.
Aos meus queridos amigos do curso de especialização pelos ensinamentos
e experiências trocadas, pela grande amizade que ilumina a mente, enriquece o
coração e dá brilho à vida. Em especial a Erika, Daniela, Valmerice, Julio, André
(companheiros de alojamento) e Daniel pelo laço especial que compartilhamos, pela
agradável companhia no café da manhã, nas divertidas jantas, passeios e noites no
alojamento, por toda troca de experiência, conselhos, piadas, conversas e carinho!
Amo vocês imensamente, pois trouxeram mais brilho à minha vida e a 5º turma do
curso de especialização não seria a mesma sem vocês!
Ao Instituto Biológico e a Cleonice pela disponibilidade do alojamento nos
períodos de aula.
Agradeço também a todos que me ajudaram a construir indiretamente toda
essa caminhada e mais uma fase cumprida. Obrigada!
SUMÁRIO

RESUMO .................................................................................................... 06
1. INTRODUÇÃO ...................................................................................... 08
2. REVISÃO BIBLIOGRÁFICA .................................................................. 10
2.1. As formigas cortadeiras ................................................................. 10
2.2. Importância econômica ........................................................................ 11
2.3. Métodos de controle ............................................................................ 12
2.3.1. Formicidas pós .............................................................................. 13
2.3.2. Formicidas líquidos ........................................................................ 13
2.3.3. Fumigantes .................................................................................... 14
2.3.4. Termonebulização ......................................................................... 14
2.3.5. Nebulização ................................................................................... 15
2.3.6. Iscas tóxicas .................................................................................. 15
2.4. Controle de formigas cortadeiras com iscas tóxicas ........................... 15
2.5. Controle de formigas cortadeiras em ambientes urbanos ................... 17
2.6. Ingredientes ativos ............................................................................... 18
3. MATERIAL E MÉTODOS ............................................................................... 21
3.1. Testes “in vitro” de toxicidade da rotenona e do diafentiurom em
operárias de Atta sexdens rubropilosa ...............................................
21
3.1.1. Coleta e manutenção das formigas utilizadas nos bioensaios....... 21
3.1.2. Bioensaios para determinação da toxicidade ................................ 23
3.1.3. Bioensaio I: incorporação em dieta artificial .................................. 24
3.1.4. Bioensaio II: incorporação em polpa cítrica ................................... 25
3.1.5.Análise dos dados de toxicidade ................................................... 26
4. RESULTADOS E DISCUSSÃO ..................................................................... 27
4.1. Rotenona ............................................................................................. 27
4.1.1. Toxicidade para operárias de Atta sexdens rubropilosa ................ 27
4.1.1.1. Incorporação em dieta artificial .......................................... 27
4.1.1.2. Incorporação em polpa cítrica ........................................... 32
4.2. Diafentiurom ........................................................................................ 34
4.2.1. Toxicidade para operárias de Atta sexdens rubropilosa ................ 34
4.2.1.1. Incorporação em dieta artificial .......................................... 34
4.2.1.2. Incorporação em polpa cítrica ............................................ 38
5. CONCLUSÕES ............................................................................................... 41
6. REFERÊNCIAS ............................................................................................... 42

1. RESUMO

As formigas cortadeiras são consideradas pragas por causarem muitos
prejuízos em áreas agrícolas e em monoculturas. Em consequência às alterações
ambientais provocadas pela atividade humana, essas formigas invadiram e se
adaptaram a zona urbana, causando problemas em jardins residenciais, parques e
na arborização de ruas e avenidas. Visando à substituição dos agrotóxicos
tradicionais, o controle de formigas cortadeiras tem evoluído na procura de novos
ingredientes ativos mais seletivos, que não causem efeitos indesejáveis ao ambiente
e que possuam rápida degradação no solo. Atualmente, os ingredientes ativos que
têm se mostrado promissores no controle de formigas cortadeiras são os inibidores
da respiração celular. Portanto, o presente trabalho teve por objetivo avaliar a
eficiência dos ingredientes ativos rotenona e diafentiurom, utilizando como modelo a
espécie Atta sexdens rubropilosa. Para tal, foram realizados testes de toxicidade
para operárias médias isoladas da colônia, através de: 1) tratamentos por
incorporação dos ingredientes ativos em dieta artificial diluídos em acetona e na
mistura acetona + óleo, ambos nas concentrações 10µg/mL; 50µg/mL; 100µg/mL e
500µg/mL e 2) tratamentos por incorporação dos ingredientes ativos em mistura de
polpa cítrica e óleo de soja, nas concentrações 5.000µg/mL; 10.000µg/mL;
20.000µg/mL e 50.000µg/mL. No bioensaio de incorporação em dieta artificial, a
rotenona dissolvida em acetona apresentou toxicidade às operárias, com redução
mais acentuada para a concentração 500µg/mL. E quando diluída na mistura
acetona e óleo todas as concentrações apresentaram resultados significativos. Já no
bioensaio de incorporação de rotenona em polpa cítrica nas concentrações de
20.000µg/mL e 50.000µg/mL, a mortalidade das operárias foi muito acentuada,
inviabilizando a incorporação da rotenona em iscas nessas concentrações. A
presença do óleo de soja aumentou a toxicidade da rotenona e do diafentiurom. O
bioensaio com diafentiurom dissolvido em acetona e incorporado na dieta artificial
apresentou toxicidade às operárias de Atta sexdens rubropilosa em todas as
concentrações testadas, assim como ocorreu quando este estava dissolvido em
mistura de acetona e óleo de soja. Apesar dos resultados satisfatórios de toxicidade
do diafentiurom nos bioensaios de incorporação em dieta artificial para as operárias
de Atta sexdens rubropilosa apresentados no presente trabalho, o ingrediente ativo

diafentiurom apresentou baixa toxicidade às operárias quando incorporado em polpa
cítrica. Diante disso, novos bioensaios de incorporação em dieta artificial com o
ingrediente ativo diafentiurom devem ser realizados para observar se não há um
efeito de repelência deste ativo nas formigas através da filmagem do experimento
durante as primeiras 48 horas do oferecimento da dieta.

Palavras - chave: inibidor da respiração, rotenona, diafentiurom, Atta sexdens
rubropilosa, controle.

1. INTRODUÇÃO

As formigas são insetos que apresentam um importante papel no ecossistema
terrestre, mantendo a homeostase do ambiente, as condições físicas e químicas do
solo, a polinização das plantas e a dispersão das sementes (BROWN Jr., 2000;
HÖLLDOBLER; WILSON, 1990). Entretanto, em ambientes muito alterados pela
atividade humana, esses insetos podem se tornar pragas indesejáveis e, muitas
vezes, incontroláveis.
As formigas cortadeiras, conhecidas como saúvas e quenquéns, destacam-se
como principais pragas que ocorrem nas regiões tropicais e subtropicais das
Américas. Estas formigas cortam e transportam fragmentos vegetais para seus
ninhos, cultivando o fungo Leucoagaricus gongylophoros Singer (Möller), do qual se
alimentam. Entre elas, as saúvas são responsáveis por grandes danos econômicos
em áreas agrícolas, devido ao tamanho do sauveiro, o qual necessita de enorme
volume de folhas para o cultivo do fungo simbionte (ABREU; DELABIE, 1986;
CHERRETT, 1982; HOWARD, 1988). Muitos trabalhos demonstram os danos
causados pelas formigas cortadeiras em áreas agrícolas e de pastagens, porém,
não há muitos relatos em relação aos danos em áreas urbanas. Contudo, sabe-se
que elas ocorrem em jardins residenciais, parques, pequenas hortas domésticas e
na arborização de ruas e avenidas (BUENO, 2003; JUSTI Jr. et al., 1996).
Não há um levantamento das espécies de formigas cortadeiras que ocorrem
em ambientes urbanos, porém todas as classificadas como praga agrícola
apresentam potencial para ocorrer, desde que haja o alimento preferencial
disponível para o cultivo do fungo, pois estas formigas apresentam grande
capacidade de adaptação à diferentes tipos de ambientes, nidificando com sucesso
tanto em áreas naturais, pastagens, agrossistemas e áreas severamente alteradas
pela degradação humana (BUENO, 2003).
Os prejuízos ocasionados por essas formigas têm sido mencionados desde o
século XVI, mas as medidas de controle ainda são insuficientes (MARICONI, 1970).
Por outro lado, todas as formas de controle, apesar do custo elevado, apresentam
efeitos temporários e algumas vezes, danos indevidos para o ambiente (WILLIAMS,
1990).
9

Alguns métodos mecânicos, culturais e biológicos são empregados no
controle das formigas cortadeiras, porém, nem todos apresentam critérios de
utilização bem definidos e adequadamente mensuráveis. O controle químico, apesar
de algumas limitações, é o único a apresentar tecnologia disponível para ser
utilizado em escala comercial. Suas estratégias diferem quanto a formulação e modo
de aplicação dos inseticidas, destacando-se a termonebulização e as iscas tóxicas
como as mais eficientes (FORTI; BOARETTO, 1997).
Dado os efeitos maléficos causados pelos agrotóxicos sobre o meio
ambiente, o homem e outros animais, o controle químico de pragas de plantas
cultivadas, dentro das quais estão as formigas cortadeiras, constitui-se numa das
principais preocupações ecológicas. Em conseqüência disso, nos últimos anos,
ocorreu um aumento nas pesquisas na procura de alternativas para o controle
desses insetos. Uma delas foi a utilização de produtos que pudessem substituir os
agrotóxicos tradicionais por outros de degradação rápida, de maior especificidade e
menos danosos ao ambiente (MORINI et al., 2005). Outro aspecto importante e
pouco analisado é a otimização do uso dos ingredientes ativos atuais, conhecendo
melhor o modo de ação de cada um deles, a concentração mais adequada e a
melhor forma de atingir o alvo (BUENO, 2005)
Por muitos anos, as iscas foram formuladas com inseticidas organoclorados,
entre eles o dodecacloro, proibido a partir de 1993 devido à alta persistência no solo
e ao acúmulo na cadeia alimentar. Desde então vários ingredientesativos foram
utilizados, entre eles os organofosforados, a sulfluramida e o fipronil. Atualmente,
95% do controle de formigas cortadeiras são realizados com o uso de iscas a base
de sulfluramida, o que tem causado preocupação constante, pois esta molécula foi
incluída no anexo B da Convenção de Estolcomo sobre Poluentes Orgânicos
Persistentes no ano de 2009, com restrições de produção e uso somente para o
controle de formigas cortadeiras no Brasil até que um ingrediente ativo substituto
seja encontrado (UNITED NATIONS ENVIRONMENT PROGRAMME, 2009).
Portanto, novamente há uma procura de novos compostos para o controle desses
insetos e uma crescente preocupação entre os pesquisadores no sentido de
encontrar inseticidas mais seletivos e menos agressivos ao ambiente, além de
outros métodos alternativos.
Análises toxicológicas recentes foram realizadas utilizando vários ingredientes
ativos empregados no controle de pragas em geral, buscando assim novos
10

ingredientes ativos para o controle de formigas cortadeiras e os que se mostraram
mais promissores para uso em iscas foram os que atuam na inibição da respiração
celular dos insetos (BUENO, 2005; NAGAMOTO, 1998, 2003; NAGAMOTO et al.,
2004; TAKAHASHI-DEL-BIANCO, 2002).
Diante disso, o presente trabalho tem por objetivo avaliar a eficiência dos
inibidores da respiração celular, rotenona e diafentiurom, para o uso em iscas no
controle de formigas cortadeiras, utilizando como modelo a “saúva-limão” Atta
sexdens rubropilosa.

2. REVISÃO BIBLIOGRÁFICA

2.1. As formigas cortadeiras

As formigas cortadeiras dos gêneros Atta (saúvas) e Acromyrmex
(quenquéns), pertencentes a Tribo Attini, subfamília Myrmicinae e família Formicidae
são insetos sociais que se caracterizam pela estreita relação simbiótica que mantêm
com um fungo específico que é a base da alimentação da colônia, o qual é cultivado
sobre fragmentos frescos de origem vegetal (HÖLDOBLER; WILSON, 1990;
WEBER, 1972). No Brasil, ocorrem 21 espécies do gênero Acromyrmex (FOWLER
et al., 1986; FOWLER, 1988; GONÇALVES, 1961, 1967, 1982) e 9 espécies do
gênero Atta (DELABIE, 1998).
A associação mutualística surgiu há aproximadamente 50 milhões de anos
(MUELLER et al., 2001; SCHULTZ, 1999) e teria origem com uma ancestral Attini
forrageadora generalista que cultivava o fungo de forma facultativa e que
posteriormente, passou a ter uma relação simbiótica obrigatória (MUELLER, 2002).
Essa relação simbiótica entre o fungo e as formigas cortadeiras proporciona
benefícios a ambos (SCHUTZ et al., 2005), pois por um lado, as formigas se
beneficiam do fungo através da quebra de enzimas possibilitando a detoxicação de
compostos secundários (aleloquímicos) oriundos dos vegetais, os quais poderiam
agir como inseticida às formigas (LITTLEDYKE; CHERRETT, 1978; NORTH et al.,
1997; 1999) e por outro lado, o fungo se beneficia pela manutenção do ambiente
livre de competidores (antagonista ou entomopatogênicos) através da aplicação de
11

compostos antibióticos produzidos pelas formigas, além do fungo não poder viver
independente delas (CURRIE et al., 1999). Sendo assim, as formigas protegem o
fungo da presença de microorganismos patogênicos, através da produção de
substâncias (enzimas proteolíticas) livrando-o de competidores que poderiam reduzi-
lo e consequentemente matá-lo. Existindo assim, uma dependência entre eles, onde
a ausência de um acarretará no desaparecimento do outro (CURRIE et al., 1999;
CURRIE; STUART, 2001).

2.2. Importância econômica

O fato das formigas cortadeiras atacarem muitas espécies vegetais resulta em
altos prejuízos, não só pela competição por esses produtos com o homem e seus
animais domésticos (AMANTE, 1972), como também pela preferência desses
insetos para a utilização de plantas cultivadas (CHERRETT, 1968). Além disso, o
efeito pode ser indireto, em decorrência da contaminação ambiental pelos
agrotóxicos utilizados no seu controle (DELLA LUCIA; FOWLER, 1993).
Segundo Amante (1967), dez sauveiros adultos/ha cortam cerca de 21kg de
folhas/dia, reduzindo em mais de 50% a capacidade de pastagem, além de
proporcionar maior desenvolvimento de plantas daninhas.
Os prejuízos causados pela atividade de A. sexdens rubropilosa, numa
densidade de 4 colônias/ha foram calculados em 14% para plantações de eucalipto
e 14,5% para a produção de pinos (AMANTE, 1972), porém, os danos causados em
áreas urbanas são pouco relatados e consequentemente não há uma estimativa dos
prejuízos causados por estas formigas (BUENO, 2003).
Mariconi (1970) refere-se as saúvas causando danos às construções, tais
como prédios, represas, pontes e pontilhões, mausoléus e túmulos, bem como nas
estradas de rodagem e de ferro pelo fato de as galerias e as panelas poderem ceder
o peso das paredes de uma casa ou outra construção.

2.3. Métodos de controle

Devido aos danos econômicos, as formigas cortadeiras são alvos de
diferentes métodos de controle. Atualmente, os métodos utilizados são: culturais,
mecânicos, biológicos, físicos e químicos (DELLA LUCIA; VILELA, 1993; FORTI;
BOARETTO, 1997; LOECK et al., 2001).
O controle cultural pode ser realizado através de métodos de aração e
gradagem do solo para formigueiros com até 4 meses de idade, pois nesta fase, a
única câmara da colônia ainda se localiza a aproximadamente 20 centrímetros de
profundidade do solo e há grande probabilidade das lâminas do equipamento
atingirem a rainha e matá-la (DELLA LUCIA; VILELA, 1993). Porém para
formigueiros adultos, o efeito pode ser prejudicial, uma vez que a mecanização do
solo pode desestruturar parcialmente a colônia, cessando temporariamente sua
atividade, dando a falsa impressão de que foi controlada e dificultando sua
localização (FORTI; BOARETTO, 1997).
O controle mecânico consiste na escavação do ninho até que a rainha seja
localizada e morta. É uma alternativa viável para exterminar ninhos iniciais ou
jovens, porém tratando-se de ninhos mais antigos que podem atingir grandes
dimensões, não existe previsão da localização da rainha e o método se torna
inadequado (JUSTI Jr. et al, 1996).
Já o controle biológico natural, através de predadores, parasitóides e
microrganismos patogênicos é importante na regulação das populações de formigas
cortadeiras, principalmente durante o período da revoada e da fundação de novas
colônias. Os inimigos naturais juntamente com as condições ambientais são
responsáveis pelo controle de 99,95% das rainhas, antes mesmo que elas tenham
fundado suas colônias (FORTI; BOARETTO, 1997).
No entanto, a introdução de inimigos naturais no ambiente, sejam eles
microrganismos, outros invertebrados e vertebrados ainda não pode ser visualizada
como estratégia de controle para as formigas cortadeiras devido aos poucos estudos
nesta área. Ainda assim, o controle biológico deve ser sempre lembrado como
técnica de manejo integrado de pragas e algumas medidas como restrição à caça de
animais e ao uso de fitossanitários e plantação de vegetação nativa entre a cultura
13

principal são importantes para a preservação dos inimigos naturais das formigas
(DELLA LUCIA; VILLELA, 1993).
O uso de barreiras para proteger a copa das plantas é um método de controle
físico muito antigo e um dos mais utilizados em pomares para se evitar o ataque das
formigas, sendo que cones plásticos invertidos e tiras plásticas cobertas com graxa
ou vaselina colocados nos troncos das árvores são as barreiras mais utilizadas. Este
é um método eficiente, porém, vistorias e reparos constantes devem ser feitos para
que a proteção das árvores seja prolongada (JUSTI Jr. et al., 1996).
A busca de alternativas de controle para as formigas cortadeiras é feita
através de métodos que visam um resultado rápido devido ao nível de dano e a
velocidade com que esse dano é causado. A eficiência do controledepende do
método de aplicação adequado à situação, sendo que o ideal é achar uma condição
de campo e uma tecnologia de aplicação que levem a um resultado econômico e
eficiente. Por isso, os métodos químicos se destacam, apesar de suas várias
restrições é o único que apresenta tecnologia disponível para ser utilizado em larga
escala comercial no controle de formigas cortadeiras. As estratégias de controle
químico diferem, principalmente, pelo tipo de formulação e modo de aplicação dos
inseticidas, podendo ser (FORTI; BOARETTO, 1997):

2.3.1. Formicidas pós:

São formulados em veículos sólidos (talcos) e aplicados com equipamentos
manuais (polvilhadeiras). O produto é aplicado nos olheiros visando atingir o interior
do formigueiro e a morte das formigas se dá com o contato direto do produto. Como
há impossibilidade de penetração do produto nas câmeras de ninhos adultos,
apresenta fortes limitações, dada a sua complexidade estrutural, aderência do
produto ao solo devido á umidade, inviabilizando a aplicação e a necessidade de
remoção da terra solta 24 a 48 horas antes da aplicação, tornando a técnica
trabalhosa e apresenta riscos elevados para o ambiente e para o aplicador.

2.3.2. Formicidas líquidos:

Antigamente foram muito difundidos e utilizados para o controle de formigas
cortadeiras. No entanto, devido a baixa eficiência dos produtos já testados,
decorrente da necessidade destes entrarem em contato com as formigas, além do
dispendioso trabalho de perfuração do ninho e perdas do produto pela absorção do
solo, foram rapidamente substituídos por outras formas de controle.

2.3.3. Fumigantes:

O emprego de gases tóxicos para matar formigas cortadeiras é um dos
métodos pioneiros no controle desses insetos. Consiste no uso de gases que são
comercializados comprimidos em embalagens apropriadas e são liberados
diretamente no interior dos ninhos, através dos olheiros por meio de mangueiras
adaptadas ou uma válvula de saída. Tal método dispensa o uso de equipamentos na
aplicação, no entanto o custo da formulação dos ingredientes ativos utilizados é
elevado, exige mão de obra especializada para a aplicação e apresenta alta
periculosidade.

2.3.4. Termonebulização:

A aplicação dos líquidos termonubulizáveis consiste na introdução de um
inseticida líquido veiculado em óleo mineral ou diesel sob ação do calor, aplicado
nos olheiros por aparelhos próprios, os termonebulizadores, que produzem fumaça
tóxica.
Geralmente o método de aplicação mais utilizado é por saturação, ou seja, a
fumaça é injetada num dos orifícios e quando a fumaça torna-se densa, os orifícios
são fechados. Destaca-se como um método eficiente para o controle de grandes
ninhos em áreas extensas, onde outras metodologias podem tornar-se inviáveis. No
entanto, o método apresenta desvantagens operacionais e econômicas, sendo a
manutenção dos equipamentos um dos maiores entraves à sua viabilidade.
Apresenta alto risco de intoxicação para o trabalhador.

2.3.5. Nebulização:

A nebulização a frio do ingrediente bifentrina, veiculados pelos gases butano
e propano é feita pelo equipamento Aero-system. A maior densidade dessa mistura
em relação ao ar permite o deslocamento descendente destes gases no interior do
formigueiro sendo que a aplicação pode ser feita por dosagem previamente
estabelecida (medida do fluxo gasoso/ tempo) ou por saturação (constatada pelo
refluxo do gás no olheiro de aplicação). No entanto, as principais limitações do
método se devem à baixa eficiência no controle de formigueiros adultos e problemas
operacionais, tal como o congelamento na lança de aplicação e a consequente
obstrução do fluxo, bem como a possibilidade de vazamento nas válvulas.

2.3.6. Iscas tóxicas:

Consistem da mistura de um ingrediente ativo dissolvido em óleo de soja e
incorporado a um substrato atrativo, geralmente polpa cítrica desidratada, prensados
na forma de grânulos. Os grânulos são distribuídos próximos as trilhas de
forrageamento, sendo posteriormente transportados pelas próprias formigas para o
interior da colônia. Embora apresente limitações de uso em dias chuvosos e em
áreas muito extensas, bem como a possibilidade de intoxicação de animais
silvestres, trata-se de um método eficiente, prático e econômico.
A polpa cítrica é o substrato mais atrativo para várias espécies de formigas
cortadeiras.
O uso de iscas tóxicas destaca - se entre as estratégias de controle químico
por oferecer maior segurança ao aplicador, uso de mão-de-obra barata, por
dispensar equipamentos especializados e permitir o tratamento de formigueiros em
locais de difícil acesso.

2.4. Controle de formigas cortadeiras com iscas tóx icas

Para apresentar resultados eficientes, as iscas tóxicas devem apresentar as
seguintes características: 1) ser atrativa às formigas, se possível a certa distância do
ninho; 2) ser carregada sempre que encontrada; 3) ter ação lenta o suficiente para
ser conduzida para longas distâncias; 4) ser distribuída amplamente pela colônia
antes que apareçam os primeiros sintomas de intoxicação; 5) apresentar
especificidade às espécies alvos; 6) apresentar baixa toxicidade aos vertebrados; 7)
permanecer efetiva em condições adversas e; 8) conter um ingrediente ativo
biodegradável (BUENO; CAMPOS-FARINHA, 1999; ETHERIDGE; PHILLIPS, 1976;
FORTI et al., 1993).
Apesar de ser um método relativamente prático, o emprego de iscas tóxicas
deve ser feito com muito critério e requer uma série de conhecimentos para a
obtenção de resultados satisfatórios. Para tal, é muito importante realizar a vistoria
da área a ser tratada, localizando os formigueiros e identificando as espécies de
formigas presentes (ANJOS et al., 1993; FORTI; BOARETTO, 1997).
Uma vez localizado o formigueiro e constatado que a colônia está ativa, a
área de terra solta deve ser medida para o estabelecimento da dose de isca,
multiplicando-se a maior largura pelo maior comprimento do monte de terra solta.
Embora o estabelecimento da dose de isca por unidade de área seja um método
empírico, não há outra alternativa até o presente momento e, as doses
recomendadas pelos fabricantes são de 6 a 10 g/m2 de terra solta para saúvas, em
função do modo de ação e da concentração do ingrediente ativo, e de 10 g/ninho
para quenquéns (FORTI; BOARETTO, 1997).
As iscas podem ser aplicadas a granel ou em pequenos recipientes,
denominados porta-iscas (PIs) ou micro-porta-iscas (MIPIs), em função da
quantidade de isca presente na embalagem. As iscas a granel devem ser aplicadas
diretamente das embalagens, sem o contato manual, ao lado do maior número de
trilhas que possuem olheiros ativos, próximos aos montes de terra solta. No entanto,
os PIs devem ser distribuídos sistematicamente sobre a área, sem levar em
consideração o local em que cada formigueiro está situado, evitando a necessidade
de localização e medição dos ninhos (ANJOS et al., 1993).
As iscas contendo um ingrediente ativo de ação lenta, uma vez
transportadas para o interior do ninho, são distribuídas uniformemente por toda a
colônia (MOREIRA et al., 2003; PRETTO; FORTI, 2000) sendo fragmentadas e
lambidas pelas operárias por repetidas vezes. Num período entre 6 e 8 horas estas
17

iscas já estão totalmente fragmentadas, sendo incorporadas no jardim de fungo,
onde sofrem hidratação, incham e se fragmentam ainda mais em pedaços muito
pequenos, impossibilitando sua remoção da colônia (FORTI; BOARETTO, 1997).
Neste mesmo período, algumas operárias já estão contaminadas e, 50% a
70% das operárias se contaminam a partir de 24 horas. Essa contaminação se dá
por ingestão direta do ingrediente ativo durante o processamento da isca e através
da limpeza individual e coletiva das operárias na tentativa de remover pequenos
fragmentos de iscas de seus corpos e não através da trofalaxia,como era
amplamente divulgado, pois recentemente, verificou-se que este comportamento
ocorre com uma freqüência muito baixa entre as operárias adultas (ANDRADE et al.,
2002; SCHNEIDER, 2003; BUENO et al., 2008).
As operárias generalistas e jardineiras são as que se contaminam mais
intensa e rapidamente, devido à atividade que desempenham na limpeza em geral e
no cuidado com o fungo. Com a crescente mortalidade das operárias ocorre uma
desorganização geral da colônia e a cultura de fungo deixa de ser cuidada,
facilitando a contaminação por outros fungos e, conseqüentemente, o formigueiro é
extinto em poucos dias (FORTI; BOARETTO, 1997).

2.5. Controle de formigas cortadeiras em ambientes urbanos

Os ninhos de formigas cortadeiras na área urbana não atingem grandes
dimensões por encontrarem-se em áreas reduzidas, onde são facilmente
visualizados, como é o caso de jardins residenciais e dos parques onde geralmente
possuem uma equipe técnica de manutenção para a realização de vistorias visando
a aplicação posterior de mecanismos de controle. Assim, os ninhos não chegam a
atingir mais que dois anos de idade nesses locais. Por possuírem números
reduzidos de panelas, estes formigueiros jovens podem ser destruídos por meio de
escavações e eliminação da rainha, por saturação com água por meio de
mangueiras ou por introdução de emulsão de sabão em pó a 0,5%, inundando-se
cerca de um terço do volume inferior do ninho. Caso a opção seja por um controle
químico, a formulação na forma de isca revela-se a mais indicada, em termos de
facilidade de aplicação e segurança para o aplicador e o meio ambiente. Deve-se
tomar medidas importantes de segurança tais como: dimensionamento preciso do
18

formigueiro para que se determine uma dosagem adequada, para que não ocasione
falta ou excesso de isca e com o auxílio de luvas e pás, remover o excesso desse
material, assim evitando que crianças, leigos e animais manuseiem e ou ingiram os
grânulos, o isolamento da área durante o período do tratamento, impedindo assim o
tráfego de pessoas e animais e a vigilância constante do local durante o período de
controle (JUSTI Jr. et al., 1996).
No caso de grandes condomínios em que ainda existam lotes vagos,
canteiros centrais de grandes avenidas e parques onde não sejam viáveis vistorias
minuciosas e constantes, os formigueiros podem atingir grandes dimensões. Para
estas condições a formulação em isca será a mais adequada, entretanto, há a
necessidade de medidas de segurança, como isolamento e vigilância da área. Para
o uso destas formulações é de fundamental importância que o produto seja
registrado no Ministério da Saúde como domissanitário para não ocorrer nenhum
tipo de acidente indesejado. (JUSTI Jr. et al., 1996).

2.6. Ingredientes ativos

Conhecer a qualidade e a forma de ação dos ingredientes ativos é
fundamental na preparação de iscas tóxicas eficientes e economicamente viáveis
para o controle de formigas cortadeiras. O ingrediente ativo deve atender os
requisitos básicos como: não apresentar efeito repelente, agir mesmo quando em
baixas concentrações, ter ação cumulativa por ingestão e apresentar baixa
toxicidade aos mamíferos, além de ser de ação lenta e rapidamente degradável
quando exposto ao ambiente (BUENO; CAMPOS-FARINHA, 1999; FORTI;
BOARETTO, 1997).
Os inibidores da respiração celular pertencem a um grupo de ingredientes
ativos de ação lenta, dentro do qual se encontra a hidrametilnona, registrada com o
nome comercial Amdro® e utilizada no controle de Solenopsis spp. (LOFGREN,
1986). No entanto, poucos estudos foram realizados para avaliar o potencial deste
ingrediente ativo no controle de formigas cortadeiras (CAMERON, 1990;
MENDONÇA et al., 1987; NAGAMOTO; FORTI, 1999; PAPA et al., 1997; VILELA,
1986; WILCKEN et al., 1998). O trabalho mais atual realizado com hidrameltinona no
controle de formigas cortadeiras, usando a espécie Atta sexdens rubropilosa, foi
19

realizado por Bueno (2005) e este por sua vez apresentou resultados satisfatórios no
controle dessas formigas.
A sulfuramida também é um inibidor da respiração celular dos insetos, atua na
síntese do ATP (BOOMQUIST, 2009) e foi lançada no mercado como um substituto
do dodecacloro (ZANUNCIO et al., 1993).
Os inseticidas/acaricidas inibidores da respiração celular têm sido bastante
utilizados no controle de pragas em geral e usados no manejo de ácaros em
diversas culturas, devido à sua eficiência no controle e ao seu mecanismo de ação
diferenciado. Esses acaricidas atuam em diversas etapas da respiração celular
comprometendo, principalmente, a geração de energia (adenosina trifosfato - ATP) e
são divididos de acordo com o seu provável modo de ação: inibidores da fosforilação
oxidativa via disrupção da síntese de ATP (exemplo: organoestânicos, diafentiurom,
propargite e tetradifom), desacopladores da fosforilação oxidativa via disrupção do
gradiente de próton H+ (clorfenapir e dinocape), inibidores do transporte de elétrons
no complexo I (piridabem, fenpiroximate, fenazaquim e tebufenpirade) e no
complexo III. Embora não esteja muito esclarecido, o grupo dos inibidores da
fosforilação oxidativa via disrupção da síntese de ATP são subdivididos em:
organoestânicos, propargite, tetradifom e diafentiurom (CORBETT et al. 1984,
DEKEYSER 2005).
Os ingredientes ativos rotenona e diafentiurom, analisados no presente
trabalho, estão caracterizados a seguir. As informações básicas sobre rotenona
foram obtidas da Pesticide Action Network Europe - PAN-UK (EUROPE, 2010). Já
os dados do diafentiurom foram extraídos da monografia depositada no Ministério da
Saúde Brasil (Brasil, 2010).

Nome comum : Rotenona/ Rotenone

Nome químico : 2R,6aS,12aS)-1,2,6,6a,12,12a-hexahydro-2-isopropenyl-8,9
dimethoxychromeno[3,4-b] furo(2,3-h)chromen-6-one

Formula molecular : C23H22O6

Formula Estrutural :

Classe química : rotenóide

Classificação toxicológica : classe II

Modo de ação : inibidor de uma das enzimas do Complexo I da cadeia de transporte
de elétrons na mitocôndria. Na presença deste inseticida, os elétrons provenientes
do NADH não podem entrar na cadeia de transporte de elétrons, o que resulta na
incapacidade de produzir ATP a partir da oxidação do NADH. A enzima inibida pela
rotenona é a NADH desidrogenase. A rotenona afeta a respiração celular e pode
também afetar a coordenação muscular (WASILEWSKI, J. 2002).

Características do ingrediente ativo : produto de origem botânica, obtido das
raízes de várias espécies de plantas subtropicais e tropicais pertencentes ao gênero
Lonchocarpus e Derris.
A rotenona é rapidamente degradada no solo e na água: sua meia-vida em
ambos é entre um e três dias Quase toda a sua toxicidade é perdida em 5 - 6 dias
de sol de primavera, ou dois ou três dias de sol de verão. Não é facilmente lixiviada
no solo e provavelmente não é um poluente das águas subterrâneas. É solúvel em
éter e acetona e pouco solúvel em etanol.

Nome comum : Diafentiurom/ Diafenthiuron

Nome químico : 1-tert-butyl-3-(2,6-di-isopropyl-4-phenoxyphenyl) thiourea

Fórmula molecular : C23H32N2OS

Fórmula Estrutural:

Grupo Químico : Feniltiouréia

Classificação toxicológica : Classe III

Modo de ação : Interfere na respiração celular dos insetos por meio da inibição da
ATPase.

Características do ingrediente ativo : solúvel em água (0,06mg/L – 25ºC), em
etanol, acetona (43g/L), tolueno, n-hexano 9.6, octanol-n-26 (320 - 330g/L- 25ºC).
Estável em ar, água e à luz. Diafentiurom e seus principais metabólitos mostram
uma forte sorvidade (infiltração X tempo) às partículas do solo. Degradação de
recursos em solos rapidamente: DT50 <1 h para 1,4 dias (CHINA, 2009).

3. MATERIAL E MÉTODOS

3.1. Testes “ in vitro” de toxicidadeda rotenona e do diafentiurom em op erárias
de Atta sexdens rubropilosa

3.1.1. Coleta e manutenção das formigas utilizadas nos bioensaios

As operárias de Atta sexdens rubropilosa, com massa corpórea variando de
15 a 25 mg, foram coletadas de formigueiros mantidos em laboratório no Centro de
Estudos de Insetos Sociais - UNESP - Campus Rio Claro. Para a manutenção
desses formigueiros, diariamente foram oferecidos folhas de Eucaliptus sp. e flocos
de aveia e, ocasionalmente, outras plantas palatáveis às saúvas como Hibiscus sp.,
Ligustrum sp. ou folhas e pétalas de roseiras (Figura 1).
Para a manutenção das formigas isoladas do formigueiro, consequentemente
na ausência do fungo simbionte e de folhas considerados seus alimentos, foi
utilizada uma dieta artificial sólida, preparada com 5 g de glicose, 1 g de peptona
bacteriológica, 0.1 g de extrato de levedura e 1.5 g de ágar bacteriológico,
dissolvidos em 100 mL de água destilada. Após a mistura das substâncias, a dieta
foi levada ao forno de microondas para melhor solubilização dos ingredientes e,
posteriormente autoclavada a 120ºC e 1 atm por 15 minutos. Em seguida foi vertida
ainda quente em placas de Petri de 10 cm de diâmetro, previamente esterilizadas
em estufa a 180º C e, após o resfriamento e a solidificação, foi embrulhada em filme
de PVC e mantida em geladeira, sendo utilizada nos dias subsequentes, durante o
período do experimento (BUENO et al., 1997).

Figura 1. Vista geral do formigueiro de Atta sexdens rubropilosa
mantido no laboratório do Centro de Estudos de Insetos Sociais
(CEIS).
23

3.1.2. Bioensaios para determinação da toxicidade

Os ingredientes ativos foram obtidos através das firmas produtoras, na forma
de produto técnico, apresentando grau de pureza de 80% para a rotenona e de 95%
para o diafentiurom. Para o estabelecimento das concentrações testadas, não foram
realizadas as correções das impurezas dos produtos técnicos.
Os ingredientes ativos foram pesados em balança analítica, dissolvidos e
testados de 2 modos diferentes: incorporados em dieta artificial (bioensaio I) e
incorporados em polpa cítrica (bioensaio II).
Em todos os bioensaios as formigas foram retiradas dos formigueiros e
distribuídas em lotes de 50 operárias para cada concentração testada, divididas em
grupos de 10 formigas e mantidas em 5 placas de Petri de 10 cm de diâmetro
forradas com papel filtro (Figura 2). Essas placas foram colocadas em estufa para
BOD com temperatura de 24ºC + 1ºC e umidade relativa acima de 70%. Os
bioensaios foram examinados diariamente, para a retirada e anotação do número de
formigas mortas, durante um período de 25 dias.
A dieta para manutenção das formigas (controle) ou dieta acrescida dos
ingredientes ativos (tratamentos) foi colocada em papel alumínio na quantidade
aproximada de 0.4 a 0.5 g/placa. A cada 24 horas a dieta foi renovada e sempre que
necessário, os papéis filtro (que geralmente são cortados pelas formigas) foram
trocados, a fim de se evitar o desenvolvimento de fungos contaminantes bem como
manter o ambiente limpo para as formigas.
Foi estipulado um período máximo de 25 dias para a realização dos
experimentos de toxicidade, levando-se em conta o período normal de sobrevivência
das formigas mantidas com dieta artificial (BUENO et. al, 1997).

3.1.3. Bioensaio I: incorporação em dieta artificia l

Os ingredientes ativos, dissolvidos em acetona ou em mistura de acetona e
óleo de soja (9:1), foram incorporados em dieta artificial ainda quente (logo após a
retirada da autoclave), nas concentrações estipuladas. As formigas foram
distribuídas nas placas de Petri e juntamente a elas foi acrescida a dieta contendo o
ingrediente ativo.
No bioensaio por ingestão foram utilizados dois controles. No primeiro, a
acetona ou a mistura de acetona e óleo de soja foi incorporada na dieta artificial e,
no segundo apenas a dieta artificial. O objetivo do primeiro controle foi acompanhar
e avaliar a sobrevivência das formigas com referência a toxicidade da acetona e do
óleo, enquanto que a do segundo foi verificar a interferência do manuseio na
sobrevivência das formigas.
Os testes de incorporação do ingrediente ativo em dieta artificial foram:
• rotenona dissolvida em acetona nas concentrações: 10µg/mL; 50µg/mL;
100µg/mL e 500µg/mL, utilizando-se acetona como controle.
Figura 2. Operárias de Atta sexdens rubropilosa
submetidas ao tratamento com o ingrediente ativo
incorporado em dieta artificial
25

• rotenona dissolvida em mistura de acetona e óleo de soja (9:1) nas
concentrações 10µg/mL; 50µg/mL; 100µg/mL e 500µg/mL, utilizando-se a
mistura acetona e óleo de soja como controle.
• diafentiurom dissolvido em acetona nas concentrações: 10µg/mL; 50µg/mL;
100µg/mL e 500µg/mL, utilizando-se acetona como controle.
• diafentiurom dissolvido em mistura de acetona e óleo de soja (9:1) nas
concentrações 10µg/mL; 50µg/mL; 100µg/mL e 500µg/mL, utilizando-se a
mistura acetona e óleo de soja como controle.

3.1.4. Bioensaio II: incorporação em polpa cítrica

Os ingredientes ativos foram adicionados a uma mistura de polpa cítrica em
pó e óleo de soja na proporção 9:1, nas concentrações 5.000µg/mL (0,5%);
10.000µg/mL (1%); 20.000µg/mL (2%) e 50.000µg/mL (5%). A polpa cítrica em pó foi
preparada a partir dos “pellets” originários das indústrias de suco de laranja, que
foram moídos em moinho de facas e selecionados em peneira de malha fina.
No primeiro dia de experimento as formigas foram distribuídas em placas de
Petri e juntamente a elas foi acrescentada 0,3g da mistura (ingrediente ativo + óleo +
polpa cítrica), além de aproximadamente 0,5g da dieta artificial descrita no item 4.1.1
(Figura 3). A partir do segundo dia de experimento todas as placas de Petri foram
substituídas para retirada da sobra de polpa cítrica e, as formigas passaram a
receber somente a dieta artificial até o término do experimento. Portanto, neste caso,
o ingrediente ativo foi oferecido as formigas por apenas 24 horas.
Para esse tipo de bioensaio foram utilizados dois controles. No primeiro foram
oferecidos mistura de polpa cítrica e óleo juntamente com a dieta artificial e, no
segundo ofereceu-se somente dieta artificial. O objetivo do primeiro controle foi
avaliar a sobrevivência das formigas com referência a toxicidade do óleo de soja,
enquanto que o do segundo foi verificar a interferência do manuseio na
sobrevivência das formigas.

3.1.5. Análise dos dados de toxicidade

A análise gráfica foi realizada através das determinações das porcentagens
acumuladas de formigas vivas por dia para cada tratamento. Posteriormente, o
tempo de sobrevivência mediana foi determinado e as curvas de sobrevivência
foram comparadas por meio do teste não paramétrico “log rank”, com nível de
significância de 5% (ELANDT - JOHNSON et al., 1980), utilizando-se o software
Graph-Pad, aplicativo Prisma 3.0.
As curvas de sobrevivência de operárias tratadas com o primeiro controle e
com o segundo controle foram comparadas através do teste “log-rank”. A ausência
de diferença significativa entre elas indicou a não interferência do solvente e do óleo
de soja. Em seguida, procedeu-se a comparação das curvas de sobrevivência de
formigas submetidas aos tratamentos com aquelas do controle solvente ou solvente
+ óleo.

Figura 3 . Operárias de Atta sexdens rubropilosa submetidas
ao tratamento com o ingrediente ativo incorporado em polpa
cítrica
27

4. RESULTADOS E DISCUSSÃO

4.1. Rotenona

4.1.1. Toxicidade para operárias de Atta sexdens rubropilosa

Os resultados obtidos para cada bioensaio estão apresentados através das
análises gráficas das curvas de sobrevivência e das tabelas queresumem as
porcentagens acumuladas de mortalidade diária, o tempo de sobrevivência mediana
(Md) e a interpretação do teste “log rank”.

4.1.1.1. Incorporação em dieta artificial

A rotenona dissolvida em acetona e incorporada na dieta artificial provocou
diminuição na sobrevivência das operárias de Atta sexdens rubropilosa, com
redução mais acentuada para a concentração 500µg/mL (Figura 4). A análise
estatística revelou que as concentrações 10µg/mL, 50µg/mL, 100µg/mL e 500µg/mL
apresentaram valores significativos quando comparadas com o controle acetona. O
tempo de sobrevivência mediana das formigas tratadas com rotenona foi de 22 dias
para a concentração 10µg/mL, 17 dias para as concentrações 50µg/mL e 100µg/mL
e 15 dias para a concentração 500µg/mL. O controle dieta pura apresentou mediana
superior a 25 dias e o controle acetona atingiu a mediana no 25º dia de experimento.
Não houve mortalidade total das formigas até o término do experimento,
observando-se 68% de mortalidade para concentração 10µg/mL, 86% para as
concentrações 100µg/mL e 500µg/mL e 90% para a concentração 50µg/mL.
As formigas mantidas com dieta artificial contendo rotenona dissolvida em
acetona apresentaram sintomas de intoxicação, principalmente dificuldade de
locomoção e imobilidade (lentidão), a partir do 8º dia para as concentrações
100µg/mL e 500µg/mL e a partir do 11º dia para as concentrações 10µg/mL e
50µg/mL.
28

A rotenona dissolvida em mistura de acetona e óleo de soja e incorporada na
dieta alimentar também provocou diminuição na sobrevivência das operárias de Atta
sexdens rubropilosa, com redução mais acentuada para as concentrações 100µg/mL
e 500µg/mL (Figura 5).
A análise estatística revelou que as concentrações 10µg/mL, 50µg/mL,
100µg/mL e 500µg/mL apresentaram valores significativos quando comparadas com
o controle acetona + óleo. O tempo de sobrevivência mediana das formigas tratadas
com rotenona foi de 11 dias para as concentrações 10µg/mL e 100µg/mL, 10 dias
para a concentração 500µg/mL e 9 dias para a concentração 50µg/mL. O controle
dieta pura e o controle acetona + óleo apresentaram medianas superiores a 25 dias.
A mortalidade total das operárias ocorreu no 25º dia para a concentração 10µg/mL,
no 21º dia para a concentração 50µg/mL e no 17º dia para as concentrações
100µg/mL e 500µg/mL.
As formigas mantidas com dieta artificial contendo rotenona dissolvida em
acetona e óleo de soja também apresentaram sintomas de intoxicação,
principalmente dificuldade de locomoção e imobilidade (lentidão), a partir do 5º dia
para as concentrações 50µg/mL, 100µg/mL e 500µg/mL e a partir do 7º dia para a
concentração 10µg/mL.
Assim como observado por Bueno (2005) para o ingrediente ativo
hidrametilnona, a presença do óleo de soja também aumentou a toxicidade da
rotenona, reduzindo o tempo da sobrevivência mediana das operárias de 22 dias
para 11 dias na concentração 10µg/mL, de 17 dias para 9 dias na concentração
50µg/mL, de 17 dias para 11 dias na concentração 100µg/mL e de 15 dias para 10
dias na concentração 500µg/mL. O tempo de mortalidade total das formigas também
foi reduzido. Nos tratamentos com rotenona dissolvida em acetona não ocorreu
mortalidade total das operárias até o término do experimento enquanto que nos
tratamentos com rotenona dissolvida em acetona + óleo ocorreu mortalidade total
das operárias para todas as concentrações testadas antes do término do
experimento.
29

Figura 4 . Curvas de sobrevivência de operárias de Atta sexdens rubropilosa submetidas ao bioensaio
de incorporação em dieta artificial com rotenona e solvente acetona.

Tabela 1 . Mortalidade acumulada e sobrevivência mediana (Md) de operárias de Atta sexdens
rubropilosa submetidas ao bioensaio de incorporação em dieta artificial com rotenona e solvente
acetona

Tratamento
% acumulada de mortalidade por dia
Md *
1 2 3 6 8 10 14 17 21 25
Dieta Pura 0 0 0 0 0 0 2 8 24 40 >25a
Acetona 0 0 0 0 0 2 8 10 14 28 25a
Rotenona 10µg/mL 0 0 0 4 6 10 14 30 48 68 22b
Rotenona 50µg/mL 0 0 0 6 8 12 20 54 78 90 17b
Rotenona 100µg/mL 0 0 0 4 8 10 32 54 78 86 17b
Rotenona 500µg/mL 0 0 0 0 14 20 42 58 70 86 15b

* Letras distintas em relação ao controle indicam diferença significativa de acordo com o teste “log rank” (p< 0,05).

Figura 5 . Curvas de sobrevivência de operárias de Atta sexdens rubropilosa submetidas ao bioensaio
de incorporação em dieta artificial com rotenona e solvente acetona e óleo.

Tabela 2 . Mortalidade acumulada e sobrevivência mediana (Md) de operárias de Atta sexdens
rubropilosa submetidas ao bioensaio de incorporação em dieta artificial com e solvente acetona e
óleo

Tratamento
% acumulada de mortalidade por dia
Md *
1 2 3 6 8 10 14 17 21 25
Dieta Pura 0 0 0 0 0 0 2 8 24 40 >25a
Acetona + óleo 0 0 0 4 8 8 12 22 34 40 >25a
Rotenona 10µg/mL 0 0 0 2 18 42 72 90 98 100 11b
Rotenona 50µg/mL 0 2 4 24 42 68 88 96 100 100 9,0b
Rotenona 100µg/mL 0 0 2 14 28 50 96 100 100 100 11b
Rotenona 500µg/mL 0 2 2 24 38 66 86 100 100 100 10b

* Letras distintas em relação ao controle indicam diferença significativa de acordo com o teste “log rank” (p< 0,05).
31

Além da toxicidade do ingrediente ativo, a sua velocidade de ação é outro
fator considerado importante durante o processo de seleção de novos inseticidas
para uso em iscas no controle de formigas cortadeiras. Os conceitos de toxicidade
lenta e retardada foram primeiramente utilizados por Stringer et. al. (1964) para a
realização de uma rápida seleção de ingredientes ativos para as formigas lava-pés
e, posteriormente, adaptados por Nagamoto (1998) para as formigas cortadeiras.
Estes conceitos referem-se à seleção de inseticidas de toxicidade lenta, que
causem baixa mortalidade nas primeiras 24 horas e alta mortalidade no final do
experimento. Esta característica é desejada para a eficiência de uma isca, pois
desta forma as operárias poderão sobreviver tempo suficiente após o primeiro
contato com o ingrediente ativo e distribuí-lo por toda a colônia (SANTOS, 2005).
Não há relatos de ensaios de ingestão com rotenona realizados para insetos,
mas em comparação com as curvas de sobrevivência observadas para a
hidrametilnona (BUENO, 2005), a rotenona apresentou resultado semelhante, com
toxicidade lenta.
Neste tipo de bioensaio onde as formigas não possuem outro recurso
alimentar, sendo mantidas exclusivamente com a dieta artificial contendo
ingrediente ativo, sem oportunidade de escolha de alimento, permite o controle de
variáveis para se analisar somente a toxicidade. Entretanto, muitas dúvidas surgem
em relação ao efeito repelente que o ingrediente ativo possa estar causando nas
operárias, impedindo que elas se alimentem. Sendo assim, as formigas morreriam
por falta de nutrientes e não pela ação tóxica do ingrediente ativo (BUENO, 2005).
Os resultados obtidos nos bioensaios de incorporação em dieta artificial
permitiram selecionar as concentrações de rotenona para serem testadas nos
bioensaios seguintes de incorporação em polpa cítrica. Como a polpa cítrica foi
oferecida somente no primeiro dia de experimento, as concentrações consideradas
tóxicas nos bioensaios de incorporação em dieta artificial (50µg/mL, 100µg/mL e
500µg/mL) foram aumentadas em 100 vezes. No entanto, a concentração de
10µg/mL não foi utilizada, pois não apresentou resultados promissores, sendo
substituída por uma concentração de 200µg/mL, intermediária entre as
concentrações 100µg/mL e 500µg/mL.

4.1.1.2. Incorporação em polpa cítrica

A rotenona incorporada em polpa cítrica provocou diminuição na
sobrevivência das operárias de Atta sexdens rubropilosa, com redução mais
acentuada para as concentrações, 20.000µg/g e 50.000µg/g. (Figura 6).
A análise estatística revelouque as concentrações 5.000µg/g, 10.000µg/g,
20.000µg/g e 50.000µg/g apresentaram valores significativos quando comparadas
com o controle polpa + óleo + solvente. O tempo de sobrevivência mediana das
formigas tratadas com rotenona foi reduzido de 23 dias no controle polpa + óleo +
solvente para 17 dias na concentração 5.000µg/g, 2 dias na concentração
10.000µg/g e 1 dia nas concentrações 20.000µg/g e 50.000µg/g. A mortalidade total
das operárias ocorreu no 20º dia para a concentração 20.000µg/g e no 2º dia para a
concentração 50.000µg/g (Tabela 3).
As formigas tratadas com polpa cítrica contendo rotenona apresentaram
sintomas de intoxicação, principalmente dificuldade de locomoção e imobilidade, a
partir do 5º dia de experimento para a concentração 5.000µg/g, a partir do 2º dia
para a concentração 10.000µg/g e a partir do 1º dia para as concentrações
20.000µg/g e 50.000µg/g.
Esse tipo de bioensaio onde as formigas recebem o ingrediente ativo
incoporado em polpa cítrica apresenta o mesmo modo de contaminação que as
iscas tóxicas, pois em ambos os casos, as formigas se contaminam ao manipular o
material, por um período de 24 horas.
A mortalidade das operárias nas concentrações 20.000µg/g e 50.000µg/g foi
muito acentuada, inviabilizando a incorporação da rotenona em iscas nessas
concentrações, pois as formigas morrem muito rápido, o que não permite uma
completa incorporação da isca no jardim de fungo.
Para dar continuidade a esse trabalho, as concentrações intermediárias de
rotenona entre 10.000µg/g e 20.000µg/g devem ser testadas em bioensaios de
incorporação em polpa cítrica para obtenção das curvas de sobrevivência e da
sobrevivência mediana. Após a realização desses testes, será possível selecionar as
concentrações de rotenona para serem incorporadas em iscas e testadas
inicialmente em colônias de formigas cortadeiras mantidas em laboratório e,
posteriormente, em ninhos localizados no campo.
33

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25
0
20
40
60
80
100
Polpa + óleo
Polpa+ óleo+ solvente
Rotenona 5.000µg/g
Rotenona 10.000µg/g
Rotenona 20.000µg/g
Rotenona 50.000µg/g
Dias
S
ob
re
vi
vê
nc
ia
(
%
)

Figura 6 . Curvas de sobrevivência de operárias de Atta sexdens rubropilosa submetidas ao bioensaio
de incorporação em polpa cítrica com rotenona.

Tabela 3 . Mortalidade acumulada e sobrevivência mediana (Md) de operárias de Atta sexdens
rubropilosa submetidas ao bioensaio de incorporação em polpa cítrica com rotenona

Tratamento
% acumulada de mortalidade por dia

Md *
1 2 3 6 8 10 14 17 21 25
Polpa + óleo 0 4 6 16 16 16 24 32 42 58 24a
Polpa + óleo + solvente 0 0 2 6 6 10 16 26 36 56 23a
Rotenona 0,5% (5.000µg/mL) 2 12 14 14 16 20 28 52 58 80 17b
Rotenona 1% (10.000µg/mL) 38 58 60 60 60 62 66 68 72 88 2,0b
Rotenona 2% (20.000µg/mL) 72 96 98 98 98 98 98 98 100 100 1,0b
Rotenona 5% (50.000µg/mL) 92 100 100 100 100 100 100 100 100 100 1,0b

* Letras distintas em relação ao controle indicam diferença significativa de acordo com o teste “log rank” (p< 0,05).

4.2. Diafentiurom

4.2.1. Toxicidade para operárias de Atta sexdens rubropilosa

Os resultados obtidos para cada bioensaio estão apresentados através das
análises gráficas das curvas de sobrevivência e das tabelas que resumem as
porcentagens acumuladas de mortalidade diária, o tempo de sobrevivência mediana
(Md) e a interpretação do teste “log rank”.

4.2.1.1. Incorporação em dieta artificial

O diafentiurom dissolvido em acetona e incorporado na dieta artificial
provocou diminuição na sobrevivência das operárias de Atta sexdens rubropilosa,
com redução mais acentuada para a concentração 100µg/mL. (Figura 7). A análise
estatística revelou que as concentrações 10µg/mL, 50µg/mL, 100µg/mL e 500µg/mL
apresentaram valores significativos quando comparados com o controle acetona. O
tempo de sobrevivência mediana das formigas tratadas com diafentiurom foi de 17
dias para a concentração 10µg/mL, 14 dias para a concentração 50µg/mL, 12 dias
para a concentração 500µg/mL e 10 dias para a concentração 100µg/mL. O controle
dieta pura e o controle acetona apresentaram medianas superiores a 25 dias.
A mortalidade total das operárias ocorreu no 20º dia para a concentração
50µg/mL, no 16º dia para a concentração 100µg/mL e no 17º dia para a
concentração 500µg/mL. Não ocorreu mortalidade total das operárias até o término
do experimento para a concentração 10µg/mL.
As formigas mantidas com dieta artificial contendo diafentiurom dissolvida em
acetona apresentaram sintomas de intoxicação, principalmente, dificuldade de
locomoção e imobilidade (lentidão), a partir do 9º dia de experimento para as
concentrações 100µg/mL e 500µg/mL e a partir do 14º dia para as concentrações
10µg/mL e 50µg/mL.
35

O diafentiurom dissolvido em mistura de acetona e óleo de soja e incorporado
na dieta alimentar também provocou diminuição na sobrevivência das operárias de
Atta sexdens rubropilosa, com redução mais acentuada para a concentração
500µg/mL (figura 8).
A análise estatística revelou que as concentrações 10µg/mL, 50µg/mL,
100µg/mL e 500µg/mL apresentaram valores significativos quando comparados com
o controle acetona e óleo. O tempo de sobrevivência mediana das formigas tratadas
com diafentiurom foi de 10 dias para a concentração 50µg/mL, 9 dias para as
concentrações 10µg/mL e 100µg/mL e 7 dias para a concentração 500µg/mL. O
controle dieta pura e o controle acetona e óleo apresentaram medianas superiores a
25 dias de experimento. As concentrações testadas apresentaram mortalidade total
das operárias no 25º dia para a concentração 10µg/mL, 19º dia para a concentração
50µg/mL, 14º dia para a concentração 100µg/mL e 12º dia para a concentração
500µg/mL.
As formigas mantidas com dieta artificial contendo diafentiurom dissolvido em
acetona e óleo de soja também apresentaram sintomas de intoxicação,
principalmente dificuldade de locomoção e imobilidade (lentidão), a partir do 5º dia
para as concentrações 10µg/mL e 50µg/mL e a partir do 7º dia para as
concentrações 100µg/mL e 500µg/mL.
A ação do diafentiurom nos testes de incorporação em dieta artificial
aumentou com a presença do óleo de soja, sendo que o tempo de sobrevivência
mediana das operárias foi reduzido de 17 dias para 9 dias na concentração
10µg/mL, de 14 dias para 10 dias na concentração 50µg/mL, de 10 dias para 9 dias
na concentração 100µg/mL e de 12 dias para 7 dias na concentração 500µg/mL. O
tempo de mortalidade total das formigas também foi reduzido de 16 dias para 14
dias na concentração 100µg/mL e de 17 dias para 12 dias na concentração
500µg/mL.

Figura 7 . Curvas de sobrevivência de operárias de Atta sexdens rubropilosa submetidas ao bioensaio
de incorporação em dieta artificial com diafentiurom e solvente acetona.

Tabela 4 . Mortalidade acumulada e sobrevivência mediana (Md) de operárias de Atta sexdens
rubropilosa submetidas ao bioensaio de incorporação em dieta artificial com diafentiurom e solvente
acetona

Tratamento
% acumulada de mortalidade por dia
Md *
1 2 3 6 8 10 14 17 21 25
Dieta Pura 0 2 2 2 2 4 8 10 18 32 >25a
Acetona 0 0 0 0 2 4 10 12 16 24 >25a
Diafentiurom 10µg/mL 0 2 2 4 6 8 34 56 82 98 17b
Diafentiurom 50µg/mL 0 0 0 0 8 10 56 82 100 100 14b
Diafentiurom 100µg/mL 0 2 2 6 20 52 98 100 100 100 10b
Diafentiurom 500µg/mL 0 0 0 2 12 36 84 100 100 100 12b

* Letras distintas em relação ao controle indicam diferença significativa de acordo com o teste “log rank” (p< 0,05).

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 2425
0
20
40
60
80
100
Dieta Pura
Acetona
Diafentiurom 10µg/mL
Diafentiurom 50µg/mL
Diafentiurom 100µg/mL
Diafentiurom 500µg/mL
Dias
S
ob
re
vi
vê
nc
ia
(
%
)
37

Figura 8 . Curvas de sobrevivência de operárias de Atta sexdens rubropilosa submetidas ao bioensaio
de incorporação em dieta artificial com diafentiurom e solvente acetona e óleo.

Tabela 5 . Mortalidade acumulada e sobrevivência mediana (Md) de operárias de Atta sexdens
rubropilosa submetidas ao bioensaio de incorporação em dieta artificial com diafentiurom e solvente
acetona e óleo

Tratamento
% acumulada de mortalidade por dia
Md *
1 2 3 6 8 10 14 17 21 25
Dieta Pura 0 0 0 6 8 10 18 24 28 44 >25a
Acetona + óleo 0 4 4 4 4 8 12 16 18 30 >25a
Diafentiurom 10µg/mL 6 16 18 38 48 68 94 98 98 100 9,0b
Diafentiurom 50µg/mL 2 4 4 22 30 56 96 96 100 100 10b
Diafentiurom 100µg/mL 2 6 6 20 36 76 100 100 100 100 9,0b
Diafentiurom 500µg/mL 2 6 14 48 72 92 100 100 100 100 7,0b

* Letras distintas em relação ao controle indicam diferença significativa de acordo com o teste “log rank” (p< 0,05).

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 121314 15 16 1718 19 20 21 22 2324 25
0
20
40
60
80
100
Dieta Pura
Acetona + óleo
Diafentiurom 10µg/mL
Diafentiurom 50µg/mL
Diafentiurom 100µg/mL
Diafentiurom 500µg/mL
Dias
S
ob
re
vi
vê
nc
ia
(
%
)
38

Os resultados obtidos nos bioensaios de incorporação em dieta artificial
permitiram selecionar as concentrações de diafentiurom para serem testadas nos
bioensaios seguintes de incorporação em polpa cítrica, onde as operárias não se
alimentam do material sólido, porém, ao manipulá-lo podem se contaminar (BUENO,
2005). Como a polpa cítrica foi oferecida somente no primeiro dia de experimento,
as concentrações consideradas tóxicas nos bioensaios de incorporação em dieta
artificial (50µg/mL, 100µg/mL e 500µg/mL) foram aumentadas em 100 vezes. No
entanto, a concentração de 10µg/mL não foi utilizada, pois apresentou resultados
semelhantes à concentração 50µg/mL, sendo substituída por uma concentração de
200µg/mL, intermediária entre as concentrações 100µg/mL e 500µg/mL.

4.2.1.2. Incorporação em polpa cítrica

O diafentiurom incorporado em polpa cítrica provocou diminuição na
sobrevivência das operárias de Atta sexdens rubropilosa (Figura 9). A análise
estatística revelou que as concentrações 5.000µg/g e 10.000µg/g apresentaram
valores significativos, quando comparados com o controle (polpa + óleo + solvente).
O tempo de sobrevivência mediana das formigas foi reduzido de 23 dias no controle
polpa + óleo + solvente para 17 dias na concentração 5.000µg/g e 16 dias na
concentração 10.000µg/g, apresentando 88% de mortalidade das operárias na
concentração 5.000µg/g e 90% na concentração 10.000µg/g (Tabela 6). No entanto,
as maiores concentrações testadas (20.000µg/g e 50.000µg/g) não apresentaram
diferença significativa quando comparadas com o controle (polpa + óleo + solvente).
As formigas tratadas com polpa cítrica contendo diafentiurom não
apresentaram sintomas de intoxicação, comportando-se semelhantemente àquelas
do grupo controle.

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25
0
20
40
60
80
100
Polpa + óleo
Polpa+ óleo+ solvente
Diafentiurom 5.000µg/g
Diafentiurom 10.000µg/g
Diafentiurom 20.000µg/g
Diafentiurom 50.000µg/g
Dias
S
ob
re
vi
vê
nc
ia
(
%
)

Figura 9 . Curvas de sobrevivência de operárias de Atta sexdens rubropilosa submetidas ao bioensaio
de incorporação em polpa cítrica com diafentiurom.

Tabela 6 . Mortalidade acumulada e sobrevivência mediana (Md) de operárias de Atta sexdens
rubropilosa submetidas ao bioensaio de incorporação em polpa cítrica com diafentiurom

Tratamento
% acumulada de mortalidade por dia

Md *
1 2 3 6 8 10 14 17 21 25
Polpa + óleo 0 4 6 16 16 16 24 32 42 58 24a
Polpa + óleo + solvente 0 0 2 6 6 10 16 26 36 56 23a
Diafentiurom 0,5% (5.000µg/mL) 6 8 10 14 16 18 30 54 68 88 17b
Diafentiurom 1% (10.000µg/mL) 4 6 6 14 20 24 40 64 82 90 16b
Diafentiurom 2% (20.000µg/mL) 4 8 8 16 20 22 24 34 36 68 24a
Diafentiurom 5% (50.000µg/mL) 2 4 12 20 22 28 30 44 52 66 19a

* Letras distintas em relação ao controle indicam diferença significativa de acordo com o teste “log rank” (p< 0,05).

O diafentiurom é usado no controle do ácaro branco, Polifagotarsonemum
latus, e do ácaro rajado, Tetranychus urticae, pragas das culturas do algodoeiro,
citros, melancia e tomateiro. A aplicação é realizada por meio de pulverizações com
o uso do produto Pólo 500WP (BRASIL, 2010). Além disso, o diafentiuron também é
recomendado para uso contra insetos sugadores, como moscas-brancas (ISHAAYA
et al., 1993).
Apesar dos resultados satisfatórios de toxicidade do diafentiurom para as
operárias de Atta sexdens rubropilosa apresentados no presente trabalho para os
bioensaios de incorporação em dieta artificial, o resultado encontrado no bioensaio
de incorporação em polpa cítrica não apresentou a mesma eficiência.
Pelo fato da dieta artificial contendo diafentiurom ser o único recurso alimentar
oferecido às operárias nos bioensaios de incorporação em dieta, possivelmente o
ingrediente ativo possa ter causado efeito repelente nas formigas, impedindo que
elas se alimentassem. Para dar continuidade a esse trabalho, um novo bioensaio de
incorporação do diafentiurom em dieta artificial deve ser realizado para se observar
o efeito da repelência através da filmagem do experimento durante as primeiras 48
horas do oferecimento da dieta. Caso a replência do diafentiurom seja comprovada,
esse ingrediente ativo não deverá ser indicado para uso na metodologia de iscas
para o controle de formigas cortadeiras. Contudo, se o diafentiurom não apresentar
repelência às operárias, novas formulações com esse ingrediente ativo devem ser
desenvolvidas com intuito de atingir o alvo de ação do inseticida nas formigas.

5. CONCLUSÕES

♦ O óleo de soja potencializa a ação dos ingredientes ativos rotenona e diafentiurom.

♦ A rotenona incorporada em dieta artificial apresenta toxicidade lenta à Atta
sexdens rubropilosa, causando baixa mortalidade das operárias nas primeiras 24
horas e alta mortalidade a partir do 10º dia de oferecimento.

♦ Novos bioensaios de incorporação em polpa cítrica devem ser realizados com a
rotenona com intuito de selecionar as concentrações entre 1% e 2% para serem
incorporadas em iscas.

♦ O ingrediente ativo diafentiurom apresenta baixa toxicidade às operárias de Atta
sexdens rubropilosa quando incorporado em polpa cítrica.

♦ Novos experimentos com o ingrediente ativo diafentiurom incorporado em dieta
artificial devem ser realizados para observar se há efeito de repelência as
operárias de Atta sexdens rubropilosa.

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