Fisiopatologia da Reprodução de Machos - Aspectos Físicos e Morfológicos do Ejaculado

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ASPECTOS FÍSICOS E 
MORFOLÓGICOS DO EJACULADO 
 
AVALIAÇÃO DE ASPECTOS FÍSICOS DO SÊMEN 
 
VOLUME 
 
VARIA DE ACORDO COM: 
- Técnica de coleta; 
- Espécie; 
- Raça; 
- Manejo; 
- Alimentação. 
 
- Sangue no ejaculado > por ter pH diferente, pode dar 
problema. 
 
 
 
- Cão ejacula em 3 frações > primeira é descartada, segunda 
é mais concentrada, terceira tem volume elevado. 
 
ASPECTOS GERAIS: COR, CHEIRO ETC. 
 
COR: 
- Esbranquiçado; 
- Branco; 
- Marfim; 
- Amarelado ou amarelo citrino; 
- Esverdeado > contaminação, bactérias no sêmen; 
- Sanguinolento. 
 
- Ruminantes > esbranquiçado, branco, marfim 
(principalmente em carneiros – branco denso por conta da 
concentração), amarelado ou amarelo citrino (bovinos). 
 
ASPECTO: 
- Cremoso ou marmóreo; 
- Leitoso; 
- Opaco ou opalescente > muito diluído, ou animal muito 
jovem (concentração espermática menor); 
- Aquoso > muito claro, oligospermia (fisiológica ou 
patológica). 
 
- Associações empíricas com concentração-temerário! 
 
Touro: 
1. Cremoso - mais de 1 milhão de Sptz/mL; 
2. Leitoso - 500 mil a 1 milhão de Sptz/mL; 
3. Opaco - 200 mil a 500 mil Sptz/mL; 
4. Aquoso - < 200 mil Sptz/mL. 
Ovinos: 
1. Cremoso espesso - 2,5 milhões Sptz/mL; 
2. Cremoso - 2,0 milhões Sptz/mL; 
3. Cremoso fino - 1,0 milhão Sptz/mL; 
4. Acinzentado - 100 mil Sptz/mL; 
5. Aquoso - < 50 mil Sptz/mL. 
 
TURBILHONAMENTO 
 
- Motilidade de massa é resultado da associação entre 
concentração e motilidade; 
- Microscopia óptica comum objetiva com aumento de 4 a 
10x; 
→ Se ocular for de 10x = aumento de 100x. 
- Uma gota sobre lâmina; 
- Preferência: lâmina aquecida a 37°C. 
 
0 Ausência de turbilhão 
+ Movimento lento, ondas rasas com áreas densas 
ocasionais 
++ Movimento moderado, ondas ainda rasas, início de 
aparecimento de aglomerações de sptz 
+++ Movimento ativo, ondas nítidas e aglomerações ou 
turbilhões com aparecimento de algumas áreas 
escuras a negras 
++++ Movimento ativo e forte, ondas pronunciadas 
+++++ Movimento ativo e intenso, ondas com 
contracorrente e formação de áreas negras densas 
 
MOTILIDADE 
 
- Microscopia + avaliação subjetiva; 
- Porcentagem de espermatozoides móveis; 
- Uma gota de sêmen entre uma lâmina (pré-aquecida a 
37°C) e uma lamínula; 
- Microscopia óptica comum > aumento de 100 ou 400x; 
- 200x ocular de 5x e objetiva de 40x. 
 
 
Fotomicrografia. 
 
AVALIAÇÃO COMPUTADORIZADA – CASA: 
- Microscópio trinocular de contraste de fase; 
- Platina aquecedora; 
- Computador de alta velocidade; 
- Câmera preto e branco; 
- Software próprio para análises; 
- Monitor de vídeo. 
 
- Contagem, percentual e concentração (milhões/mL) do 
total de espermatozoides, os móveis e os progressivos; 
- VAP Média, VSL, VCL, ALH, BCF, STR, LIN, elongação e área; 
- Distribuição dos espermatozoides em: rápidos, médios, 
lentos ou estáticos. 
 
 
 
SPERM CLASS ANALYSER – SCA: 
- Motilidade e concentração, contraste de fase negativo. 
 
 
Varrão x salmão. 
 
VIGOR 
 
- Motilidade progressiva individual; 
- Intensidade de deslocamento retilíneo da célula no campo 
do microscópio; 
- Escala de 0 a 5; 
- Realizada junto com a motilidade. 
 
VIVOS – MORTOS: 
- Uma gota de sêmen + 2 gotas de corante eosina-nigrosina, 
eosina pura associada ao citrato de sódio ou fast-green; 
- Ler em objetiva de 40, sob imersão; 
- Célula viva > não se cora. 
 
PREPARAÇÃO DA AMOSTRA PARA ENVIO AO LABORATÓRIO 
 
Meios de conservação: 
- Solução formol-salina a 10%; 
- Solução de DMPBS a 4% de formol; 
- Gluteraldeido. 
 
CONCENTRAÇÃO ESPERMÁTICA 
 
1. Determinação pelo aspecto do ejaculado; 
2. Câmara de newbauer ou hematimétrica; 
3. Fotocolorimetria ou espectrofotômetro. 
 
- Câmara de Newbauer ou Hematimétrica: 
→ Diluição prévia de volume conhecido de sêmen em 
meio de conservação previamente conhecido; 
→ 1mL --------- 20 µL - 1/50; 
→ 2mL --------- 20 µL - 1/100; 
→ 4mL --------- 20 µL - 1/200; 
→ 8mL --------- 20 µL - 1/400. 
- Preencher a câmara e deixar em repouso por 5 minutos. 
 
 
 
 
 
- Conta cabeças de espermatozoides, e não caudas; 
- Faz média da contagem; 
- Se na contagem houver diferenças dos dois lados superior 
a 10%, faz tudo de novo. 
 
 
 
- Microscopia de luz sob aumento de 100x ou 400x; 
- Contagem de cinco quadrados em cada lado da câmara; 
- Se houver diferença entre os dois lados da câmara > 10%, 
faz-se nova preparação da câmara e recontagem; 
- Somente cabeças espermáticas são contadas. 
 
1
200
 × 
1
5
 × 
1
10.000
 = 
1
10.000.000
 
 
 
1
200
 = 
0,02 𝑚𝑙 𝑑𝑒 𝑠ê𝑚𝑒𝑛
4 𝑚𝑙 𝑑𝑒 𝑠𝑜𝑙𝑢çã𝑜 𝑓𝑜𝑟𝑚𝑜𝑙−𝑠𝑎𝑙𝑖𝑛𝑎
 
 
1
5
 = 25 quadrados em sêmen fresco contam-se cinco em diagonal > 
equivale a 1/5 da câmara. Se contar os 25 quadrados, equivalerá a 
um inteiro (25/25). 
 
1
10.000
 = Volume da câmara considerando a área de 25 As = 1mm² 
com altura de 0,1mm > Volume = 0,1mm³ = 0,0001 cm³ = 
1/10.000ml. 
 
1
10.000.000
 = Contagem da câmara x 10 x 106 
 Contagem 20 = 20 x 10 x 106 = 200 x 106 sptz/mL 
 
- Cada sptz contado na câmara equivale a 10 milhões de 
sptz/ml, mas isto é feito em sêmen cujas características 
estão dentro de um padrão normal (numa determinada faixa 
de concentração); 
- Em sêmen de baixa concentração usa-se contar os 25 
quadrados para diminuir o erro. 
- Então a fórmula fica: 
 
1
200
 × 
1
10.000
 = 
1
2.000.000
 
 
- Cada espermatozoide equivalerá a 2 milhões/mL; 
- Concentração/mL → Contagem = 20 x 2 x 106 = 40 x 106 
sptz/mL; 
- Volume do ejaculado= 10 ml; 
- Concentração total = concentração/mL x volume do 
ejaculado = 40 x 106 x 10mL= 400 x 106 sptz totais. 
 
- Dependendo da diluição (1/100, 1/200 etc.), concentração 
fica diferente; 
- Necessário muita precisão quando se trabalha com sêmen 
congelado. 
 
ESPÉCIE VOLUME CONCENTRAÇÃO/ML 
JOVEM/ADULTO 
(X 10 6/ML) 
DILUIÇÃO 
Suínos 150-200 200-300 1/100 ou 1/200 
Equinos 60-100 150-300 1/50 ou 1/100 
Cães 2,5-3,0 200-800 (2ª fração) 1/50 ou 1/100 
Bovino 5-9 800-2.000 1/100 ou 1/200 
Caprinos 
e ovinos 
0,8-1,0 2.000-3.000 1/100 ou 1/200 
Galo 0,2-0,5 3.000-7.000 1/100 e 1/400 
 
MORFOLOGIA ESPERMÁTICA 
 
- Não existe exame andrológico sem análise de morfologia 
espermática > a não ser que haja obstruções ou outras 
razões que justifiquem não coletar a amostra; 
- Permite interpretação mais precisa do quadro clínico do 
animal; 
- Testículo pode estar menor/anormal, mas na morfologia as 
suspeitas podem ser infundadas > necessidade de coletar; 
- Confirma a origem de algumas alterações patológicas que 
podem acontecer no testículo, epidídimo ou glândulas 
acessórias > permite identificar efeitos e consequências 
deletérias que não tem a ver com a reprodução. 
 
- Análise morfológica de reprodutores a campo é mais eficaz 
do que a análise clínica inicial; 
- Ao olhar a célula espermática, é necessário conhecer o 
padrão da espécie em que irá trabalhar. 
 
 
 
 
 
 
 
- Cabeça > somente núcleo (sem citoplasma); 
- Peça intermediária = microtúbulos envoltos em 
mitocôndrias > única fonte de energia que a célula 
espermática tem para realizar o movimento > pode ser mais 
longa ou curta conforme as espécies; 
- Cauda > permite o movimento, auxiliando no transporte > 
pode ser extremamente longa em algumas espécies (em 
felinos, por exemplos). 
 
- Características mudam conforme as espécies; 
- Cauda muito longa tem alta probabilidade de causar 
contornos em curva; 
- Demanda de fertilização depende da espécie > animais 
monogâmicos tem nível de exigência diferente de animais 
que fazem diferentes montas em várias fêmeas; 
- Classificações de patologias: 
→ Defeitos primários > origem testicular; 
→ Defeitos secundários > origem epididimária; 
→ Defeitos terciários. 
- Uma estrutura morfológica constante em determinada 
espécie pode não ter impacto na fertilidade, se a espécie 
mantém a fertilidade natural dela. 
 
CÉLULA ESPERMÁTICA 
 
 
ACROSSOMO: 
- Algumas espécies possuem ou não crista no acrossomo; 
- Pode ter descolamento, rugosidade, perda de material.PEÇA INTERMEDIÁRIA: 
- Mamíferos: composta por 9 pares de microtúbulos 
interligados por estruturas de proteína + 2 pares de 
microtúbulos centrais; 
- Envolto por um grupo de mitocondrias; 
- Deslizamento entre os microtúbulos > fazem o movimento 
da cauda; 
- Microtúbulos se afilam no final > 1 par de microtúbulos 
central, com os outros unidos entre si; 
- Ruptura dessas estruturas levam a perda total ou 
irregularidade do movimento. 
 
 
 
 
 
CABEÇA DO ESPERMATOZOIDE: 
 
 
 
- Linha equatorial = onde se insere o acrossomo > forma 
crista apical (densa em ovinos, ausente em bovinos); 
- Material genético do macho na parte de dentro > se possui 
alterações, podem refletir em características de alterações 
morfológicas (anormalidades estruturais importantes). 
 
AVALIAÇÃO DA MORFOLOGIA ESPERMÁTICA 
 
POR LÂMINA CORADA: 
- Algumas patologias não são visualizadas direito > 
necessário ter multifuncionalidade para entender se há 
comprometimento/é artefato ou não. 
 
1. Após coleta de sêmen > preparação de esfregaços: 
- Preferente > lâminas aquecidas; 
- Lâmina posicionada em ângulo de 45 graus; 
- Puxar o sêmen. 
 
2. Métodos de coloração: 
- Corante de Williams (fucsina – eosina); 
- Cerovsky = Vermelho – congo; 
- Karras. 
 
3. Microscopia de campo claro: 
- Aumento de 1000-2000 vezes sob imersão. 
 
 
 
- Contar 200 células > não conta todos os defeitos > 
geralmente conta os de forma e de tamanho. 
 
Defeitos contados - cabeça: 
- Subdesenvolvido; 
- Cabeça isolada patológica > não conta cabeça isoladas 
normais; 
- Estreito na base; 
- Piriforme > associado à condição de perda de material 
genético; 
- Pequena anormal; 
- Contorno anormal > achatadas, dobradas, com perda de 
material; 
- Formas teratológicas > duplicidade de cabeça, peça ou 
caudas. 
Defeitos menores – menor impacto: 
- Cabeça delgada > célula se afila, comparada as outras; 
- CGLP (cabeça do espermatozoide Curta, Gigante, Larga ou 
Pequena normal); 
 
Defeitos de inserção da peça intermediária na cabeça: 
- Abaxial > peça intermediária inserida lateralmente (normal 
em equinos) 
- Retroaxial > peça intermediária retorna/passa sobre a 
cabeça; 
- Oblíquo. 
 
 
Estrutura piriforme (maior e afila inteira, como uma pêra) x cauda 
enrolada (dag defect). 
 
 
Normal x cauda fortemente dobrada e caudas grandes. 
 
PREPARAÇÃO ÚMIDA: 
- Material preparado em campo: turvar ligeiramente > 1 mL 
de formol salina a 10% (formol puro diluido 100 mL de 
formol para 900 mL de solução salina) ou solução de 
gluteraldeído, ligeira/aquecidas > 
- Solução deve manter um pH próximo do ejaculado (6,8 - 
7,2) > se está muito ácido ou básico, pode dar problemas de 
cauda e edema de acrossomo > osmolaridade da solução 
estará inadequada; 
- Osmolaridade adequada = 3; 
- Excesso de material > muitos sobrenadantes; 
- Preparação: uma gota entre lâmina e lamínula; 
- Microscopia de contraste de fase ou interferência; 
- Aumento de 1000 a 1250xx; 
- Contar entre 200 a 400 células. 
 
 
Defeitos contados: 
- Acrossomo: 
→ Edema (defeito terciário, pode acontecer pelo meio 
de concentração com osmolaridade inadequada ou 
pelo projeto de congelamento inadequado); 
→ Rugoso; 
→ Knobbed (perda de material); 
→ Vesiculoso; 
→ Destacamento do acrossomo (defeito terciário, 
decorrente do processo de congelamento). 
- GCP (Gota Citoplasmática Proximal) > citoplasma aderido 
na peça intermediária, que normalmente sai no trânsito 
espermático > quando não sai e fica proximal, é considerada 
uma alteração de grande impacto na fertilidade, reflete 
alteração bioquímica epididimária, ou pode ser uma 
alteração no testículo (degeneração testicular, por exemplo) 
> considerada um defeito maior; 
- Pouch formation (diadema ou colar de pérolas) > problema 
de condensação do DNA, começa a formar halos; 
- Peça intermediária saca-rolha (corckscrew) > mitocôndrias 
com falhas e irregularidades; 
- Pseudogota > resíduo de citoplasma preso lateralmente na 
cauda (defeito de cauda); 
- Outros defeitos de Peça Intermediária> PI fraturada, 
Stump, PI disfribilada (centríolos se separam), PI desnuda; 
- Dag defect > defeito de peça intermediária ou de cauda? 
- CFD/CFE (Cauda Fortemente Dobrada e Cauda Fortemente 
Enrolada); 
- Acrossoma desprendido; 
- GCD (Gota Citoplasmática Distal) > resíduo de citoplasma 
preso em toda PI/cauda; 
- CDS/CES (Cauda Dobrada Simples e Causa Enrolada 
Simples) > defeito menor > pode ter gota anexa; 
- Cabeça isolada normal > quando não há peça nenhuma 
(defeito simples). 
 
 
A = cabeça normal com gota distal; B = knobbed. 
 
 
C = knobbed; D = Dag defect. 
 
DEFEITOS DE CABEÇA: 
 
Normal. 
 
Knobbed e suas variações. 
 
Piriforme, estreito na base e variação (piriforme). 
ACROSSOMA: 
 
Defeito maior/primário: 
 
 
Acrossoma ausente, knobbed, acrossoma vesiculoso, acrossoma 
rugoso. 
 
 
A = knobbed, edema de acrossomo; B = knobbed com peça 
intermediária oblíqua. 
 
 
 
Knobbed. 
 
Delgado: 
 
Célula gigante x célula normal. 
 
Piriforme/delgado de base: 
 
Piriforme x estreito na base. 
 
Pouch formation (diadema ou colar de pérolas). 
 
DEFEITOS DE CAUDA: 
 
Dobrada com gota, dobrada simples, fortemente dobrada. 
 
 
Dobrada dupla, fortemente enrolada, enrolada porção terminal. 
 
 
Encurvada (choque osmótico), enrolada na cabeça, fortemente 
enrolada. 
 
 
Cauda enrolada simples x cauda fortemente enrolada. 
 
DEFEITOS NA PEÇA INTERMEDIÁRIA: 
 
Edema e desnuda x dag defect. 
 
 
Dupla implantação de PI/Knobbed x PI fraturada. 
LOCALOZAÇÃO DAS MORFOLOGIAS ESPERMÁTICAS 
 
CABEÇA: 
- Acrossoma; 
- Cabeça piriforme, delgada, CGLP; 
- Isolada normal/anormal; 
- Pouch formation, crateras, diademas; 
- Contorno anormal; 
- Cabeças duplas (formas teratológicas); 
- Inserção abaxial. 
 
CAUDA - PI: 
- Colo irregular; 
- Dobrada (com ou sem gota); 
- Enrolada; 
- Parcial ou totalmente desnuda; 
- Corkscrew (saca-rolha); 
- Espessada ou edemaciada; 
- Irregular. 
 
CAUDA - PEÇA PRINCIPAL: 
- CDS/CFD; 
- CFE. 
 
OUTRAS ASSOCIADAS À CAUDA: 
- Pseudogotas; 
- GCP/GCD; 
- Abaxial/Retroaxial; 
- Duplas (formas teratológicas); 
- Cauda enrolada na cabeça. 
 
DEFEITOS PRIMÁRIOS E SECUNDÁRIOS 
 
PRIMÁRIOS (ORIGEM TESTICULAR - ESPERMATOGÊNESE): 
- Cabeça piriforme, delgada, CGLP; 
- Isolada normal; 
- CFE; 
- Formas duplas (formas teratológicas); 
- Inserção abaxial; 
- Defeitos de PI. 
 
SECUNDÁRIOS (ORIGEM EXTRA-GONADAL-EPIDIDIMÁRIA): 
- Isolada normal; 
- GCP; 
- GCD; 
- CDS; 
- Acrossoma desprendido; 
 
TERCIÁRIOS (ADQUIRIDOS POR MANIPULAÇÃO): 
- PI e caudas enrugadas; 
- PI em curva; 
- Destacamento de acrossomo. 
 
ALGUNS DEFEITOS PODEM SER PRIMÁRIOS E SECUNDÁRIOS: 
- Ex.: GCP > pode ser originada no testículo – decorrente de 
uma má formação da célula espermática (impede 
deslizamento) > originada de uma disfunção epididimária; 
- Cabeça isolada > primária pois se origina de um defeito da 
inserção da PI no colo > secundária devido a uma função 
epididimária anormal. 
 
 
DEFEITOS MAIORES E MENORES 
 
- Relaciona se defeitos maiores com a infertilidade e 
menores como aqueles que não tem sido diretamente 
associado a infertilidade; 
- Alguns defeitos menores são estruturais e podem tornar a 
fertilização impossível; 
- Não deve utilizar as mesmas comparações para animais de 
espécies diferentes. 
 
DEFEITOS MAIORES (BLOM, 1973): 
- Acrossoma; 
- Estreito na base; 
- Cabeça isolada patológica; 
- Subdesenvolvido; 
- Piriforme; 
- Cauda dobrada com gota; 
- Cauda enrolada na cabeça; 
- CFD/CFE; 
- Coloração anormal; 
- Contorno anormal; 
- Pequeno anormal; 
- Pouch formation; 
- Peça intermediária em saca-rolha (corckscrew); 
- Outros defeitos de PI – dag defect; 
- Pseudogota; 
- Formas teratológicas; 
- GCP. 
 
DEFEITOS MENORES (BLOM, 1973): 
- Cabeça delgada; 
- CGLP (cabeça curta, gigante, larga ou pequena, normal); 
- Abaxial, retroaxial ou oblíquo; 
- Acrossoma desprendido; 
- GCD; 
- CDS/CES (inclusive com gota anexa); 
- Cabeça isolada normal. 
 
DEFEITOS COMPENSÁVEIS X NÃO COMPENSÁVEISCOMPENSÁVEIS: 
- Ao aumentar a concentração espermática, diminui o 
impacto na fertilidade. 
 
- Espermatozoides anormais, que não são transportados ao 
oviduto; 
- Ou espermatozoides que são transportados, mas que não 
são capazes de penetrar a zona pelúcida; 
- Há aumento da possibilidade de fertilização com aumento 
da concentração espermática > nível de interpretação deve 
ser muito cuidadoso. 
 
NÃO COMPENSÁVEIS: 
- Não possui grande impacto na concentração > fertilidade é 
mantida; 
- Apesar dos defeitos, chegam até o oviduto, competem e 
podem fertilizar. 
 
- Ex.: Pouch formation: espermatozoides anormais que são 
transportados ao oviduto, são capazes de penetrar a zona 
pelúcida, desencadear a reação acrossomal e não podem ser 
compensados por aumento da concentração espermática. 
QUESTÕES 
 
1. Para enviar ao laboratório amostra de sêmen para 
análise de morfologia espermática de um carneiro, a 
diluição correta é: 
a) 10 microlitros de solução de DMBS a 4% de formol em 1mL 
de sêmen. 
b) 1mL de ejaculado em 1mL de solução de DMBS a 4% de 
formol. 
c) Pipetar gotas de sêmen até a solução conservante turvar. 
d) Ponha 1 gota de sêmen em uma gota de solução 
conservante sobre a lâmina identificada e realize um 
esfregaço. 
e) 20 microlitros de solução de DMBS a 4% de formol em 4 
ou 8mL de sêmen. 
 
2. A diluição de 20 microlitros do ejaculado em 4mL de 
solução conservante corresponde a que proporção de 
diluição? 
R: 
 
3. O testículo de um touro com 6cm de largura e 12 cm de 
comprimento, seria considerado: 
R: 
 
4. Os testículos de um carneiro apresentam largura = 8cm e 
comprimento = 10cm. Qual a forma dos testículos? 
R: 
 
5. Um garanhão apresentou uma lesão de coluna e não 
consegue mais realizar a ereção. Qual alternativa de coleta 
de sêmen seria viável? 
R: 
 
6. Calcule a concentração espermática/ml e a total: 
Cão: Lava Jato; Raça: Rotweiller 
Volume do ejaculado = 1,5mL 
Motilidade = 50%; vigor = 3; turbilhonamento = 2 
Diluição da amostra para contagem espermática: 1/50 
Contagem de toda a câmara de Neubauer: 
- Lado superior da câmara: 120 espermatozoides; 
- Lado inferior da câmara: 116 espermatozoides. 
R: 
 
 
 
 
7. Calcule a concentração espermática/ml e a concentração 
total deste touro: 
Touro: Urapuru; Raça: Nelore; Idade: 6 anos 
Volume do ejaculado= 7,5mL 
Motilidade = 50%; vigor = 3; turbilhonamento = 2 
Diluição da amostra para contagem espermática: 1/100 
Contagem de 1/5 da câmara de Neubauer: 
- Lado superior da câmara: 220 espermatozoides; 
- Lado inferior da câmara: 216 espermatozoides. 
Avalie a preparação e corrija se necessário. 
R: