Coloração de Gram - Aula 09

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Bacteriologia - Aula 09/05 - Laboratório 
COLORAÇÃO DE GRAM 
A coloração de gram tem como objetivo diferenciar e 
classificar as bactérias através de suas características 
morfotintoriais. Ex: cocos, bacilos, Gram-positivas ou 
Gram-negativas. 
DIFERENCIAÇÃO DE BACTÉRIAS 
A diferenciação entre bactérias Gram-positivas e 
Gram-negativas é realizada por meio da técnica de 
coloração de Gram. A seguir estão os passos básicos 
para a diferenciação: 
Esfregaço 
1- Pega uma lâmina 
2- Coloca uma gota de solução salina 
3- Encosta a alça bacteriológica na colônia de 
bactérias 
4- Fazer um esfregaço na lâmina em movimentos 
circulares do centro para extremidade. 
5- Fixação: aproximar a lâmina à chama até secar 
a mistura da solução salina com a amostra 
bacteriana. 
 
Coloração da lâmina 
1. Prepare uma lâmina de vidro com a amostra 
bacteriana fixada. (Esfregaço) 
 
2. Aplique o corante de cristal violeta na lâmina 
de vidro. O corante de cristal violeta cora 
todas as células bacterianas presentes. 1’ 
 
3. Em seguida, adicione o agente de fixação, 
o lugol, para ajudar a estabilizar o corante nas 
células. 1’ 
 
4. Realize a etapa crítica da diferenciação: 
descoloração. Neste passo, um agente 
descolorante, o álcool acetona, é aplicado 
para remover o corante das bactérias. 
 
 - As bactérias Gram-positivas retêm o corante de 
cristal violeta e mantêm sua cor púrpura após a 
descoloração. 
 - As bactérias Gram-negativas perdem o corante 
durante a descoloração e ficam incolores ou 
transparentes. 
 
5. Finalmente, aplique um corante de contraste, 
como a fucsina, para corar as bactérias Gram-
negativas que perderam o corante. Essas 
bactérias aparecerão coradas de rosa ou 
vermelho. 
 
 
Após a coloração de Gram, é possível observar as 
características de cor das células bacterianas ao 
microscópio. As bactérias Gram-positivas aparecerão 
de cor roxa ou azul, enquanto as bactérias Gram-
negativas aparecerão de cor rosa ou vermelha. 
Essa diferenciação é possível devido à diferença na 
estrutura das paredes celulares das bactérias Gram-
positivas e Gram-negativas. 
As bactérias Gram-positivas têm uma camada espessa 
de peptidoglicano em suas paredes celulares, 
enquanto as bactérias Gram-negativas têm uma 
camada mais fina de peptidoglicano, envolta por uma 
membrana externa composta por lipopolissacarídeos.