Apostila módulo 2 (1) cromatografia

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Apostila
Módulo 2
Maria de Lourdes M. de Souza 
Doutora em Química de Produtos Naturais
Monalisa Santana C. de Jesus
Mestre em Química
2Apostila - Módulo 2
Todos os direitos reservados.
A reprodução não autorizada desta publicação, no todo ou em parte, 
constitui violação dos direitos autorais (Lei nº 9.610).
© Embrapa, 2021.
Fase Estacionária
Alta pureza
Inerte 
Responsável em reter o analito
Fases Estacionárias (FE) 
Fases Móveis (FM) 
Módulo 2
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Fases Estacionárias
Cromatografia Líquida em coluna
Fase normal (Polar)
 Sílica 
 Alumina
Fase reversa (90%) 
Suporte modificado 
quimicamente
 Octadecilsilano (C-18)
 Octilsilano (C-8) 
 Ciano
 Amino
 Fenil
Troca iônica
 Aniônica (-NR3
+
, -NHR2
+)
 Catiônica (-SO3
- ,-CO2
-)
Exclusão
 Gel de poliestireno
 Sephadex
Outras
 Imunoafinidade: enzimas e antígenos; 
interação seletiva com proteínas e 
anticorpos 
 Quiraiscarbonos assimétricos (C*) 
para interagir seletivamente com 
compostos quirais
Fase normal x Fase reversa
 fase estacionária polar;
 fase móvel apolar
(n-alcanos, clorofórmio 
acetato de etila);
 solutos neutros;
 mecanismo retenção: 
adsorção;
  polaridade do soluto  tR.
 fase estacionária apolar;
 fase móvel polar (tampões, 
água, metanol, acetonitrila, 
THF); 
 solutos apolares, não-iônicos;
 mecanismo retenção: interações 
apolares com radicais da 
coluna;
  polaridade do soluto  tR .
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Fases Estacionárias da 
Cromatografia Gasosa
Sólido adsorvente ou filme de um líquido pouco volátil, 
suportado sobre um sólido inerte ou sobre a parede do tubo.
 Coluna empacotada
 Coluna capilar 
Fases Estacionárias Nome Comercial
Dimetilsiloxano BP1, DB1, HP1, SE30, CPSIL5
5% Difenildimetilsiloxano BP5, DB5, HP2, SE54
14% Cianopropilfenildimetilsiloxano BP10, DB701, OV1701
50% Trifluorpropilmetilsiloxano OV210, DB210, QF1
50% Cianopropilfenildimetilsiloxano BP225, OV225
Polietileno glicol BP20, DB-WAX, CARBOWAX
Cromatografia 
em Camada Delgada (CCD)
Cromatografia Líquida Planar: 
Fase móvel - líquida
Fase estacionária - sólida
Fase estacionária para CCD:
 Poliamida
 C - 18 em placa de vidro ou de alumínio
 Sílica (SiO2) 
 Alumina (Al2 O3)
Geralmente precisam ser ativadas de 105 a 110oC em estufa 
de 30 a 60 min.
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Fase Móvel
 Responsável por “empurrar” o analito (promove a 
dessorção do analito da fase estacionária); 
 Possui alta pureza;
 É inerte (CL – eluente, deve dissolver o analito);
 Não deve dissolver, reagir ou degradar a Fase 
Estacionária.
Fases Móveis
Cromatografia Líquida
 H2O (Ultra Pura)
 Ácido Acético (HAc)
 Metanol (MeOH)
 Etanol
 Isopropanol
 Acetonitrila
 Acetona
 Acetato de Etila, Éter
 Tetraidrofurano (THF)
 Clorofórmio
 Diclorometano
 Hexano
MISTURAS (homogêneas)
DE SOLVENTES:
 Isocrático - a proporção 
dos solventes é mantida 
durante toda a corrida.
 Gradiente - a proporção 
dos solventes varia 
durante toda a corrida.
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Fases Móveis 
Cromatografia Gasosa
 H2
 N2
 He
 Ar
 O2
 Ne
 CO2
 CO
Cromatografia com Fluido supercrítico
CO2 ; N2O; SF6; Xe; MeOH.
A variação da temperatura é responsável pela 
dessorção do soluto (rampas de temperatura).
Referências
BERGQUIST, C. W. L C School: Escola de Cromatografia Líquida waters. 
Waters Commercial: 1999. Apostila do curso avançado de 40h em 
Cromatografia Líquida de Alta Eficiência.
COLLINS, C.H. et al. (coord.) Fundamentos de Cromatografia, Editora 
Unicamp, 5a ed., Campinas, 2006, p. 24.
PACHECO, S. et al. História da Cromatografia Líquida. Revista Virtual de 
Química, v. 7, n. 4, p. 1225-1271, 2015. Disponível
em:http://static.sites.sbq.org.br/rvq.sbq.org.br/pdf/v7n4a13.pdf. Acesso em: 21 
set. 2020.
INTRODUÇÃO aos métodos cromatográficos. Disponível em: 
https://www.slideshare.net/IsabelleMacedo/cromatografia-64106182. Acesso 
em: 19 fev. 2020. 130 slides. slide 45. online.
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Equipe responsável 
Embrapa Agroindústria de alimentos
Nome Atribuição
Maria de Lourdes Mendes de Souza Gestora do projeto do curso, Conteudista, 
Diagramadora e Produtora de vídeo
Monalisa Santana Coelho de Jesus Conteudista e Diagramadora
Rosemar Antoniassi Conteudista e Revisora de texto
André Luis do Nascimento Gomes Programação Visual, Gestor da Marca e 
Comunicação
Natalia Souza Merces Revisora de texto, Suporte técnico e
Comunicação
Luciana Leitão Mendes Revisora de texto e Comunicação
Kadijah Suleiman Jaghub Comunicação
Camila Stephan Marques da Silva Designer Instrucional
Leandro Goncalves de Souza Leão Suporte técnico
Celma R. M. de Araújo Normalizacão bibliográfica .