ANÁLISE DE EXAMES LABORATORIAIS - OPTATIVA

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Microbiologia & Diagnóstico laboratorial 
Microscopia
Cultivo
Sorologia
Biologia Molecular
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 Diagnóstico Direto: pesquisa direta dos agentes infecciosos.
Diagnóstico Indireto: pesquisa de anticorpos antígenos
específicos. Possui menos especificidade por posibilidade de
imunidade cruzada.
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Referências: TORTORA, Gerard J.; FUNKE, Berdell R.; CASE, Christine L.. Microbiologia. 10. ed.
Porto Alegre: Artemed, 2012. / HOLANDA, Cecília Maria de Carvalho Xavier; ARIMATEIA,
Dayse Santos; MOTTA NETO, Renato. Manual de bacteriologia e de enteroparasitos. Natal:
Edufrn, 2017.
3. Cada agente tem suas especificdades;
4.Podem ser investigados por amostras como
sangue, urina, fezes e LCR.
Os principais agentes são bactérias,
vírus e fungos;
Os agentes podem ser patogênico ou
não;
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2.
OBS. 1: Tais métodos devem ser
associados à técnicas de
isolamento dos agentes
microbiológicos e podem ser
associados entre si para
aumentar eficiência.
Métodos de diagnóstico microbiológico:
Aspectos gerais:
Quanto às técnicas utilizadas:
+ utilizados, + simples, + baratos.
+ eficientes, +rápidos, indicados
para patógenos não cultiváveis.
OBS. 2: O método de
cultura permite guardar
amostras para estudo
futuro.
Quanto ao tipo de diagnóstico:
Diagnóstico microbiológico das bactérias
Tamanho: 0,5-1,0 um por 2-5 um na maioria.
Formas:
 Cocos
Bacilos
Espirilos
Arranjos:
Diplococos;
Diplobacilos;
Tétrades;
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c.
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a.
b.
c.
Em todas: Citoplasma, ribossomos, membrana plasmática e nucleoide de DNA;
Em algumas espécies:
Cápsula: polissacarídeo ou polipeptídeos para proteção e aderências.
Flagelos: monotríquio, peritríquio, lofotríquio, anfitríquio.
Fímbrias: composição proteica de pilina para aderir ou transferir DNA.
Parede celular: NAG + NAM + cadeias laterais e cruzadas de aminoácidos.
 Gram positivos: peptídeoglicano espesso + ácido teicoico;
Gram negativos: peptídeoglicano fino + membrana externa de LPS.
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Processo saúde-doença;
Indústria farmacêutica e alimentícia;
Biotecnologia;
Agricultura e biorremediação.
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Participam de:
Estruturas:
Isolamento importante para:
Bactérias:
Morfologia variada:
d. Sarcinas;
e. Estreptococos;
f. Estafilococos.
d. Espiroquetas;
e. Cocobacilos;
f. Vibriões.
Conhecer os tipos microbianos;
Identificar organismos;
Informações microbiológicas completas e
rápidas;
Analisar suscetibilidade a antibióticos.
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Referências: TORTORA, Gerard J.; FUNKE, Berdell R.; CASE, Christine L.. Microbiologia. 10. ed.
Porto Alegre: Artemed, 2012. / HOLANDA, Cecília Maria de Carvalho Xavier; ARIMATEIA,
Dayse Santos; MOTTA NETO, Renato. Manual de bacteriologia e de enteroparasitos. Natal:
Edufrn, 2017.
Diagnóstico microbiológico das bactérias
Colher amostras antes da administração de antibióticos;
Instruir os pacientes sobre o procedimento;
Materiais esterilizados e volume de amostra adequado;
Coletar de local com maior probabilidade de se encontrar o patógeno;
Considerar o estágio da infecção para colher amostras.
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Espécime em amosta
Diluições
Tioglicolato
Meio seletivo
Meio não seletivo
Colônias
Meio não seletivo
Testes
respiratórios
Testes
presuntivos
Podem ser utilizados métodos indiretos e diretos;
A caracterização da bactéria é importante para definir
estratégias de tratamento;
As colorações mais utilizadas são Gram e BAAR.
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Especificidades do diagnóstico bacteriológico:
Recomendações para isolamento bacteriano: Fluxograma:
Gram
Aerobiose ou
anaerobiose
Cultura 
pura
Testes
definitivos
Estocagem
Processos ordenados com corante púrpura,
mordente, álcool e contracorante. Baseado na
composição da parede celular, diferenciando
Gram + (roxas) e Gram - (rosas).
Ziehl Nielsen, mais indicado
para micobactérias. Ex:
baciloscopia de BK.
Referências: TORTORA, Gerard J.; FUNKE, Berdell R.; CASE, Christine L.. Microbiologia. 10. ed.
Porto Alegre: Artemed, 2012. / HOLANDA, Cecília Maria de Carvalho Xavier; ARIMATEIA,
Dayse Santos; MOTTA NETO, Renato. Manual de bacteriologia e de enteroparasitos. Natal:
Edufrn, 2017.
Diagnóstico microbiológico das bactérias
Enterobactérias:
Salmonella sp., Klebsiella sp., Shiguella sp., E. coli.
Isolamento em Agar McConkey (meio seletivo
com cristal violeta) + provas bioquímicas como
diferenciação de espécies em meio TSI.
Cocos Gram Positivos:
Staphylococcus sp. e Streptococcus sp.
Isolamento em Agar sangue (meio que preserva
hemácias) + provas bioquímicas como catalase e
coagualse.
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b.
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a.
b.
Fluxograma para identificação de espécies:
Teste 
Catalase Teste Bile esculina
+ Streptococcus do
grupo D
Teste
 NAaCl 6,5%
OBS.:
-Teste da Catalase: baseado na aplicação de
peróxido de hidrogênio em colônia de bactérias.
Positivo se houver formação de bolhas.
-Teste da Coagulase: baseado na formação de
coágulo em colônia de bactérias.
Espécies mais frequentes:
Staphylococcus sp.
Streptococcus sp.
+
-
Teste Manitol Coagulase DNAse
Streptococcus viridans-
+ Staphylococcus aureus
Enterococo
Não Enterococo
+
-
Referências: TORTORA, Gerard J.; FUNKE, Berdell R.; CASE, Christine L.. Microbiologia. 10. ed.
Porto Alegre: Artemed, 2012. / HOLANDA, Cecília Maria de Carvalho Xavier; ARIMATEIA,
Dayse Santos; MOTTA NETO, Renato. Manual de bacteriologia e de enteroparasitos. Natal:
Edufrn, 2017.
Diagnóstico microbiológico das bactérias
Urocultura:
Meio Agar CLED + semeadura com alça calibrada.
Critérios diagnósticos de Kass ou de Stam.
Principais alterações: pielonefrite e cistite, causadas
principalmente por E. coli, Enterococcus sp.
Hemocultura:
Baseia-se na bacteremia.
Maior frequência de S. aureus, Enterococcus sp., Enterobactérias.
2 à 4 amostras de sangue venoso em frascos de hemocultura com
metodologias manuais ou automatizadas.
Indicadas para casos de sespe, osteomielite, pneumonia.
Líquor:
Exame prioritário para casos de meningite.
Maior frequência de N. menigitides, S. peneumoniae, S. agalactiae.
Análise de celularidade, glicose e proteínas.
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d.
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a.
b.
c.
OBS.: Falsos-negativos são comuns na
hemocultura, o que se deve a fatores
como baixa bacteremia, bacteremia
transiente ou intermitente, volume ou
número insuficiente de amostras,
proporção meio:amostra incorreta.
Referências: TORTORA, Gerard J.; FUNKE, Berdell R.; CASE, Christine L.. Microbiologia. 10. ed.
Porto Alegre: Artemed, 2012. / HOLANDA, Cecília Maria de Carvalho Xavier; ARIMATEIA,
Dayse Santos; MOTTA NETO, Renato. Manual de bacteriologia e de enteroparasitos. Natal:
Edufrn, 2017.
Rotinas bacteriológicas:
Teste de Sensibilidade a Antimicrobianos (TSA)
Também chamado de Antibiograma, verifica o
comportamento in vitro de microorganimos expostos as
fármacos antimicrobianos;
Os antimicrobianos são utilizados em concentrações
pré-determinadas em discos de papel filtro, podendo ser
naturais (antibióticos) ou sintéticos (quimioterápicos);
Segue normativas estabelecidas pelo CLSI;
Resultados influenciados por tipos de meios, pH, cepas
de controle, temperatura, incubação, validade dos
produtos.
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4.
Indica melhor a terapêutica e a chance de
sucesso;
Avalia a interação fármaco x microorganismo in
vitro;
Segue técnicas recomendadas por consensos;
Reproduz as concentrações dos antimicrobianos
de modo semelhante aos níveis séricos.
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4.
Quando há microorganismos isolados e identificados
como causadores da infecção;
Para microorganismos com espectro de resistência
variável ou demonstrações anteriores de resistência;
Necessidade de planejamento cuidadoso da terapeutica.
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Sensíveis: o microorganismo é inibido pelo antimicrobiano de
forma adequada e na dosagem recomendada;
Resistentes intermediários: o microorganismo é inibido por
antimicrobiano em doses próximas à máxima permitida.
Resistentes: o microorganismo não é inibido pelas dosagens
recomendadas do antimicrobiano, indicando falha terapeutica.
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Referências: HOLANDA, Cecília Maria de Carvalho Xavier; ARIMATEIA, Dayse Santos;
MOTTANETO, Renato. Manual de bacteriologia e de enteroparasitos. Natal: Edufrn, 2017.
Aspectos gerais:
Classificação dos microorganismos:
Vantagens:
Indicações do TSA:
Teste de Sensibilidade a Antimicrobianos (TSA)
Métodos de análise do TSA:
 Análise qualitativa: avalia se há resistência do
microorganismo ao antimicrobiano ou não. É
realizada através do método Disco Difusão em
ágar, também chamado de Kirby Bauer.
1.
Disco Difusão em Ágar = conhecido como Kirby Bauer,
estuda a interação fármaco x bactéria em placas de
ágar. Para isso, a bactéria patogênica é isolada e 3-5
colônias são inoculadas em meio caldo até se obter
padrão 0,5 na escala de McFarland; faz-se então a
inoculação em placa de ágar de maneira homogênea e
coloca-se os discos de antimicrobianos para analisar a
formação de halos de inibição microbiana e comparar
com padrões estabelecidos pelo CLSI*. Necessita de
incubação mínima de 18h e estufa. Possui baixo custo e
fácil execução.
Referências: HOLANDA, Cecília Maria de Carvalho Xavier; ARIMATEIA, Dayse Santos;
MOTTA NETO, Renato. Manual de bacteriologia e de enteroparasitos. Natal: Edufrn, 2017.
*CLSI = Instituto de
Padrões Clínicos e
Laboratoriais.
Teste de Sensibilidade a Antimicrobianos (TSA)
Métodos de análise do TSA:
2. Análise quantitativa: avalia a
Concentração Inibitória Mínima (CIM) do
antimicrobiano necessária para inibir o
microorganismo no meio em que ele foi
inoculado. Pode ser realizada pelos métodos
de diluição em caldo, diluição em Ágar,
ETeste e testes automatizados. 
Diluição em caldo: é feito macro ou microdiluição. Na primeira, inocula-se a
bactéria em tubos seriados de meio caldo com concentrações crescentes
do antimicrobiano, analisando a CIM. Na microdiluição, a inoculação
bacteriana ocorre em placas com meio caldo e diferentes antimicrobianos,
indicando a CIM por alterações visuais. São testes precisos, mas
trabalhosos. 
Diluição em ágar: suspensão bacteriana a 0,5 na escala de McFarland é
inoculada em replicador de Steers e semeada em placas de ágar com
concentrações variadas de antimicrobianos até obter CMI. É fácil, de baixo
custo e permites vários testes.
ETeste: teste epsilométrico com fita contendo concentrações crescentes
de antimicrobiano colocada em placa com meio Mueller Hinton; 
 determinando a CIM por inibição microbiana ao redor da fita.
Testes automatizados: usam painéis com poços contendo meio de
crescimento e antimicrobianos, sendo analisados por máquina como a do
Sistema Walk Away. São de alto custo, mas rápidos e confiáveis. 
OBS.: CIM se refere à 
menor concentração de
antimicrobiano capaz de
inibir crescimento
bacteriano.
Referências: HOLANDA, Cecília Maria de Carvalho Xavier; ARIMATEIA, Dayse Santos;
MOTTA NETO, Renato. Manual de bacteriologia e de enteroparasitos. Natal: Edufrn, 2017.
Diagnóstico microbiológico dos fungos
Tipo de infecções por fungos:
 Fungos são microorganismos eucariontes detentores de parede celular rígida e que
crescem sob a fora de bolor (filamentosos) ou leveduras. Podem ser usados nas áreas
de alimentos, agricultura e médicina, pois cerca de 400 espécies são de importância
clínica. 
Superficial = restritas à camadas
superficiais da pele ou pelos. Ex.:
Malassezia furfur (ptiríase versicolor).
Cutânea = abrangem maiores extensões
da pele, pelos e mucosas. Ex.: gênero
Microsporum (dermatofitoses).
Subcutânea = acometem pele e tecidos
subcutâneos; Ex.: Sporothrix
schenkii (esporotricose).
Profunda = atinge órgãos e vísceras. Ex.:
Blastomyces dermatides
(blastomicose).
Oportunista sistêmica = acomete
imunodeficientes. Ex.: Aspergillus
fumigatus (aspergilose).
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4.
5.
Referências: MITCHELL, Thomas G.. Micologia Médica. In: BROOKS, Geo. F. et al. Microbiologia
médica de Jawetz, Melnick e Adelberg. 26. ed. Porto Alegre: Artmed, 2014. Cap. 45. p. 671-713. /
SOMENZI, C. C.; RIBEIRO, T. S.; MENEZES, A. de. Características Particulares da Micologia Clínica e
o Diagnóstico Laboratorial de Micoses Superficiais. Newslab, n. 77, p. 106–118, 2006. 
Definições:
Feito pelos meios ágar
Sabouraud (+ usado, pode ser do
tipo glicose ou cloranfenicol),
ágar PDA com batata dextrose
ou ágar Mycobiotic.
Exige incubação mínima de 3
dias à 25ºC e altas
concentrações de carboidratos.
2º Métodos
diagnósticos
Microscopia = analisa morfologia e pode
ser feita com biópsia do tecido
acometido ou microcultivo de fungos
filamentosos;
Cultura = demorada e indicada para
infecções oportunistas e primárias.
Sorologias = uso raro; indicadas para
micoses profundas.
1º Isolamento do
fungo
Diagnóstico microbiológico dos fungos
Referências: MITCHELL, Thomas G.. Micologia Médica. In: BROOKS, Geo. F. et al. Microbiologia
médica de Jawetz, Melnick e Adelberg. 26. ed. Porto Alegre: Artmed, 2014. Cap. 45. p. 671-713. /
SOMENZI, C. C.; RIBEIRO, T. S.; MENEZES, A. de. Características Particulares da Micologia Clínica e
o Diagnóstico Laboratorial de Micoses Superficiais. Newslab, n. 77, p. 106–118, 2006. 
OBS.: Fungos filamentosos
apresentam hifas e micélios.
Leveduras se caracterizam
por células esféricas ou
elipsoides isoladas.
Cultivo: pode ser feito por macrocultivo a partir de placas de cultura
específica ou por microcultivo, no qual se semeia o fungo em bloco de ágar
sobre uma lâmina e, após cultivar por 7 dias emplaca de petri úmida, é feita
coloração e análise microscópica. É indicado principalmente para fungos
filamentosos, nos quais se observa a morfologia do micélio vegetativo e o
corpo de frutificação.
Exame direto: colocação da amostra em lâmina e observação microscópica
após clarificação com solução de KOH 10-20% em caso de amostras obtidas
por raspado. Outro método envolve coloração com nanquim, Gram, Giemsa,
Mucicarmin de Mayer, H.E. Ao microscópio, podem ser observadas hifas ou
leveduras sem filamentação e sem cápsula.
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Identificação dos diferentes fungos:
Diagnóstico microbiológico dos vírus
Referências: SANTOS, Norma Suely de Oliveira; ROMANOS, Maria Teresa Villela; WIGG,
Marcia Dutra. Virologia Humana. 3. ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2015.
Métodos para diagnóstico viral:
Vírus é um arranjo molecular formado
por proteínas, material genético e, em
alguns, envelope lipídico. São capazes de
evoluir e necessitam parasitar uma
célular para se replicarem (intracelulares
obrigatórias).
Definições:
OBS.: sob suspeita de infecção viral, o
tipo de amostra coletada 
e o método de análise dependerá da
clínica apresentada pelo paciente.
Exemplos de amostras são aspirado de
nasofaringe, LCR e lavado de garganta.
Isolamento e identificação viral:
 Detecção direta: busca por antígenos virais ou pela partícula viral.
cultura de células: multiplicação viral em células cultivadas em
meios especiais sob condições controladas (37ºC, úmido, pH 7.2);
ovos embionados: multiplicação viral em embriões viáveis;
inoculação em animais: eficazes e restritos a pesquisas sérias.
observação da partícula viral por microscopia eletrônica;
detecção de antígeno viral por IF ou ELISA;
detecção do genoma viral por PCR.
Detecção indireta: busca por anticorpos que pode ser feita por
Imunofluorescência (IF) ou Ensaio Imunoenzimático (ELISA).
Sorologia = detecção de antígenos ou anticorpos.
Deteção direta da partícula viral.
Amplificação de ácidos nucleicos virais.
 Baseado em 4 grupos de processos:
1.
a.
i.
ii.
iii.
iv.
v.
vi.
b.
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Métodos 
clássicos
Métodos 
rápidos