2022_Testes_para_identificacao_de_microrganismos_PARTE_1

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I
Testes bioquímicos para identificação de gêneros e 
espécies de microrganismos
- Métodos gerais de identificação
-Testes bioquímicos de identificação
Métodos clássicos de identificação
*Identificação colonial - Importante para fungos filamentosos.
*Identificação microscópica
- Características morfológicas (características no Gram em bactérias, presença
de esporos, presença de estruturas em fungos filamentosos e leveduras etc...)
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Aspergillus flavus Aspergillus niger
Aspergillus nidulans
Bastonete Gram positivo
esporulado
Macroconídeos de 
Fusarium sp.
Blastoconídeos 
de Paracoccidioides brasiliensis
Métodos clássicos de identificação
• Identificação bioquímica:
(Características metabólicas)
Através das provas bioquímicas pode-se detectar a ausência do substrato
disponibilizado, os compostos produzidos ou as alterações que os estes
produzem no meio, como queda ou aumento de Ph, mudança de cor, etc.
*Identificação genética
Comparação com os padrões.
- Genes de gêneros ou espécies.
- Sequenciamento genético.
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SUBSTRATO
COMPOSTOS
SUBSTÂNCIA PRODUZIDA PELO 
MICRORGANISMO
Métodos Modernos de identificação
METABOLISMO
*Por aparelhos: Maldi-Tof (Espectrometria de massa). 
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Alguns testes bioquímicos de identificação
• Redução de nitrato
• Produção de enzimas: 
- Urease
- Gelatinase
- Caseinase
- Amilase
- Celulase
- Catalase
• Prova do SIM (sulfeto de hidrogênio, indol e motilidade)
• Fermentação de carboidratos
• Assimilação de carboidratos
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Redução assimilativa de nitratos
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Nitrato Nitrito Hidroxolamina Amônia
(NO3) (NO2) (NH2OH) (NH3)
* FUNDAMENTO: Assimilação de Nitrogênio
* PROCEDIMENTO:
Inocular o microrganismo em caldo nitratado e incubar.
*LEITURA:
1 gota do caldo nitratado
Reativo de Griess Isloway A + 
Reativo de Griess Isloway B 
1 gota do caldo nitratado
+Reativo de Nessler
Nitrito +
Amônia +
1 gota do caldo nitratado +
Ácido Sulfúrico +
Cristais de difenilamina Nitrato +
Nitrato redutase Nitrito redutase
Produção de urease (hidrólise da uréia)
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* FUNDAMENTO:
NH2
C = O (NH4)2CO3 2NH3 + CO2 + H2O
NH2
*PROCEDIMENTO:
Inocular o microrganismo meio Christensen (caldo contendo uréia e o indicativo de pH 
vermelho de fenol ) e incubar.
*LEITURA: 
urease
Uréia (ácido)
Amônia (básico)
H2O
Produção de gelatinase (hidrólise da gelatina)
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* FUNDAMENTO:
Gelatina Aminoácidos
(hidrólise do colágeno)
* PROCEDIMENTO:
Inocular o microrganismo em picada profunda na gelatina nutriente e incubar.
*LEITURA: 
Colocar o tubo a temperatura de 4º por 30 minutos, porque a 27ºC a gelatina fica mole podendo 
gerar resultado falso positivo.
gelatinase
H2O
Gelatinase +
Gelatinase -
Produção de caseinase(hidrólise da caseina)
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* FUNDAMENTO:
Caseina Aminoácidos
(fosfoproteína)
*PROCEDIMENTO:
Inocular o microrganismo em placa de Petri contendo agar caseina (20% de leite desnatado) , 
incubar e avaliar o crescimento.
LEITURA:
Avaliar a produção de halo ao redor da colônia.
caseinase
H2O
Produção de amilase (hidrólise do amido)
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* FUNDAMENTO:
Amido diversos polímeros de carboidratos
-Exemplo de amilase: Alfa-amilase, Beta-amilase, aminoplicosidase.
* PROCEDIMENTO:
Inocular o microrganismo em placa de Petri contendo ágar a 2% de amido, incubar e avaliar o 
crescimento.
* LEITURA: 
Cobrir a placa com solução de iodo-iodetada.
amilase
H2O
Produção de celulase (hidrólise da celulose)
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* FUNDAMENTO:
Celulose celobiose glicose
* PROCEDIMENTO:
Inocular o microrganismo em caldo Omelianski e inserir uma tira de papel filtro estéril e 
incubar. 
* LEITURA: 
Avaliar a degradação do papel que está em contato com o caldo.
celulase
H2O
celobiase
H2O
Produção de Celulase
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Utilização de Agar + carboximetilcelulose (0,1%)
Halo = Celulase Positivo
Crescimento
Produção de catalase
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* FUNDAMENTO:
2H2O2 2H2O + O2
* PROCEDIMENTO:
Inocular o microrganismo em meio de cultura livre de sangue ou derivados e incubar.
* LEITURA: 
Acrescentar ao meio de cultura gotas de peróxido de hidrogênio (H2O2) e avaliar a formação de 
bolhas.
catalase
A leitura também pode ser realizada em
lâmina, adicionado uma gota do caldo
microbiano e uma gota de H2O2.