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Bloco Síndromes Infecciosas Paloma Faria 1 PATOLOGIA INTRODUÇÃO À MICROBIOLOGIA Microbiologia: É a ciência que estuda os diversos microrganismos e sua relação com os seres humanos. Microbiota humana: Formada por micróbios que coexistem com os seres humanos e estão adaptados à vida, na superfície do corpo. Há sítios estéreis (não tem presença de microrganismo, como SNC, rins, bexiga, ossos) e sítios colonizados (há presença de microrganismos, como o trato respiratório, intestino delgado, flora vaginal, boca, terço distal da uretra, canal auditivo externo). Infecção: Invasão ou multiplicação de microrganismos que vencem as defesas do corpo humano causando. Pode ser causada por vírus, bactérias, protozoários e fungos. Vários parasitas são transmitidos através de insetos (vetores) que funcionam como ligação entre pessoas doentes e sadias ou entre os reservatórios naturais e o homem, provocando doença. A infecção pode ser caracterizada pelo comprometimento parcial ou total do órgão ou sistema e normalmente está associada a sintomas (febre, calafrio, dor, edema, rubor). Colonização: Presença de microrganismos em locais ou sítios biológicos do nosso corpo, que vivem em equilíbrio, muitas vezes em condições de comensalismo ou simbiose, sem causar dano ou lesão com inflamação. Diagnóstico microbiológico Suspeita de infecção Qual o sítio ou local provável? É um sítio colonizado ou estéril? A coleta do material deve ocorrer de forma asséptica. Pode ser material biológico (urina, sangue, fezes, líquor, abscesso, raspados de pele, secreção de córnea) ou não biológico (válvulas cardíacas, cateter de longa duração). O transporte do material coletado deve manter o microrganismo viável até chegar ao laboratório. O uso de medicação prévia (principalmente antibióticos) pode inibir o desenvolvimento do microrganismo. Deve ser feita a identificação do agente (vírus, bactéria, fungo, protozoário). Metodologias: 1. Exame direto (bacterioscopia): visualização direta ao microscópio ótico com e sem colorações específicas. 2. Cultura: aspecto do crescimento em meios de cultura sólidos e líquidos. 3. Provas bioquímicas: baseadas nas vias metabólicas utilizadas por esses agentes para obtenção de energia vital (bactérias e fungos). 4. Sorologia: detecção indireta do agente pela pesquisa de anticorpos adsorvidos em látex. 5. Biologia molecular: sequenciamento e ampliação do material genético do agente encontrado em material biológico. Construção da epidemiologia: Conhecer os principais agentes infecciosos relacionados aquele sítio biológico. Conhecer o perfil de resistência e susceptibilidade desses agentes aos fármacos normalmente utilizados pela comunidade científica para tratamento da infecção. _____________________________________________________________________ Bloco Síndromes Infecciosas Paloma Faria 2 VETORES Triatoma spp. Apresenta aparelho bucal picador-sugador. Possui ciclo paurometabólico: após a fase de ovo, passa por cinco fases imaturas (ninfas de 1º a 5º estágio) antes de atingir o estágio adulto. Entre uma fase e outra os triatomíneos precisam se alimentar de sangue. Possui hábito noturno e é durante a picada que ocorre a defecação, liberando as formas infectantes que penetrarão pelo local da picada no hospedeiro vertebrado. Uma fêmea é capaz de botar até 300 ovos durante sua vida, que pode durar cerca de 1 ano e meio. Principais espécies: 1. Triatoma infestans: Vetor do T. cruzi na América do Sul. Cor negra com manchas amareladas. Cabeça negra. 2. Panstrongylus megistus 3. Rhodnius neglectus 4. Rhodnius prolixus 5. Triatoma brasiliensis 6. Triatoma rubrofasciata Os triatomíneos que têm importância epidemiológica na transmissão do T. cruzi ao homem são apenas as espécies que colonizam no domicílio e peridomicílio humano. Porém todas as espécies são vetores em potencial do T. cruzi, mas algumas condições são necessárias: Adaptação à habitação humana Alto grau de antropofilia Larga distribuição geográfica Curto espaço de tempo entre hematofagia e defecação Lutzomyia spp. Apresenta cor amarelada (cor-de-palha) ou castanho claro. Assim, é conhecido como mosquito palha. As asas são grandes, hialinas, densamente revestidas de cerdas longas e na posição de pouso, não se cruzam sobre o corpo do inseto, mas permanecem ligeiramente afastadas e levantadas. A cabeça é longa, retraída na base e forma um ângulo de 90° com o eixo do corpo. As pernas são compridas, delgadas e recobertas de escamas curtas e largas. Tem hábito vespertino. É o vetor da Leishmaniose. Uma espécie importante: Lutzomyia longipalpis. Bloco Síndromes Infecciosas Paloma Faria 3 Anopheles spp. Mosquito da família Culicidae e da superordem nematocerae (tem as antenas com mais de 11 artículos). Apresenta ciclo holometabólico, passando de ovo para as fases de larva e pupa, aquáticas, e finalmente inseto adulto alado. Suas asas, com a extremidade também arredondada, apresentam-se cobertas por escamas de cores claras e escuras, proporcionando aspecto manchado às asas. Tem hábito noturno e crepuscular. Conhecido como mosquito-prego, pois descansa o corpo formando ângulo com a superfície de repouso, e não paralelamente como as outras espécies. Uma espécie importante: Anopheles darlingi. Como tem ciclo aquático, uma maneira de impedir sua transmissão é a interrupção dessa fase do seu ciclo. Transmite o protozoário causador da malária. Aedes spp. Mosquito da família Culicidae e da superordem Nematocerae (tem as antenas com mais de 11 artículos). Apresenta ciclo holometabólico. Suas asas, com a extremidade também arredondada, apresentam-se cobertas por escamas monocromáticas. É mais escuro e possui listras brancas pelo corpo e pelas patas. Difere do Culex spp, pela sua coloração torácica. O inseto adulto descansa com o corpo paralelo e tem hábito diurno. Uma espécie importante: Aedes aegypti. É vetor da dengue, febre amarela, zika e chikungunya. _____________________________________________________________________ MALÁRIA Doença infecciosa e potencialmente grave. De acordo com a OMS, a malária é a doença tropical e parasitária que mais causa problemas sociais e econômicos no mundo e só é superada em mortes pela AIDS. Agente etiológico Os parasitas pertencem ao filo Apicomplexa, família Plasmodidae e gênero Plasmodium. Apenas quatro espécies causam a doença: Plasmodium falciparum, Plasmodium vivax, Plasmodium malariae e Plasmodium ovale (só existe na África). Transmissão Picada de fêmeas do gênero Anopheles, parasitadas com esporozoítos em suas glândulas salivares, que inoculam estas formas infectantes durante o repasto sanguíneo. A transmissão é mais comum em áreas rurais e semi-rurais, mas pode ocorrer em áreas urbanas principalmente na periferia. Anopheles darlingi: Principal transmissor na região amazônica. Tem como criadouro grande coleção de água. Anopheles aquasalis: Predomina na faixa litorânea, inclusive no RJ. Prolifera em coleções de água salobra. Bloco Síndromes Infecciosas Paloma Faria 4 Ciclo biológico Hospedeiro vertebrado (homem) Esporozoítos infectantes são inoculados no homem pelo inseto vetor. Fase pré-eritrocítica, exo-eritrocítica ou tissular: Dentro de 30 a 60 minutos os esporozoítos alcançam os hepatócitos → se diferenciam em trofozoítos pré- eritrocíticos → se multiplicam por reprodução assexuada (esquizogonia) → originam esquizontes hepáticos e, depois, 10 a 30 mil merozoítos. ***Essa fase dura uma semana para as espécies P. falciparum e P. vivax e duas semanas para P. malariae. Fase eritrocítica: Hepatócitos são rompidos, liberando merozoítos na corrente sanguínea, que invadem os eritrócitos → se transformam emtrofozoítos → reproduzem assexuadamente (esquizogonia) → originam esquizontes sanguíneos → formação de merozoítos → rompimento dos eritrócitos, com liberação dos merozoítos, que invadirão novos eritrócitos → depois de algumas gerações, merozoítos diferenciam-se em estágios sexuados, formando os gametócitos → seguirão o desenvolvimento no vetor, dando origem aos esporozoítos. ***O ciclo sanguíneo se repete sucessivas vezes, a cada 48 h, nas infecções pelo P. falciparum, P. vivax e P. ovale, e a cada 72 h, nas infecções pelo P. malariae. Hospedeiro invertebrado (inseto) Fêmea do Anopheles, durante o repasto sanguíneo ingere os gametócitos da corrente sanguínea do indivíduo infectado → no intestino inicia-se a gametogênese → formação de gametas → fecundação → formação do ovo ou zigoto → oocineto (zigoto em movimento) → encistamento na parede intestinal, passando a ser chamado de oocisto → ruptura do oocisto e liberação dos esporozoítos formados por esporogonia → disseminação por todo corpo do inseto até atingir as glândulas salivares. Ciclo assexuado: hemácias do hospedeiro vertebrado Ciclo sexuado: hospedeiro invertebrado Bloco Síndromes Infecciosas Paloma Faria 5 Patogenia Apenas o ciclo eritrocítico é responsável pelas manifestações clínicas e patologia da malária. A destruição dos eritrócitos parasitados está presente em todos os tipos de malária e em menor ou maior grau participam do desenvolvimento da anemia. Entretanto, na maior parte dos casos, a anemia não se correlaciona com a parasitemia, podendo ser decorrente da destruição de eritrócitos não parasitados pelo sistema imune ou por aumento da eritrofagocitose esplênica. Desse modo, a hemólise pode ser tanto intracelular (Plasmodium), quando extracelular (baço). P. vivax: reticulócitos (anemia mais leve) P. malariae: hemácias maduras P. falciparum: hemácias de todas as idades (anemia mais grave) Manifestações clínicas Fase inicial (prodrômica): Mal-estar, cefaleia, cansaço e mialgia – geralmente precede a febre (marca o fim do período de incubação). Fase pré-eritrocítica: Silêncio clínico. Fase eritrocítica: Ocorre o ataque paroxístico agudo (acesso malárico), que coincide com a ruptura das hemácias ao final da esquizogonia e é geralmente acompanhado de calafrio e sudorese. Esta fase dura de 15 minutos a uma hora, sendo seguida por uma fase febril (41oC ou mais). Após um período de duas a seis horas, ocorre desfervescência da febre e o paciente apresenta sudorese profusa e fraqueza intensa. Depois de algumas horas, os sintomas desaparecem e o paciente sente-se melhor. A periodicidade dos sintomas depende do tempo de duração dos ciclos eritrocíticos de cada espécie: P. vivax: 48 h (febre terçã benigna) P. falciparum: 48 h (febre terçã maligna) P. malariae: 72 h (febre quartã) Malária não complicada: Os acessos maláricos são acompanhados de intensa debilidade física, náuseas, vômitos, palidez, baço palpável e anemia variável. Quadros prolongados de infecção podem resultar na Síndrome de Esplenomegalia Tropical (volumosa esplenomegalia, hepatomegalia, anemia, leucopenia e plaquetopenia). Nota: Pode ocorrer ruptura do baço por manobra na palpação. Malária grave e complicada: Adultos não imunes, crianças e gestantes podem apresentar infecções mais graves, podendo ser fatal. Hipoglicemia, convulsões, vômitos repetidos, hiperpirexia, icterícia e distúrbio da consciência são indicadores de pior prognósitco e podem preceder insuficiência renal aguda, edema pulmonar agudo e malária cerebral. Diagnóstico Exame direto do esfregaço sanguíneo e gota espessa corada com Giemsa. Nota: Recidivas ou recrudescências podem acontecer em alguns pacientes, mesmo após tratamento. Se houver recidivas e não houver tratamento, a doença pode cronificar. _____________________________________________________________________ DOENÇA DE CHAGAS Agente etiológico Protozoário Trypanosoma cruzi, pertencente a família Trypanosomatidae. A forma intracelular no hospedeiro vertebrado é a amastigota. No sangue circulante, a forma encontrada é a tripomastigota, que possui flagelo característico. Bloco Síndromes Infecciosas Paloma Faria 6 Transmissão A doença é transmitida pelo inseto hematófago do gênero Triatoma, comumente chamado de barbeiro ou chupança. Ciclo biológico O barbeiro pica o homem durante a noite. Formas tripomastigotas metacíclicas são eliminadas nas fezes e/ou urina do vetor durante o repasto sanguíneo. O indivíduo coça o local da picada e os protozoários caem na corrente sanguínea, a partir daí, vão para os órgãos pelos quais tem tropismo (esôfago, miocárdio e cólon). Formas de evolução da doença 1. Fase aguda: Pode ser sintomática ou assintomática. As manifestações gerais são representadas por febre, taquicardia, discreta esplenomegalia e linfadenomegalia. São clássicos dessa fase (50% dos pacientes): a. Sinal de Romaña: edema bipalpebral unilateral com linfadenite satélite pré-auricular devido à penetração do T. cruzi na conjuntiva. b. Chagoma de inoculação (ou cutâneo): nódulo que se forma no local da picada do barbeiro. 2. Fase crônica assintomática Forma indeterminada: Longo período assintomático (10 a 30 anos). Há positividade de exames sorológicos e/ou parasitológicos para a infecção pelo T. cruzi. Compreende a 50% dos pacientes e a maioria pode sem nunca apresentar sintomas. Cerca de 30% evoluem para a forma sintomática. 3. Fase crônica sintomática: É caracterizada pelas sequelas de destruição pelo parasita, que tem tropismo pelas células musculares estriadas cardíacas e neurônios. Forma cardíaca: Quando o parasita chega ao miocárdio, inicia-se uma resposta inflamatória aguda com acúmulo de polimorfonucleares, caracterizando a miocardite inflamatória, que resulta em congestão e edema. A inflamação crônica é caracterizada por fibrose entre as fibras cardíacas, o que pode resultar em destruição do sincício elétrico e perda da complacência e contração do coração. Assim, o paciente pode apresentar: ICC, distúrbios elétricos e arritmias. Os fenômenos tromboembólicos também são frequentes. No ECG, bloqueio de ramo direito associado à hemibloqueio anterossuperior esquerdo é patognomônico da doença de Chagas. Forma digestiva: A presença do protozoário no tecido muscular do trato gastrointestinal causa a desenervação dos plexos mioentéricos de Meissner e Auerbach, determinando perda da motilidade. Evidenciam-se principalmente pelo megaesôfago e megacólon. Diagnóstico 1. Fase aguda Exame direto do esfregaço sanguíneo e gota espessa corada com Giemsa Sorologia: IFI-IgM PCR 2. Forma indeterminada Exame direto do esfregaço sanguíneo e gota espessa corada com Giemsa Sorologia: IFI-IgG, Elisa e HAI. PCR 3. Forma crônica Sorologia: IFI-IgG, Elisa, aglutinação de látex e HAI. _____________________________________________________________________ Bloco Síndromes Infecciosas Paloma Faria 7 LEISHMANIOSE É uma doença que apresenta diversas formas de apresentação, as quais variam de acordo com a espécie responsável pela infecção. Agente etiológico: Protozoários do gênero Leishmania, pertencentes à ordem Kinetoplastida e à família Trypanosomatidae. Espécies causadoras de doença: Leishmaniose visceral: Leishmania chagasi e Leishmania donovani Leishmaniose tegumentar: Leishmania tropica (forma cutânea) e Leishmania braziliensis (forma cutaneomucosa) São parasitas intracelulares obrigatórios de macrófagos de mamíferos. Macrófagos da pele: leishmaniose tegumentar. Macrófagos do sistema retículo-endopoiético (fígado, baço, medula óssea): leishmaniose visceral (calazar) Formas do parasita: Trato digestório do vetor: promastigotas metacíclicos (flagelados) Organismo dos mamíferos: forma amastigota (não-flagelada) Transmissão: O homemse infecta quando o vetor do gênero Lutzomyia, conhecido vulgarmente como mosquito-palha, inocula as formas promastigotas do protozoário durante seu repasto sanguíneo. Lutzomyia longipalpis é o mais importante vetor no Brasil. LEISHMANIOSE VISCERAL o Período de incubação: Extremamente variável. Entre 2 e 7 meses. o Reservatórios: Os principais são o cão, a raposa e marsupiais. o Manifestações clínicas: Hepatoesplenomegalia febril (tríade), pancitopenia. o Diagnóstico diferencial: Esquistossomose mansônica, linfomas e leucemias agudas, febre tifoide, salmonelose, malária, tuberculose. o Diagnóstico: 1. Exames inespecíficos: hemograma (pancitopenia) e eletroforese de proteínas (níveis baixos de albumina e elevados de globulina). 2. Exames específicos: a. Parasitológico: Aspirado de medula óssea. O material é submetido a exame direto, cultura e PCR. b. Imunológico: Pesquisa de anticorpos: IFI (mais utilizado; resultado em titulação), Elisa, aglutinação direta, teste rápido Rk39 Intradermorreação de Montenegro: Negativo durante o período da doença devido a imunidade celular. Torna-se positivo após cura clínica. LEISHMANIOSE TEGUMENTAR o É uma doença de ampla distribuição mundial e endêmica. Também conhecida como úlcera de Bauru ou botão do Oriente. o Período de incubação: Varia de duas semanas a vários meses, podendo chegar a três anos. o Reservatórios: Roedores silvestres. o Formas clínicas: 1. Cutânea: Formação de úlceras únicas ou múltiplas confinadas na derme, com a epiderme ulcerada. Caracterizada por lesão ulcerativa, superficial e circular, com bordas elevadas e bem definidas, sobre uma base de tecido de granulação. Evolutiva, com infecções secundárias até se tornar lesão cicatricial Bloco Síndromes Infecciosas Paloma Faria 8 semelhante a queimadura. Linfadenopatia regional frequentemente precede o aparecimento da lesão cutânea em 1 a 12 semanas. Sintomas sistêmicos: mal-estar, anorexia, perda de peso e febre baixa. Geralmente o Teste de Montenegro é positivo. 2. Cutânea disseminada: Caracterizada por lesões difusas, não ulcerosas por toda a pele, particularmente em extremidades e outras partes expostas. Geralmente está associada a uma deficiência imunológica do indivíduo. Geralmente o teste de Montenegro é negativo. 3. Cutaneomucosa (espúndia): Ocorrem lesões destrutivas secundárias envolvendo mucosas e cartilagens. Geralmente afeta: nariz, faringe, boca, laringe. Paciente apresenta dificuldade de respiração, fala e de se alimentar. Manifestações clínicas: descarga nasal, secreção, epistaxe, destruição posterior do septo nasal, colapso da arquitetura nasal. Geralmente o Teste de Montenegro é positivo (muito reativo). o Diagnóstico diferencial: paracoccidioidomicose, sífilis, histoplasmose, sarcoidose, carcinoma baso-celular, rinosporidiose o Diagnóstico: 1. Parasitológico: Exame direto de esfregaço de lesão de pele corada com Giemsa Cultura em meio NNN 2. Imunológico: Pesquisa de anticorpos: IFI (mais utilizado; resultado em titulação), Elisa, aglutinação direta Intradermorreação de Montenegro _____________________________________________________________________ FUNGOS Os fungos são organismos eucariotas, aclorofilados, heterotróficos, multinucleados, uni ou multicelulares que se reproduzem sexuada ou assexuadamente. Possuem parede celular rígida, geralmente quitinosa ou celulósica. Seu principal material de reserva é o glicogênio. Micoses São infecções provocadas por fungos. Podem ser oportunistas (indivíduos imunossuprimidos) ou estarem associadas à exposição ocupacional e ao uso de antibiótico de amplo espectro. Classificação: 1. Cutâneas (tíneas): Causadas por fungos dermatófitos (usam queratina para seu crescimento), como o Microsporum spp. Assim, geralmente acometem pele e unhas. Exemplos: ceratite (superfície da córnea) e onicomicoses (unhas). 2. Subcutâneas: Atingem camadas mais profundas da pele, tecido subcutâneo ou ossos. 3. Sistêmicas: Atingem mais de um sistema, por meio da disseminação hematogênica ou linfática. Causam doença em indivíduos normalmente sadios. São provocadas principalmente por fungos dimórficos. Teste de Montenegro: Consiste em uma reação de hipersensibilidade. São inoculados fragmentos do parasita na pele do paciente. Deve ser considerado positivo, se após 48 horas de inoculação intradérmica de 0,1 mL de antígeno, formar um nódulo > 5 mm. Bloco Síndromes Infecciosas Paloma Faria 9 Classificação dos fungos 1. Unicelulares: São as leveduras. Células são arredondadas ou ovais. Dividem-se por brotamento (originando o blastoconídeo) ou cissiparidade (raro). Nota: Os blastoconídeos unidos se assemelham as hifas, sendo chamados de pseudohifas. 2. Multicelulares: São os filamentosos. Células tubulares e com paredes rígidas. Podem ser ramificadas e septadas ou não. Formam hifas (emaranhados de células). O conjunto de hifas forma o micélio (bolor). 3. Dimórficos: Podem ser unicelulares ou multicelulares, dependendo da temperatura na qual se encontram: 37°C leveduras; 25°C filamentosos. Fungos leveduriformes Candida spp. Geralmente coloniza a mucosa, principalmente digestiva. Doenças: Candidíase oral (sapinho), esofagite, vulvovaginite, infecção urinária, sepse. Diagnóstico: Cultura (aspecto e cor da colônia) e teste do tubo germinativo (diferencia espécies albicans das não albicans). Cryptococcus neoformans Geralmente coloniza a orofaringe. Doenças: Criptococose Fisiopatologia: A infecção ocorre pela inalação da levedura, atingindo os pulmões onde pode evoluir para curar ou disseminar para SNC, pele, ossos e pulmão. Assim, pode causar a neurocriptococose. Transmissão: Fezes de pombos e morcegos. Diagnóstico: Pesquisa do fungo em esfregaço de material biológico (líquor, escarro, pus) corado com tinta nankin → O Cryptococcus neoformans possui uma cápsula polissacarídea com propriedades antifagocíticas. Essa cápsula não é corada pela tinta nankin. Assim, observa- se formas arredondadas, às vezes em gemulação, não coradas pela tinta. Fungos filamentosos Aspergillus spp. Geralmente coloniza olhos, ouvidos e nariz. Doença: Aspergilose Geralmente o processo se inicia no pulmão, podendo resultar em três formas: localizada (colonização intracavitária pulmonar, bronquites aspergilares, broncopneumonia obstrutiva crônica), alérgica (asma, Teste do tubo germinativo: In vivo, todas as leveduras podem formar pseudo-hifas (união de blastoconídeos semelhantes as hifas). Contudo, in vitro, apenas Candida albicans formam pseudohifas. O teste consiste na incubação da colônia da levedura com soro humano. A seguir, observa-se no microscópio (exame direto) a visualização ou não da pseudohifa. Bloco Síndromes Infecciosas Paloma Faria 10 Aspergilose broncopulmonar alérgica) e invasiva (Aspergilose disseminada, Aspergilose invasiva). Diagnóstico: Cultura do escarro, exame direto e exame histológico. Fungos dimórficos Paracoccioides brasiliensis Doença: Paracoccidioidomicose É uma doença granulomatosa crônica que se inicia no pulmão e depois se dissemina (micose sistêmica). Diagnóstico diferencial: Forma cutaneomucosa da leishmaniose tegumentar Diagnóstico: Exame direto do escarro (é possível observar roda de leme, devido reprodução por brotamento) Sporothrix schenkii Doença: Esporotricose (micose subcutânea que causa ulcerações). Doença de cunho ocupacional, pois esse fungo é encontrado em todo lugar que tenha decomposição da matéria orgânica. Diagnóstico diferencial: Leishmaniose tegumentar Diagnóstico: Cultura (raspado ou tecido biopsiado) e soroaglutinação do látex Histoplasma capsulatum Doença: Histoplasmose (micose sistêmica que pode alcançar a medula óssea e causar pancitopenia) Diagnóstico diferencial: Leishmaniose visceral Diagnóstico:Exame direto em medula óssea _____________________________________________________________________ BACTERIOLOGIA Diversas bactérias provocam doenças ou infecções no homem. Para o diagnóstico desses agentes, utilizamos o diagnóstico microbiológico: 1. Exame direto ou bacterioscopia: Interpretação da presença de microrganismo em esfregaço do material biológico (corado ou não). 2. Cultura: Estuda as propriedades de um determinado microrganismo. Se houver crescimento primário na placa de meio de cultura e se essa colônia pertence a bactéria colonizante ou infectante, é realizado o antibiograma para escolha da melhor opção terapêutica. A semeadura em meios de cultura tem como objetivo obter microrganismo em cultura pura (uma colônia deve ser isolada da outra). Os meios de cultura podem ser: sólido, semissólido e líquido. UROCULTURA É a cultura da urina em meios de cultivo sólidos e líquidos e permite-nos identificar possíveis agentes bacterianos e fúngicos causadores de infecção urinária baixa (cistite e uretrite) e alta (pielonefrite). Cultura qualitativa: Informa se há infecção ou não e/ou contaminação; e quantas espécies diferentes cresceram. Cultura quantitativa: Informa a quantidade de microrganismo de cada espécie que cresceu. É importante para diferenciar microbiota normal e patogênica. Técnica do microcultivo: Após o plantio primário, fungos filamentosos podem ser microcultivados em fragmento de ágar sabourraud coberto por lamínula, para crescimento e identificação de estruturas de reprodução. Bloco Síndromes Infecciosas Paloma Faria 11 Materiais necessários Placas de ágar Cled Urina Alça calibrada descartável de 1microlitro ou 0,001ml. 1 colônia ou aglomerado = 1000 UFC/mL, pois a alça é de 1/1000 de 1mL. Procedimento 1. Coletar jato médio de urina e semeá-la em ágar Cled pela técnica de esgotamento (longitudinalmente e transversalmente) 2. Confeccionar esfregaço de gota de urina e corar pelo Gram 3. Incubar a 37°C por 24h 4. Identificar a placa Interpretação da urocultura 1. Resultado: Negativo Cultura qualitativa: não houve crescimento Cultura quantitativa: 0 UFC por ml Positivo Cultura qualitativa: houve crescimento e quantas espécies Cultura quantitativa: quantificar as colônias em UFC por ml 2. Identificação macroscópica das colônias: tamanho, forma, cor (quantos tipos cresceram – se apenas um cresceu, a cultura é pura; se houve crescimento de dois ou mais indica infecção polimicrobiana ou contaminada), densidade, consistência e elevação. 3. Identificação microscópica das colônias: coloração de Gram de esfregaço de uma colônia. 4. Identificar o microrganismo por técnicas bioquímicas (baseadas nas vias utilizadas pelas bactérias para obtenção de energia vital para seu crescimento e desenvolvimento) 5. Antibiograma: realizado apenas para microrganismos patogênicos ANTIBIOGRAMA O objetivo é a investigação da capacidade de uma amostra bacteriana expressar resistência a drogas antimicrobianas comumente empregadas na terapêutica. Os resultados orientam a escolha da droga mais adequada para cada situação clínica. Métodos Disco difusão em ágar (Kirby-Bauer): Antimicrobianos impregnados em discos de papel de filtro difundem-se no ágar, criando, em torno do disco, um gradiente decrescente de concentração da droga. CIM ou MIC (concentração inibitória mínima): Testa diferentes drogas em diferentes concentrações, sendo possível identificar a menor concentração de droga suficiente para inibição da bactéria. Procedimento 1. Identificar a placa de Ágar Mueller-Hinton e marcar os locais onde serão colocados os discos de antimicrobianos, que devem ficar espalhados a cerca de 1 cm da borda da placa. Definição bacteriúria significativa: Acima de 100 UFC em homens Acima de 1000 UFC em mulheres e coleta com sonda Acima de 105 ao se tratar de bacteriúria assintomática Qualquer crescimento em urina colhida por punção supra púbica Bloco Síndromes Infecciosas Paloma Faria 12 2. Acender o bico de Bunsen, e trabalhando atrás da chama, diluir 3 a 5 colônias iguais no tubo contendo 2 ml de salina até atingir a turbidez de 0,5 da escala de MacFarland-1x106 UFC/mL, que será o inóculo bacteriano. 3. Embeber o swab no inóculo bacteriano (Fig.1) e eliminar o excesso de líquido por compressão nas paredes do tubo. Espalhar o inóculo, uniformemente, a partir de 3 pontos equidistantes, de maneira a cobrir toda a superfície do ágar (Fig. 2). 4. Com uma pinça flambada e resfriada, retirar um disco de antimicrobiano do frasco, abrir a placa perto do bico de Bünsen e colocar o disco no local previamente marcado, comprimindo-o ligeiramente para que fique aderido à superfície do meio. Fechar a placa. 5. Repetir o procedimento 3 para a colocação dos demais discos de antimicrobianos, mantendo distância entre os discos (Fig. 3). 6. Incubar a placa a 37°C por 24 horas, de forma invertida. Interpretação 1. Observar crescimento ao redor dos discos. 2. Medir o diâmetro dos halos de inibição e comparar com a tabela (S: sensível; R: resistente; I: intermediário). _____________________________________________________________________ Referências: NEVES, D.P. Parasitologia Humana. 10ª ed. ERICHSEN, E.S. et al. Medicina laboratorial para o clínico. Belo Horizonte, 2009.
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