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• Os softwares de visualização de estruturas 3D de proteínas permitem compreender melhor os vários níveis organizacionais e funcionais. • Para essa observação vamos utilizar bancos de dados de estruturas do NCBI (National Center for Biotechnology Information). Proteínas 1. Pesquisar a palavra “hexokinase” no NCBI 2. Observe a quantidade de resultados encontrados. Reduzir os resultados da pesquisa da enzima, digitando no campo de buscas "hexokinase[Title]”. 3. Perceba a mudança na quantidade de resultados. Estamos refinando a nossa busca. Para visualizar estruturas de proteínas, nos interessa a base de dados de estruturas 3D de proteínas. Do lado esquerdo da barra de buscas, no local apontado pela seta, selecione “Structure” e clique em “Procurar” ou “Search”. 4. Observamos a base de dados "Structure" do NCBI, contendo 35 resultados da hexoquinase. Cada um dos resultados representa uma estrutura ou parte de uma estrutura 3D de uma proteína, obtida de forma experimental. Podemos observar que temos apenas 35 resultados nesta bases de dados. É natural, uma vez que as técnicas utilizadas para a determinação de estruturas 3D de proteínas (Cristalografia de raio-X e NMR) são complexas e o volume de estruturas que conseguem gerar ainda é limitado. 5. Selecionar o resultado de número 16, “HUMAN HEXOKINASE TYPE I COMPLEXED WITH ATP ANALOGUE AMP-PNP[TRANSFERASE]”. Escolhemos este resultado porque é a estrutura 3D da hexoquinase humana. Além disso, apresenta características interessantes de visualização: tem duas subunidades e está ligada a um análogo da sua coenzima. A coenzima da hexocinase é o ATP, o análogo do ATP utilizado é o AMP-PnP. O AMP-PnP é utilizado pois este mantêm-se ligado permanentemente o que permite estudar a conformação da hexoquinase com o coenzima ligada. 6. Esta será a tela visualizada. 7. Clicar em 3D view na imagem da proteína. Ao passar o mouse sobre a figura, você poderá perceber os aminoácidos que participam da sua formação. Ao lado, podemos perceber as interações entre moléculas. Pela sua estrutura pode-se observar que a proteína tem estrutura quaternária, uma vez que apresenta duas subunidades homólogas. Apesar da estrutura desta proteína ter sido obtida por Cristalografia de Raio-X, o que observamos é uma representação simplificada da proteína. Responda: qual a função da hexoquinase? Na sua ausência, o que pode acontecer? • Passaremos para o próximo banco de dados: o Protein Data Bank (PDB). • Acesse https://www.rcsb.org/ Proteínas https://www.rcsb.org/ 8. Este é o site do PDB, um dos recursos mais importantes para quem pretende obter informações sobre a estrutura 3D de proteínas. 9. Escrever no campo de busca “hexokinase”. Explore os resultados. Slide 1 Slide 2 Slide 3 Slide 4 Slide 5 Slide 6 Slide 7 Slide 8 Slide 9 Slide 10 Slide 11
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