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Resumo área I – parasitologia Fases dos exames laboratoriais: • Pré-analítica: Orientação ao paciente, coleta, transporte, conservação, registro da amostra; • Analítica: Exames macroscópicos, processamento da amostra e exames microscópicos; • Pós analítica: Emissão do laudo. Sistematização do EPF é feita através da: fase pré-analítica (orientações ao paciente, coleta da amostra, transporte, conservação da amostra, controle de qualidade) - Fase analítica (escolha da metodologia, registro, controle de qualidade, exame macroscópico, processamento e exame microscópico), fase pós-analítica (resultado laboratorial e controle de qualidade). Para melhorar a qualidade num exame parasitológico de fezes (EPF) é necessário padronização das formas de solicitação e procedimentos de coleta, orientação do cliente verbal e por escrito, coleta de até 3 amostras num período de 10 dias, recusa de amostras com justificativa consistente. Para amostras liquidas é necessário examinar em até 30 minutos após a evacuação e as pastosas no máximo 60 minutos. Amostras: 1. Número de amostra varia de 6 a 3 amostras, em dias alternados num período de 14 a 10 dias; 2. Amostra fecal formada: em até 24hras; 3. Amostra fecal pastosa: examinar uma hora após da evacuação; 4. Amostra fecal liquida: examinar em até 30 minutos após a evacuação. Tipos de amostras: FEZES DIARREICAS: • Análise pelo método direto (lâmina com amostra fresca), para visualização do movimento de trofozoítos; • Concentração da amostra para visualização de parasitos; • Coloração permanente; • Analise não pode ultrapassar 60 minutos de coleta, caso contrário, necessário usar, métodos de conservação. ESTEATORREICAS • Análise pela técnica de Ritchie. FORMADAS • Análises diversas. PASTOSAS • Análise não pode ultrapassar 1 hora da coleta. Conservação: • Temporária - Refrigeração (3° a 5°C) em recipientes fechados (para evitar dessecamento). Ovos viáveis por alguns dias, já larvas de S. Stercoralis e Ancilostomídeos tornam-se inviáveis para a pesquisa; • Permanente: Soluções de formaldeído, álcool polinílico (PVA). Coloração: • Temporária: Solução de lodo (iodo de lugol). Coloração de ovos, cistos, larvas e trofozoítos; • Permanente: Método de tricrômio (mas simples), hematoxilina. Identificação de trofozoítos, ocasionalmente cistos e confirmação de espécie. Outras amostras • Urina; • Escarro - Larvas de Ascaris Lumbricoides, S. stercoralis e de Ancilostomideo; protozoários como Entamoeba histolytica. Examinado a fresco com solução de lugol; • Swab anal; • Secreção vaginal – T. vaginalis; • Conteúdo duodenal – larvas de S. stercoralis. Técnicas (incluem, condutas, reagentes, instrumentos) Flutuação: Baseia-se na diferença de densidade entre os ovos de helmintos, cistos de protozoários e a solução (ZnSO4 ou sacarose) de elevada densidade. Divide-se em simples ou por centrifuga. ✓ Vantagens: Formação na superfície do tubo de uma membrana clara com poucos detritos fecais e a remoção seletiva de ovos e cistos, mesmo quando em pequeno número no bolo fecal; ✓ Desvantagens: baixa especificidade para ovos “pesados”, a densidade dos regentes pode alterar a parede dos ovos e dos cistos; ✓ Tecnica de flutuação mais usada é a de FAUST ET. AL. Faust et.al. - Centrifugo-flutuação em sulfato de zinco (ZnSO4): Estruturas leves, alta carga parasitária. NÃO É POSSÍVEL USAR EM FEZES ESTEATORREICAS!!!!!!!!!! A técnica de Faust et.al., também chamada de centrifugo-flutuação em solução de sulfato de zinco, tem como principal vantagem a produção de esfregaços microscópicos relativamente livres de detritos fecais. Sedimentação: Baseia-se na sedimentação pela gravidade ou por centrifugação. ✓ Desvantagens: grande quantidade de detritos fecais no sedimento; ✓ Técnicas de sedimentação mais usadas: Lutz (Hoffman, Pons & Janer – HPJ), Ritchie Lutz ou HPJ - sedimentação espontânea em água. Descrição de um procedimento analítico: Colocar 3 a 10g de fezes num recipiente e dissolver com aproximadamente 50mL de água utilizando um bastão de vidro ou palito de madeira. Em um cálice de vidro próprio para esse método, coloca-se uma peneira com gaze dobrada em quatro e a suspenção de fezes já dissolvidas é coada. Deixar o cálice em repouso por no mínimo 1hra e máximo de 24hras e colher o sedimento da parte afunilada do cálice. Preparar dois esfregaços, um corado pela solução de iodo (Lugol) e outro não corado. Cobrir com lamínulas e observar ao microscópio. - O procedimento refere-se à técnica de Hoffman, Pons e Janer (HPJ). Métodos para o isolamento de larvas de nematoides: Pesquisa de estágios de evolução de larvas de S. stercoralis e de Ancilostomídeo. ✓ Material biológico analisado: fezes e escarro; ✓ Material fecal NÃO preservado (fezes/escarro frescos); ✓ BAERMANN e MORAES – Termotropismo e hidro tropismo positivo de larvas - Utiliza água aquecida. Para o diagnostico por EPF é usado a técnica de concentração - Tecnica da sedimentação espontânea em água -, sendo encontrado ovos. A técnica de Kato-Katz é a mais indicada para quantificar ovos de helmintos. Boas práticas laboratoriais relacionadas ao diagnostico parasitológico: Emprego de amostras múltiplas aumenta a sensibilidade do exame parasitológico de fezes (EPF), os cistos de protozoários e as larvas de helmintos são corretamente identificados através da coloração pela solução de iodo (Lugol). Observações: • As preservações temporárias (refrigeração a 4°C) ou permanente (ex. formaldeído a 10%) não são indicadas para o método de Bermann-Moraes; • O preservador formaldeído (5 a 10%) é amplamente utilizado em amostras fecais, possibilitando a pesquisa de estágios morfológicos de protozoários e helmintos. Método de Graham (ou fita adesiva ou anal swab) • Especialmente para Enterobius vermicularis; • Visualização de ovos até vermes adultos; • Coleta ideal: pela manhã, antes da higiene da área, sem ter “ido aos pés”. Métodos quantitativos: Os únicos parasitas humanos para os quais é possível correlacionar a produção de ovos com a carga parasitária são Ascaris lumbricoides, Trichuris trichiura, ancilostomídeos (Ancylostoma duondenale e Necator americanus) e Schistosoma mansoni. KATO-KATZ – quantificação de ovos de helmintos em amostras fecais. ✓ Usado para determinar a intensidade da infecção; ✓ NÃO há como usar fezes diarreicas; ✓ SEM emprego de concentração de amostras (DIRETO), com baixa quantidade de fezes (50/60mg); ✓ Lamínulas de celofane mergulhadas em solução de verde de malaquita e glicerina (24h antes); Verde de malaquita: confere proteção aos olhos durante o exame microscópico Glicerina: conserva as fezes e CLARIFICA as formas parasitárias. ✓ Laudo: nº de ovos encontrados x 24 (fatos) = ovos de ....../g fezes (OPG); ✓ Ovos por grama (OPG) é o número de ovos por grama de fezes e pode ser definido como um índice de densidade dos ovos nas fezes. Quando as amostras não podem ser examinadas no mesmo dia, devem ser guardadas em refrigerador e, se for necessário transportá-las para laboratórios distantes, deve-se adicionar formol 5-10%, de forma que cessem as fermentações, evitando-se a produção de gases que causaria a abertura do recipiente. A fixação com formol torna as amostras de fezes inadequadas para o exame de análise quantitativa de parasitos. Período de incubação: Decorre entre o tempo de infecção e o aparecimento dos primeiros sintomas clínicos. Período pré-patente: é o que decorre desde a infecção até o aparecimento das primeiras formas detectáveis do agente infeccioso. Zoonose: Doenças e infecções que são naturalmente transmitidas entre animais vertebrados e os humanos. Anfixenose: Doença que circula indiferentemente entre humanos e animais, isto é, ambos são hospedeiros. Antroponose: Doença exclusivamente humana. AÇÃO DOS PARASITOS SOBRE O HOSPEDEIRO: ▪ESPOLIADORA: Quando o parasito absorve nutrientes ou mesmo sangue do hospedeiro. Ex.: Ancilostomídeos ingerem sangue da mucosa intestinal. ▪ TÓXICA: Algumas espécies produzem enzimas ou metabólitos que podem lesar o hospedeiro. Ex.: as reações teciduais (intestino, fígado, pulmões) produzidas pelas secreções no miracídio dentro do ovo do Schistosoma mansoni. ▪ MECÂNICA: Algumas espécies podem impedir o fluxo de alimento, bile ou absorção alimentar. Assim, o enovelamento de A. lumbricoides dentro de uma alça intestinal, obstruindo-a. ▪ TRAUMÁTICA: É provocada, principalmente, por formas larvárias de helmintos, embora vermes adultos e protozoários também sejam capazes. Ex.: ação das ventosas dos Cestoda na mucosa intestinal. ▪ ENZIMÁTICA: É o que ocorre na penetração da pele por cercarias de S. mansoni NEMATÓIDES INTESTINAIS: Ascaris lumbricoides, Trichuris trichiura, Enterobius vermicularis, Ancilostomídeos, Strongyloides stercoralis. PRÁTICA: TÉCNICA DA SEDIMENTAÇÃO ESPONTÂNEA EM ÁGUA (HPJ) A ascaridiose é uma das helmintoses mais comuns no Brasil, sendo prevalente em outros países, principalmente em regiões subtropicais do planeta. Nas sociedades de baixo nível socioeconômico, sua prevalência ultrapassa 80% da população. O quadro clínico pode caracterizar-se por dor abdominal em cólica, náuseas, febre, dispneia, roncos e sibilos à auscult. Considerando a ascardiose e seu agente etiológico, durante o ciclo de vida do Ascaris lumbricoides, ocorre a passagem do parasita pelo intestino, pelo sangue e pelos pulmões. Ascaris lumbricoides é um parasito diagnosticado no EPF. Observações: • Para a coleta de Enterobius vermiculares se usa a técnica da fita gomada sobre a região perianal, sendo a fita estendida na lâmina do microscópio com lado adesivo para baixo; • Os exames de fezes visam revelar a presença de protozoários (trofozoítos e cistos) ou helmintos (ovos e larvas) habitualmente encontrados parasitando o sistema digestivo do homem. Morfologia: as larvas de Strongyloides stercoralis apresentam o vestíbulo bucal curto e primórdio genital nítido e as larvas de Ancilostomídeo apresentam vestíbulo bucal amplo e primórdio genital não identificável. Sobre a pesquisa de larvas de helmintos: Os métodos de pesquisa de ovos são inadequados ou deficientes para o diagnóstico de estrongiloides que deve ser preferencialmente feito pela busca de larvas ou nas fezes. A técnica de baermann-morares, para a pesquisa de larvas de helmintos, podem ser utilizadas apenas com fezes frescas. Ciclo de vida dos parasitos: Os parasitos causadores de teníase e da esquistossomose no ser humano possuem ciclo de vida heteróxeno, Ascaris lumbricoides apresenta ciclo de vida monoxenico. Enterobius vermicularis pode ser pesquisado pelo método de Graham. Ovo de ancilostomideo identificado pela metodologia de sedimentação espontânea, podendo ser isolada pelo método de Baermann-Moraes. TREMATÓDEOS DO FÍGADO, PULMÕES E SANGUE: Fascíola hepática e Schistosoma mansonia PRÁTICA: SEDIMENTO FECAL DE HELMINTOS - Método de KATO-KATZ Observações esquistossomose: • O homem é o principal hospedeiro definitivo e nele o parasita apresenta a forma adulta, reproduz-se sexuadamente e possibilita a eliminação dos ovos de S. mansoni no ambiente, pelas fezes. • O homem adquire a esquistossomose por meio da penetração ativa das cercarias na pele. • Quando o homem se infecta tem inicialmente uma fase inicial, pré-postural até 30 dias após a infecção depois de uma fase de migração do trematódeo, depois a fase aguda com início da oviposição, seguida pela fase crônica que pode durar vários anos • O contato com águas contaminadas por cercarias utilizadas para atividades profissionais ou de lazer, como banhos, pescas, lavagem de roupa e louça ou plantio de culturas irrigadas, com presença de caramujos infectados pelo S. mansoni, constitui risco para se adquirir a esquistossomose. • Schistosoma mansoni apresenta dois tipos de hospedeiro, um intermediário invertebrado (caramujo) e um definitivo vertebrado, o diagnóstico de eleição em seres humanos é parasitológico Fasciolose tem estágio de transmissão em metacercária e estágio de diagnostico laboratorial em pesquisa de ovos pelo diagnostico parasitológico. CESTOIDES INTESTINAIS: Taenia solium, Taenia saginata, H. nana e H. diminuta PRÁTICA: SEDIMENTO FECAL DE HELMINTOS Se você estiver realizando um exame parasitológico de fezes e visualizar ovos: um deles é oval ou redondo, 80um, membrana dupla, presença de oncosfera (embrião hexacanto) e outro esférico com 30-35um, casca protetora radiada (embrióforo) e dentro possui oncosfera (embrião hexacanto), o laudo do exame será com presença de ovos de Hymenolepis diminuta e de ovos de Taenia spp. − Ovos de Taenia spp. são constituídos por uma casca protetora, embrióforo, que é formado por blocos piramidais de quitina unidos entre si por uma substância (provavelmente proteica) cementante que lhe confere resistência no ambiente. − Taenia spp. ovos - são indistinguíveis, medem 30-35 micrômetros de diâmetro e são estriados radialmente. A oncosfera interna contém seis ganchos. − Hymenolepis diminuta: Ovos de formato oval, 80 µm, membrana dupla, presença de oncosfera. A cisticercose é adquirida por humanos através da ingestão acidental de ovos viáveis de Taenia solium através de infecção externa, autoinfecção interna e heteroinfecção. • Cisticercose é um quadro grave devido ao difícil diagnostico, causado pela ingestão do ovo da Taenia solium. Ovo libera oncosfera e libera o cisticerco, este causa tropismo cerebral – neurocisticercose. Ocorre também a autoinfecção externa através da ingestão de ovos que foram eliminados nas fezes, autoinfecção interna e a heteroinfecção, que seria a infeção sem ter teníase, somente cisticercose. • Teníase é causada pela ingestão de cisticercos de Taenia solium, nas fezes podem conter ovos e proglotes. • Taenia sagitata não causa cisticercose, somente Teníase, provém da carne bovina. Somente a Taenia solium causa cisticercose, esta é da carne suína. • Cisticerco – Verme adulto – Teníase • Ovo – Cisticerco – Cisticercose Observações gerais • Para identificação da motilidade dos trofozoítos intestinais é usada a técnica do método direto • Os trofozoítos predominam em fezes liquidas e o exame deve ser realizado em 30minutos • Os cistos de protozoários e as larvas de helmintos são corretamente identificados através da coloração pela solução de iodo (Lugol) • O método direto apresenta baixa sensibilidade, porém é indicado para a pesquisa de trofozoítos em fezes diarreicas • Colorações temporárias, como solução de iodo, são obrigatoriamente utilizadas para evidenciar ovos de helmintos ( ps: falso, pois ovos não precisam ser corados) • Os métodos da fita de celofane adesiva e transparente ou do swab anal são indicados para o diagnóstico de Enterobius vermicularis • O preservador/fixados formaldeído (5 a 10%) é muito utilizado em amostras fecais, possibilitando a pesquisa de estágios morfológicos de protozoários e helmintos. • A principal vantagem da técnica de Faust é a produção de esfregaços macroscópicos relativamente livres de detritos fecais • O método de Baermann-Moraes fundamenta-se no termo hidro tropismo positivo das larvas, nesse método não é necessário preservar as amostras fecais. Podem ser usadas fezes diarreicas e o exame microscópico deve ser realizado com coloração pela solução de iodo para diferenciação de larvas de Ancilostomídeos • Em relação a carga parasitária, o método de Kato-Katz fundamenta-se na quantificação dos ovos dos helmintos Ascaris lumbricoides, Trichuris trichiura, Schistosoma mansoni e Ancilostomídeos. Recomenda-se a utilização de amostras fecais frescas, o resultado final pode ser expresso em OPG (ovos por grama de fezes) desde que o n° de ovos visualizados no esfregaçoseja multiplicado pelo fator 24. O exame microscópico deve ser realizado com alta intensidade de luz • Ascaridose é o parasitismo desenvolvido no ser humano por um grande nematoide - Ascaris lumbricoides. Normalmente a única forma de infectante do parasito é o ovo embrionado, contendo uma larva de segundo estado e o diagnóstico é o encontro de ovos e vermes adultos nas fezes. A via migratória da larva pelo organismo humano deve obrigatoriamente passar pelos pulmões e o diagnóstico é encontro de larvas no escarro. O desenvolvimento dos ovos se dá no meio exterior (fora do hospedeiro0 e requer oxigênio e o diagnóstico é encontro de ovos nas fezes. O desenvolvimento sexual completa-se em cerca de dois meses, e após esse período as fêmeas começam a pôr ovos e o diagnóstico é encontro de larvas no escarro. • Ciclo de vida direto ou monóxeno: parasitos que utilizam apenas um hospedeiro. Ciclo de vida indireto ou heteróxeno: parasitos que necessitam de um ou mais hospedeiros intermediários. • Doenças parasitárias cujo ciclo de vida é monóxeno são ascaridíase e ancilostomose, identificadas em materiais biológicos como fezes e escarro • Strongyloides stercoralis, helminto intestinal que se beneficia da baixa condição imunológica do ser humano, determinando o alto parasitismo que pode levar o indivíduo à morte. Para pesquisa deste verme deve ser realizada através do método de Baermann-Moraes, a fim de encontrar larvas. • Na esquistossomose em área focal, o estágio de transmissão aos humanos são as cercarias, o estágio para o diagnostico são os ovos, a metodologia laboratorial utilizada é Kato-Katz (2) + Lutz (1) em até 6 amostras • Ancilostoma duodenale e Necator americanus são ancilostomideos, a infecção por N. americanus se dá por penetração cutânea das larvas filarioides e encontro de ovos ou larvas nas fezes • Um parasito da classe Cestoda é caracterizado pela ausência completa de aparelho digestivo, segmentação do corpo em proglotes, dotadas cada qual de um sistema reprodutor hermafrodita e presença de quatro ventosas do escolex. Esse parasita, na sua fase adulta, tem o ser humano como único hospedeiro e fase larvária deve parasitar obrigatoriamente os bovídeos, para completar seu ciclo de vida - Taenia saginata, encontro de ovos nas fezes • Parasitas cujo ciclo de vida é heteróxeno e os materiais biológicos a serem identificadas as estruturas parasitárias são: Teníase e esquistossomose - fezes e sangue • Trichuris trichiura tem estágio de transmissão com a ingestão de ovos e diagnóstico como a identificação dos ovos • Um parasito da classe cestoda é caracterizado pela ausência completa de aparelho digestivo, segmentação do corpo em proglotes, dotadas cada qual de um sistema reprodutor hermafrodita e presença de quatro ventosas no escolex. Esse parasita, na sua fase adulta, tem o ser humano como único hospedeiro e na fase larvária infecta animais e pode acidentalmente infectar seres humanos. - Taenia solium, encontro de proglotes e ovos nas fezes • Eosinofilia é uma das alterações hematológicas encontradas com maior frequência num paciente portador de estrongiloidose • Doenças parasitárias cujo ciclo é monoxenico e os materiais biológicos/ metodologia a serem identificadas as estruturas são: estrongoidose e enterobiose- líquido duodenal e anal swab. • Os procedimentos realizados durante a coleta e o transporte de amostras garantem a qualidade do material que será analisado. É necessário manter material acondicionado e, quando for recomendado, manter com refrigeração até o momento da realização do exame. Para isolamento de larvas não utilizar conservante químicos. O processamento e microscopia de amostras líquidas é até em 60 minutos de sua coleta • Exame parasitológico de fezes (EPF) - Padronização das formas de solicitação e orientação e entendimento, padronização dos procedimentos de coleta e registro das ocorrências fora o esperado, coleta de mais amostras com espaçamento entre elas, recusa de amostras inadequadas identificando as justificativas consistentes. • Zoonose: Doenças e infecções que são naturalmente transmitidas entre animais vertebrados e os humanos. Anfixenose: doença que circula indiferentemente entre humanos e animais, isto é, ambos são hospedeiros. Antroponose: Doença exclusivamente humana. Antropozoonose: doença primaria de animais que pode ser transmitida em humanos. • A transmissão das formas infectantes do parasita (ovos e larvas) acontece da seguinte forma: Pelas fezes, como parasitoses intestinais e em algumas parasitoses no fígado. • Para a coleta de exames de fezes pode ter até 6 amostra, usa-se laxante salino e não oleoso, pois pode parecer amebas por conta das gotículas. Não é necessário encher o pote, vasilhame deve estar limpo e seco. Na pesquisa de larvas não se deve refrigerar, pois perder o tropismo, necessitam de “calor”. • Nas fezes formadas contêm cistos e ovos, já nas liquidas trofozoítos • Os conservantes mantem a morfologia das estruturas parasitárias • Coloração temporária é a mais usada, serve para observação de estrutura parasitária Procedimento analítico: misturar bem uma parte de fezes com dez partes de água de torneira. Coar através de gaze dobrada quatro vezes em um tubo de centrifuga, centrifugar a 2500rpm por 1min. Descartar o sobrenadante. Ressuspender o sedimento com água de torneira. Completar o volume, centrifugar e decantar como anteriormente. Repetir a centrifugação e a lavagem até que o sobrenadante se apresente claro. Método da fita adesiva e transparente, vermes adultos fêmeas e ovos.
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