4 - CONTAGEM MANUAL DE LEUCOCITOS - Obrigatorio

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CONTAGEM MANUAL DE 
LEUCÓCITOS
Apresentação
1. OBJETIVO
Esta técnica permite realizar a contagem global dos leucócitos, também denominada de leucometria, 
que se refere ao estudo quantitativo de leucócitos em uma amostra de sangue total, utilizando 
câmara de Neubauer.
 
Ao final deste experimento, você deverá ser capaz de:
determinar o número de leucócitos em mm3 de uma amostra de sangue total utilizando a 
câmara de Neubauer;
•
realizar corretamente a diluição da amostra;•
identificar o local na câmara de Neubauer onde deve ser realizada a contagem de leucócitos;•
realizar os cálculos para fins de expressão dos resultados;•
identificar as possíveis interferências na contagem leucocitária.•
 
2. ONDE UTILIZAR ESSES CONCEITOS?
A contagem manual de leucócitos é necessária para verificar a possível exatidão do resultado 
obtido pelo equipamento de automação hematológica, pois, em algumas condições clínicas graves, 
como leucemias específicas, o equipamento de automação pode apresentar interferências na 
medida da concentração. Assim, a contagem utilizando câmaras de contagens de células, como a 
câmara de Neubauer, é recomendável para comprovar resultados obtidos por meio de contagem 
automatizada, sendo um teste complementar.
 
3. O EXPERIMENTO
Neste experimento será determinado o número de leucócitos em mm3 de uma amostra de sangue 
total, utilizando a câmara de Neubauer. Para isso, serão utilizados diversos insumos, tais como: 
amostra de sangue total coletada em tubo de coleta de 13x75 mm, com capacidade de aspiração de 
2 mL e contendo anticoagulante EDTA k2 a 15%; tubo de ensaio de 5 mL; reagente ou líquido de 
Turk; câmara de Neubauer e lamínula própria; micropipeta (de volume fixo) com capacidade para 
400 μL e sua respectiva ponteira; micropipeta (de volume fixo) com capacidade para 20 μL e sua 
respectiva ponteira; gaze; microscópio óptico.
 
4. SEGURANÇA
Nesta prática, serão utilizados luvas de procedimento, jaleco e óculos de proteção. Apesar de a 
prática gerar pouco risco para o aluno, esses equipamentos de proteção individual (EPIs) são 
essencias para o ambiente de laboratório. A luva irá evitar contaminação com o sangue, caso ele 
suje a mão, e o jaleco protege de respingos de sangue no corpo ou na roupa. O uso dos óculos de 
proteção impede que respingos da amostra de sangue tenham contato com os olhos.
 
5. CENÁRIO
O ambiente do experimento apresenta uma bancada de laboratório, câmara de Neubauer e sua 
respectiva lamínula, tubos de ensaio em um suporte, micropipetas de volumes de 20 μL a 400 μL e 
suas respectivas ponteiras (amarelas e azuis), gaze e microscópio óptico. Você deverá selecionar os 
materiais e utilizá-los de modo a garantir a correta execução dos experimentos.
Bons estudos.
Sumário teórico
Acesse o sumário:
 
 
1 ALGETEC – SOLUÇÕES TECNOLÓGICAS EM EDUCAÇÃO 
CEP: 40260-215 Fone: 71 3272-3504 
E-mail: contato@algetec.com.br | Site: www.algetec.com.br 
 
LABORATÓRIO DE HEMATOLOGIA 
CONTAGEM MANUAL DE LEUCÓCITOS 
 
CONTAGEM MANUAL DE LEUCÓCITOS 
 
 
 
Este procedimento é importante para o esclarecimento de processos infecciosos, 
leucopênicos, inflamatórios, tóxicos e leucêmicos, geralmente sendo usado como 
método confirmatório de quantificação leucocitária obtida por meio de equipamentos 
de automação hematológica. Os leucócitos, também conhecidos por glóbulos brancos, 
são células produzidas pela medula óssea e têm a função de defender o organismo em 
quadros de infecções e alergias. 
O aumento da concentração global de leucócitos (independentemente do tipo 
leucocitário que esteja em maior concentração) é chamado de leucocitose e pode estar 
relacionado a quadros de infecção, inflamação, leucemia, traumas, exercícios intensos 
ou estresse. A concentração global de leucócitos inferior ao valor de referência é 
denominada leucopenia e pode estar relacionada a tratamentos 
de quimioterapia ou radioterapia e à ocorrência de doenças imunológicas. Quando é 
solicitada a contagem diferencial de leucócitos por outra metodologia que não a citada 
neste procedimento, o seu resultado demonstrará aspectos mais específicos dos 
leucócitos e as diferentes proporções de seus tipos no sangue, podendo estar 
correlacionado a um padrão infeccioso. 
Para proceder à contagem global de leucócitos com a câmara de Neubauer, 
primeiramente é necessário realizar a diluição da amostra de sangue total a ser 
analisado. O sangue total (coletado em tubo contendo EDTA) é diluído com o líquido de 
Turk (composição: ácido acético glacial, solução aquosa de violeta de genciana e água 
destilada), que causa hemólise, mas não tem efeito sobre os leucócitos e cora 
(discretamente) os núcleos. 
 
 
 
 
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A contagem manual é uma técnica que permite a determinação (ao microscópio) 
do número de leucócitos por mm3 (concentração leucocitária) de uma amostra de 
sangue total utilizando a câmara de Neubauer (Figura 1). 
Este instrumento é uma lâmina grossa de vidro com 30 x 70mm de comprimento 
e 4mm de espessura, de formato retangular, com uma depressão central que contém o 
retículo de contagem celular (grade de contagem), utilizado para fazer a contagem de 
células ao microscópio, com auxílio de uma lamínula. 
A plataforma central da lâmina, onde encontra a área reticulada, é exatamente 0,1mm 
mais baixa que as duas laterais, onde se apoia a lamínula, deixando um espaço de 0,1mm 
de profundidade (Figura 2). 
 
 
Figura 1 – Representação da visão superior da câmara de Neubauer, da lamínula e da grade de contagem. 
 
No centro da câmara, existem linhas perpendiculares (chamadas de ranhuras) 
com marcações em quadrantes. A área reticulada da grade de contagem da câmara de 
Neubauer mede 3 mm X 3 mm, ou 9 mm2. Os nove quadrados maiores têm, cada um, 
1 mm X 1 mm, ou 1 mm2 de superfície. Cada quadrado externo de 1mm2 é subdividido 
em 16 quadrados de 0,25 mm x 0,25 mm, ou 0, 0625 mm2. 
 
 
 
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No caso da contagem leucocitária, estas células são contadas nos quatro 
quadrantes das extremidades (marcados com a letra W na grade de contagem 
representada na Figura 1), que são subdivididos em 16 campos de 0,25 mm cada. Após 
a devida diluição da amostra, uma lamínula é colocada sobre a câmara de Neubauer, 
cobrindo a área central da câmara, onde está a grade de contagem (espaço 
representado na Figura 2). A contagem é realizada ao microscópio, utilizando o aumento 
de 100x e de 400x. 
 
 
Figura 2 – Representação da visão lateral da câmara de Neubauer. 
 
 
 
 
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REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS 
 
 
 
BIONETWORK. Counting Cells with a Hemocytometer. 2012. (6m30s). Disponível em: 
https://www.youtube.com/watch?v=pP0xERLUhyc&t=269s. Acesso em: 2 set. 2020. 
 
CARVALHO, W. F. Técnicas médicas de hematologia e imuno-hematologia. 8. ed. Belo 
Horizonte: Coopmed, 2008. 
 
MOURA, Roberto de Almeida et al. Técnicas de laboratório. 3. ed. São Paulo: Atheneu, 
2008. 
 
MELO, C. P. A.; FRANCO, J. M.; GARCIA, T. F. P.; NEVES, P. A. Manual Roca Técnicas de 
Laboratório: sangue. São Paulo: Roca, Grupo Editorial Nacional, 2011. 
 
OLIVEIRA LIMA, A.; GRECO, J. B.; BENJAMIN SOARES, J.; CANÇADO, J. R.; GALIZZI, J. 
Métodos de laboratório aplicados à clínica: técnica e interpretação. 8. ed. Rio de 
Janeiro: Guanabara Koogan, 2001. 
 
 
 
 
Roteiro
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INSTRUÇÕES GERAIS 
 
 
1. Neste experimento, você irá realizar os procedimentos adequados para 
promover contagem global de leucócitos em amostra de sangue utilizando 
câmara de Neubauer. Dessa forma, você poderá determinar o número de 
leucócitos em mm³ de uma amostra de sangue com câmara de Neubauer e 
realizar diluição adequada, identificando possíveis interferências na contagem 
leucocitária. 
 
2. Utilize a seção “Recomendações de Acesso” para melhor aproveitamento da 
experiência virtual e para respostas às perguntas frequentes a respeito do 
VirtuaLab. 
 
3. Caso não saiba como manipular o Laboratório Virtual, utilize o “Tutorial 
VirtuaLab” presente neste Roteiro. 
 
4. Caso já possua familiaridade com o Laboratório Virtual, você encontrará as 
instruções para realização desta prática na subseção “Procedimentos”. 
 
5. Ao finalizar o experimento, responda aos questionamentos da seção “Avaliação 
de Resultados”. 
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RECOMENDAÇÕES DE ACESSO 
 
PARA ACESSAR O VIRTUALAB 
 
 
 
 
 
 
 
 
1. Caso utilize o Windows 10, dê preferência ao navegador Google Chrome; 
2. Caso utilize o Windows 7, dê preferência ao navegador Mozilla Firefox; 
3. Feche outros programas que podem sobrecarregar o seu computador; 
4. Verifique se o seu navegador está atualizado; 
5. Realize teste de velocidade da internet. 
 
Na página a seguir, apresentamos as duas principais dúvidas na utilização dos 
Laboratórios Virtuais. Caso elas não se apliquem ao seu problema, consulte a nossa seção 
de “Perguntas Frequentes”, disponível em: https://algetec.movidesk.com/kb/pt-br/ 
Neste mesmo link, você poderá usar o chat ou abrir um chamado para o contato com 
nossa central de suporte. Se preferir, utilize os QR CODEs para um contato direto por 
Whatsapp (8h às 18h) ou para direcionamento para a central de suporte. Conte conosco! 
ATENÇÃO: 
O LABORATÓRIO VIRTUAL DEVE SER ACESSADO POR COMPUTADOR. ELE NÃO DEVE SER 
ACESSADO POR CELULAR OU TABLET. 
O REQUISITO MÍNIMO PARA O SEU COMPUTADOR É UMA MEMÓRIA RAM DE 4 GB. 
SEU PRIMEIRO ACESSO SERÁ UM POUCO MAIS LENTO, POIS ALGUNS PLUGINS SÃO 
BUSCADOS NO SEU NAVEGADOR. A PARTIR DO SEGUNDO ACESSO, A VELOCIDADE DE 
ABERTURA DOS EXPERIMENTOS SERÁ MAIS RÁPIDA. 
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PERGUNTAS FREQUENTES 
 
 
1) O laboratório virtual está lento, o que devo fazer? 
 
a) No Google Chrome, clique em “Configurações” -> “Avançado” -> “Sistema” -> 
“Utilizar aceleração de hardware sempre que estiver disponível”. Habilite a 
opção e reinicie o navegador. 
 
b) Verifique as configurações do driver de vídeo ou equivalente. Na área de 
trabalho, clique com o botão direito do mouse. Escolha “Configurações 
gráficas” e procure pela configuração de performance. Escolha a opção de 
máximo desempenho. 
Obs.: Os atalhos e procedimentos podem variar de acordo com o driver de 
vídeo instalado na máquina. 
 
c) Feche outros aplicativos e abas que podem sobrecarregar o seu computador. 
 
d) Verifique o uso do disco no Gerenciador de Tarefas (Ctrl + Shift + Esc) -> 
“Detalhes”. Se estiver em 100%, feche outros aplicativos ou reinicie o 
computador. 
 
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2) O laboratório apresentou tela preta, como proceder? 
 
a) No Google Chrome, clique em “Configurações” -> “Avançado” -> “Sistema” -> 
“Utilizar aceleração de hardware sempre que estiver disponível”. Habilite a 
opção e reinicie o navegador. Caso persista, desative a opção e tente 
novamente. 
 
b) Verifique as configurações do driver de vídeo ou equivalente. Na área de 
trabalho, clique com o botão direito do mouse. Escolha “Configurações 
gráficas” e procure pela configuração de performance. Escolha a opção de 
máximo desempenho. 
Obs.: Os atalhos e procedimentos podem variar de acordo com o driver de 
vídeo instalado na máquina. 
 
c) Verifique se o navegador está atualizado. 
 
 
 
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DESCRIÇÃO DO LABORATÓRIO 
 
 
MATERIAIS NECESSÁRIOS 
 
• Câmara de Neubauer; 
• Microscópio; 
• Pipeta de 20 µL; 
• Pipeta de 400 µL; 
• Ponteiras; 
• Solução diluidora; 
• Tubo de coleta; 
• Tubo de ensaio. 
 
PROCEDIMENTOS 
 
1. SEGURANÇA DO EXPERIMENTO 
 
Coloque os equipamentos de proteção individual localizados no “Armário de EPIs”. Nesse 
experimento, é obrigatório o uso de jaleco, luvas, máscara e óculos. 
 
2. DILUINDO A AMOSTRA 
 
Dilua 20 µl da amostra em 400 µl da solução diluente no tubo de ensaio e, em seguida 
homogeneíze a solução. 
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3. FIXANDO A AMOSTRA NA CÂMARA DE NEUBAUER 
 
Preencha os retículos da câmara de contagem com a micropipeta. Feito isso, coloque a 
lamínula aderida firmemente à câmara. 
 
4. OBSERVANDO OS RESULTADOS 
 
Mova a câmara de Neubauer para o microscópio. Execute todas os ajustes necessários para 
visualização. Selecione a objetiva de 10x e 40x para contagem dos leucócitos em cada campo. 
Anote a contagem manual de leucócitos. 
 
5. AVALIANDO OS RESULTADOS 
 
Siga para a seção “Avaliação dos Resultados”, localizada na página 07 deste roteiro, e 
responda de acordo com o que foi observado no experimento, associando também com os 
conhecimentos aprendidos sobre o tema. 
 
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AVALIAÇÃO DOS RESULTADOS 
 
 
 
1. Analisando a quantidade global de leucócitos, a contagem manual realizada 
apresentou como normal, aumentada ou diminuída? 
 
 
 
2. O que espera observar quando o paciente possui leucocitose? E quando o 
paciente possui leucopenia? 
 
 
 
3. Qual objetivo de realizar a contagem absoluta de leucócitos? 
 
 
 
 
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TUTORIAL VIRTUALAB 
 
 
1. SEGURANÇA DO EXPERIMENTO 
 
Visualize o armário de EPIs clicando com o botão esquerdo do mouse na câmera com o 
nome “Armário de EPIs” localizada dentro do painel de visualização no canto superior 
esquerdo da tela. Se preferir, também pode ser utilizado o atalho do teclado “Alt+7”. 
 
 
 
 
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Abra o armário clicando com o botão esquerdo do mouse sobre as portas. 
 
 
 
Selecione os EPIs necessários para a realização do ensaio clicando com o botão esquerdo 
do mouse sobre eles. Nesse experimento, éobrigatório o uso de jaleco, luvas, máscara 
e óculos. 
 
 
 
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Feche o armário clicando com o botão esquerdo do mouse sobre as portas. 
 
 
 
 
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2. DILUINDO A AMOSTRA 
 
Visualize a bancada clicando com o botão esquerdo do mouse na câmera com o nome 
“Bancada” ou através do atalho do teclado “Alt+1”. 
 
 
 
Mova a micropipeta de 400 µL para solução diluente clicando com o botão direito do 
mouse sobre ela e selecione a opção “Colocar sobre a solução diluidora”. 
 
 
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Pressione o êmbolo da pipeta clicando com o botão esquerdo do mouse sobre ele. 
 
 
 
Coloque a micropipeta dentro da solução diluidora clicando com o botão direito do 
mouse sobre ela e selecione a opção “Colocar dentro da solução diluidora”. 
 
 
 
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Aspire 400 µL da solução diluente clicando com o botão direito do mouse sobre o 
êmbolo da pipeta. 
 
 
 
Remova a micropipeta da solução diluidora clicando com o botão direito do mouse 
sobre ela e selecione a opção “Remover da solução diluidora”. 
 
 
 
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Transfira a solução para o tubo de ensaio clicando com o botão direito do mouse sobre 
a micropipeta e selecione a opção “Colocar no tubo de ensaio”. 
 
 
 
Despreze o líquido no tubo de ensaio clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o 
êmbolo da micropipeta. 
 
 
 
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Mova a micropipeta para o suporte clicando com o botão direito do mouse sobre ela e 
selecione a opção “Retornar ao suporte”. 
 
 
 
Mova a micropipeta de 20 µl para o tubo de coleta clicando com o botão direito do 
mouse sobre ela e selecione a opção “Colocar sobre o tubo de coleta”. 
 
 
 
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Pressione o êmbolo da micropipeta clicando com o botão esquerdo do mouse sobre ele. 
 
 
 
Coloque a micropipeta dentro do tubo de coleta clicando com o botão direito do mouse 
sobre ela e selecione a opção “Colocar dentro do tubo de coleta”. 
 
 
 
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Aspire 20 µl da amostra de sangue clicando com o botão direito do mouse sobre o 
êmbolo da micropipeta. 
 
 
 
Remova a micropipeta do tubo de coleta clicando com o botão direito do mouse sobre 
ela e selecione a opção “Remover do tudo de coleta”. 
 
 
 
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Transfira a amostra para o tubo de ensaio clicando com o botão direito do mouse sobre 
a micropipeta e selecione a opção “Colocar no tubo de ensaio”. 
 
 
 
Despreze a amostra no tubo clicando com o botão esquerdo do mouse sobre o êmbolo 
da pipeta. 
 
 
 
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Retorne a micropipeta para o suporte clicando com o botão direito do mouse sobre ela 
e selecionando a opção “Retornar ao suporte”. 
 
 
 
Homogeneíze o tubo de ensaio clicando com o botão esquerdo do mouse sobre ele. 
 
 
 
 
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3. FIXANDO AMOSTRA NA CÂMARA DE NEUBAUER 
 
Mova a micropipeta de 20 µL para o tubo de ensaio clicando com o botão direito do 
mouse sobre ela e selecione a opção “Colocar sobre o tubo de ensaio”. 
 
 
 
Aspire 20 µL da amostra clicando com o botão direito do mouse sobre o êmbolo da 
pipeta. 
 
 
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Mova a micropipeta para a câmara de Neubauer clicando com o botão direito do mouse 
sobre ela e selecione a opção “Colocar sobre Neubauer”. 
 
 
 
Despreze a amostra na câmara de Neubauer clicando com o botão esquerdo do mouse 
sobre o êmbolo da pipeta. 
 
 
 
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Retorne a micropipeta para o suporte clicando com o botão direito do mouse sobre ela 
e selecione a opção “Retornar ao suporte”. 
 
 
 
Coloque a lamínula sobre a câmara de Neubauer clicando com o botão direito do mouse 
sobre ela. 
 
 
 
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4. OBSERVANDO OS RESULTADOS 
 
Mova a câmara de Neubauer para o microscópio clicando com o botão esquerdo do 
mouse sobre ela. 
 
 
 
Visualize o microscópio clicando com o botão esquerdo do mouse na câmera com o 
nome “Microscópio” ou através do atalho do teclado “Alt+6”. 
 
 
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Movimente as lentes objetivas pressionando com o botão esquerdo do mouse sobre o 
revólver e movimentando o cursor à direita ou à esquerda. 
 
 
 
Se for necessário ajustar a iluminação, movimente o diafragma pressionando com o 
botão esquerdo do mouse sobre ele e arrastando o cursor à direita ou à esquerda. 
 
 
 
 
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Realize o ajuste do foco pressionando o botão esquerdo do mouse sobre o parafuso 
macrométrico e movimentando o cursor à direita ou à esquerda. 
 
 
 
Para movimentar a lâmina à direita ou à esquerda, gire a peça inferior do charriot 
pressionando com o botão esquerdo do mouse sobre ela e movimentando o cursor à 
direita ou à esquerda. 
 
 
 
 
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Visualize a lâmina clicando com o botão esquerdo do mouse em “Ver ocular”. 
 
 
 
Realize as configurações necessárias no microscópio e observe as células na câmara de 
Neubauer utilizando as objetivas de 10x e 40x. 
 
 
 
 
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5. AVALIANDO OS RESULTADOS 
 
Siga para a seção “Avaliação dos Resultados”, localizada na página 07 deste roteiro, e 
responda de acordo com o que foi observado nos experimentos, associando também 
com os conhecimentos aprendidos sobre o tema. 
 
Pré Teste
1) 
A contagem de leucócitos pode ser feita por métodos manuais ou automatizados, 
apresentando grande importância clínica para o diagnóstico e o prognóstico, sendo mais 
frequentemente realizada por equipamentos automatizados. Quando necessário, a 
contagem é confirmada pelo método manual. Ao aumento do número de leucócitos dá-se o 
nome de:
A) leucograma; 
B) leucocitose;
C) leucopenia. 
2) 
Para a contagem global de leucócitos, realizada manualmente em câmara de Neubauer, é 
padronizado que a amostra de sangue total seja diluída quantas vezes?
A) 20 vezes;
B) 200 vezes;
C) 2.000 vezes.
3) 
A contagem global de leucócitos pode ser realizada manualmente utilizando-se os seguintes 
instrumentos e equipamentos laboratoriais:
A) lâmina de microscopia com as células coradas utilizando corante panótico e observadas ao 
microscópio com auxílio da lamínula sobre o esfregaço na lâmina; 
B) câmara de Neubauer com as células tratadas com líquido de Turk e observadas ao 
microscópio com a lamínula;
C) lâmina de microscopia e líquido de Gower.
4) 
Para contagem manual de leucócitos na câmara de Neubauer, é padronizada a contagem 
utilizando o microscópio. Qual aumento microscópico é utilizado?
A) O aumento de 10 vezes;
B) O aumento de 400 vezes com lamínula;
C) O aumento de 1.000 vezes sem óleo de imersão.
5) 
Para a contagem manual de leucócitos em câmara de Neubauer, a amostra de sangue total 
deve ser previamente coletada em tubo contendo:
A) agel ativador;
B) EDTA;
C) citrato de sódio.
Experimento
* Este laboratório também está disponível para dispositivos Android.
Conteúdo interativo disponível na plataforma de ensino!
Pós Teste
1) Atualmente, no laboratório de análises clínicas, muitos procedimentos são automatizados, o 
que agiliza a rotina e reduz as possibilidades de erro. No entanto, em algumas condições 
específicas, faz-se necessária a confirmação da leucometria por meio do método manual de 
contagem de leucócitos. Considere que o procedimento de diluição da amostra foi 
adequadamente realizado, seguindo o padrão. Utilizando a imagem a seguir, calcule o 
número de leucócitos em mm3 (concentração leucocitárida amostra representada na 
imagem:
A) 30.420 leucócitos/mm3;
B) 36.350 leucócitos/mm3;
C) 40.500 leucócitos/mm3.
2) As figuras a seguir representam a grade de contagem da câmara de Neubauer. A contagem 
de leucócitos deve ser corretamente realizada na região marcada em vermelho na figura:
 A) 
 B) 
 C) 
3) Qual solução diluente é recomendada para o procedimento contagem manual de leucócitos?
A) Reagente de Turk;
B) Reagente de Gower;
C) Reagente panótico.
4) Cada quadrante de 1mm, no qual é realizado a contagem de leucócitos na grade de 
contagem da câmara de Neubauer, apresenta:
A) 16 quadrantes de 0,2mm;
B) 25 quadrantes de 0,2mm;
C) 16 quadrantes de 0,25mm.
5) A conversão da contagem global de leucócitos, expressa em milímetros cúbicos, considera 
os seguintes fatores, EXCETO:
A) a distância de 0,1mm entre a lamínula e a grade de contagem;
B) a espessura do vidro da câmara de Neubauer;
C) a diluição da amostra.