Microbiologia

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Microbiologia
bactérias
- organismos simples (microscópios)
- reprodução sexuada (doa DNA para outra bact.) ou assexuada (duplica mat genético e se
divide em duas)
- extremamente adaptáveis
- unicelulares
- procariontes (sem carioteca, com nucleóide)
- parede celular (peptideoglicano)
nucleoíde: condensado de DNA
plasmídeo: segmentos de DNA fora do nucleoíde (troca de mat. genético, duplicação)
ribossomo: produção e síntese de proteínas
envelope celular: proteção e separação entre meio externo e interno da bactéria
pili sexual: utilizados para troca de DNA
cápsula bacteriana: camada rígida no exterior da parede celular de algumas bactérias que
atuam como proteção, inibindo a fagocitose de macrófagos e neutrófilos (principais
bactérias patogênicas)
parede celular: estrutura rígida, resistente e dá formato a bactéria (constituída de
peptidoglicano)
bactérias aeróbias: precisam de oxigênio (pele, sistema respiratório)
bactérias anaeróbicas: dificuldade de viver ou crescer na presença de oxigênio (tecidos
profundos, feridas)
morfologia de bactérias
cocos (arredondados)
colônias:
- diplococos
- estreptococos
- estafilococos
bacilos (bastonetes)
espirilos (ondulados)
vibriões (vírgulas)
Louis Pasteur
- teoria microbiana (microrganismos terem relação com as doenças)
- pasteurização (processo usado em alimentos para destruir microrganismo patogênicos)
- fermentação e decomposição de alimentos
- vacina anti rábica
- estudos sobre doenças infecciosas, meios de contágio, prevenção e controle
Robert Koch
- técnicas para obtenção de culturas puras
- técnicas de coloração
- postulado de Koch
- estudo com a bactéria da tuberculose (prêmio nobel, “bacilo de koch”)
Postulado de Koch
consiste na sequência de procedimentos utilizados para estabelecer uma relação causal
entre um microrganismo e uma doença (4 etapas)
1- associação constante
observação de sintomas e sinais, o microrganismo deve estar sempre presente nas lesões
das plantas doentes
2- cultura pura
isolamento de microrganismos, ele deve crescer em um meio de cultura pura
3- reproduzir os sintomas
o microrganismo isolado deve reproduzir os sintomas quando inoculado em uma planta
sadia
4- isolamento
o microrganismos deve ser reisolado da planta inoculada artificialmente e corresponder, em
todas as características, com o isolado das lesões
coloração
as bactérias podem ser divididas em dois grupos baseado na composição de suas paredes:
- GRAM positivas
- GRAM negativas
o método de coloração de Gram consiste na capacidade das paredes celulares de bactérias
gram positivas reterem o corante cristal violeta no citoplasma durante um tratamento com
etanol-acetona enquanto que as paredes celulares de bactérias gram negativas não
conseguem.
gram positiva: parede celular muito espessa, absorve muito o corante violeta e quando
joga a fucsina, já está corado de roxo
gram negativa: parede celular mais fina, mais complexa, por ser mais fina o álcool acaba
descolorindo o corante violeta e a fucsina acaba colorindo no tom avermelhado/rosado
como é feita a coloração?
- corar a lâmina com cristal violeta
- cobrir com lugol (iodo, para fixação)
- descorar com álcool acetona
- corar com fucsina
bactéria gram neutra -> possui camada lipídica/gordura, que não consegue fazer
coloração pelo método de gram
nesse caso utiliza-se do método de coloração BAAR (bacilo álcool ácido resistente),
técnica de Ziehl Neelsen
- corar a lâmina com fucsina
- aquece a lâmina (derreter a gordura)
- descorar com álcool com HCl a 3% (álcool ácido)
- corar com azul de metileno
-> corar com azul de metileno faz com que o fundo do esfregaço fique corado em azul
também
Meio de cultura
Ágar Mac Conkey
só cresce bacilos gram negativos. (seletivo)
é um meio seletivo e diferencial
- meio avermelhado (lactose positiva)
- meio acastanhado (lactose negativa)
As bactérias gram-negativas que são capazes de fermentar a lactose (um ingrediente do
Ágar MacConkey) produzem colônias rosas, enquanto aquelas incapazes de fermentar a
lactose produzem colônias incolores.
diferencial: utilizado para diferenciar microrganismos, a presença de determinados
corantes ou de produtos químicos nos meios produzirão certas alterações características ou
padrões de crescimento
Curva de Crescimento Bacteriano (sistema fechado)
fase lag: tempo de adaptação (4h pra se adaptar no meio de cultura)
log: onde mais cresce
Métodos gerais de cultivo
- esterilizar no bico de bunsen a agulha e a alça de níquel-cromo antes e após qualquer
cultivo
- abrir os recipientes próximo ao bico de bunsen
- fazer a coleta (raspando) e o depósito do material nas placas (depositando esfregando em
movimentos circulares)
Substâncias que são acrescentadas
- cristal violeta (na composição de macconkey ajuda a inibir gram +, que dá a coloração
acastanhada, crescendo apenas gram -)
- verde brilhante (também inibe gram +, crescendo só gram -)
principalmente usado para detecção e isolamento de salmonella
- sais biliares (acrescenta para crescer gram +, portanto inibe gram -)
Ágar Nutriente
estudo geral do crescimento bacteriano
isolamento de bactérias não exigentes
Ágar MacConkey
isolamento de bactérias gram negativas
diferenciação de lactose-fermentadoras e não fermentadoras
Ágar Manitol Salt
isolamento e identificação de Staphylococcus (cocos Gram +)
avaliação da capacidade de bactérias crescerem em altas concentrações de sal
Ágar Mueller Hinton
é utilizado para testes de sensibilidade aos antimicrobianos (TSA), um teste para verificar se
uma determinada bactéria em análise é ou não é sensível a antibióticos específicos.
é um meio não seletivo
maioria das bactérias gram + são mais sensíveis aos antibióticos
mais usado para determinar a sensibilidade das gram -
Isolamento ou Características do meio de cultura
característica da colônia
Técnica de Semeadura (por esgotamento)
- fazer a desinfecção da área de trabalho e higienizar as mãos
- esterilizar a alça
- com a alça esterilizada, tocar levemente uma colônia em meio sólido na placa de petri que
contém diferentes microrganismos, garantindo que somente o microrganismos desejado
seja inoculado (trabalhar sempre na área de segurança, 10cm ao redor da chama)
- inocular a cultura em outra placa de petri estéril, fazendo estrias múltiplas (estriar metade
da placa em movimentos de zig zag)
- girar a placa em 90 graus e estriar até metade (¼ da placa)
- girar mais 90 graus e estriar o restante
- esterilizar a alça e identificar a placa
Métodos de análise
método quantitativo: contagem de quanto cresceu (unidade de colônia) UFC / por ml (de
material semeado)
diluição
diluição 1:5 (1 para 5)
Calcule UFC/ml da amostra quantitativa abaixo, considerando que foi utilizado 10 ul
(microlitros) p/ diluição
1ml - 1000ul
10-¹ - incontáveis x - 10ul -> 0,01
10-² - 94
10-³ - 50 fórmula: n de colônias X n da diluição 10-² = 100
volume 94 X 100 = 940.000 = 9,4 .10-5
0,01