microscopia

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Como as células podem ser estudadas
Preparados Temporários (Estudos de Células Vivas): Corantes supravitais.
 Preparados Permanentes (Células Mortas): Fixação e coloração.
Técnicas de coleta
Esfregaço: Células livres presentes nos fluidos corpóreos (sangue, linfa, sêmem, líquor, hemolinfa);
Espalhamento: Consiste em promover uma raspagem das camadas superficiais das mucosas Ex.: mucosas vaginais ou bucais;
Montagem total (à fresco ou não): Ex.: Órgão inteiro de insetos, folha de uma planta;
Corte histológico: cortes extremamente finos (micrômetros)
COLORAÇÃO
 Corantes ácidos têm maior afinidade por moléculas básicas presentes em algumo proteínas acidófilas.
 As células e as estruturas dos tecidos são transparentes e Incolores com indice de refração muito
próximo, o que dificulta a sua observação.
 Recorre-se à utilização de corantes histológicos para evidenciar estas estruturas.
 Corantes básicos têm maior afinidade por moléculas ácidas como o DNA e o RNA que são estruturas basofilas.
Reações de acidofilia e basofilia
-Afinidade por corantes ácidos (proteinas básicas citoplasmáticas) - ACIDÓFILAS
 -Afinidade por corantes básicos (DNA, RNA, glicoproteinas ácidas, Pectatos e polissacarideos ácidos) - BASÓFILAS
"A coloração acentua a absorção de luz pelo material"
•Corantes - moléculas orgânicas que apresentam em sua estrutura duplas ou triplas ligações, as quais interagem com a luz dotando os corpos de 
capacidades absortivas: Grupo Cromofórico.
"Diferentes componentes celulares podem ser seletivamente corados"
Métodos de fixação
FÍSICOS:Calor - Fixação de bactérias leveduras
QUÍMICOS-Substâncias quimicas que preservam a estrutura e composição química dos tecidos.
Processamento de material biológico para microscopia óptica
 FIXAÇÃO DE TECIDOS
 Preservação das estruturas o mais semelhante à sua situação in vivo
Fatores que afetam a fixação
DESIDRATAÇÃO
DIAFANIZAÇÃO
Álcoois (metanol, etanol)
 Fixadores com mercúrio (Zenker)
 Fixadores com ácido pícrico (Bouin)
 Glutaraldeído
 Formaldeído
 Tetróxido de ósmio
 Consistência "endurecer os tecidos e as células"
 Impedir a autolise
 Impedir a atividade e a proliferação de bactérias
 Resistência às etapas seguintes da técnica citológica
 Aumentar a afinidade das estruturas celulares pelos corantes citológicos
 ph;
 Osmolaridade;
 Velocidade de penetração dos fixadores (2-3 mm espessura);
Volume de fixador;
Concentração do fixador;
Temperatura;
Consiste na remoção da água livre do tecido fixado, por ação do álcool.
A maior parte dos meios de inclusão são insolúveis em água, o que obriga a proceder a uma desidratação das amostras a incluir.
Série de álcoois de concentração crescente: 70°, 95° e 100°
Passagem dos fragmentos de tecido fixados e desidratados por uma substância diafanizadora miscível com a substância de inclusão.
Ex: Xilol, Toluol, Benzol
INCLUSÃO
O tecido é colocado em suportes metálicos cheios de parafina líquida, que depois de solidificar permite cortar o tecido em secções finas.
os tecidos tém de ser alinhados e orientados de acordo com as suas características e objetivos do trabalho.
IMPREGNAÇÃO
Infiltração do tecido por uma substância impregnante (parafina líquida). Este procedimento é feito na estufa.
CORTE
POLIMERIZAÇÃO
A parafina solidifica à temperatura ambiente mas a polimerização é feita normalmente no frio.
APÓS O CORTE
Tipos de microscopia
Microscopia Óptica
A peça fica com aspecto mais claro e translúcida
 Corte transversal
 Corte longitudinal
 Corte obliquo
 Os blocos incluídos são cortados em micrótomos
 A espessura do corte deve estar compreendida entre 3 a 10 um
Colocam-se as secções a flutuar em banho-maria
Colocam-se os cortes numa lâmina
Estufa
Microscopia Eletrônica
Amplia um objeto a ser estudado.
Funciona com um conjunto de lentes que atuam nessa ampliação.
Pode usar iluminação natural ou artificial.
Possui um sistema mecânico que suporta e permite controlar o sistema óptico que atua na ampliação das imagens.
Oculares: Ampliam a imagem fornecida pelo sistema de objetivas.
Braço: Suporta a platina e ao revólver.
Canhão (Tubo): Serve de suporto ao sistema ocular.
Objetivas: Ampliam a imagem do objeto que está sendo observado
Revólver: serve de suporte às objetivas e permite a mudança delas.
Platina:Serve de suporte para a colocação do material que vai ser observado. Observe que a mesma apresenta uma abertura central para a passagem 
da luz.
Fonte de Luz: Pode ser natural quando se usa um espelho refletor ou artificial.
Condensador: Distribui a luz que atravessa o diafragma.
Diafragma: regula a intensidade de luz captada da fonte luminosa. Observe que o mesmo apresenta um pino que ao ser manipulado abre ou fecha o 
mecanismo central.
Base ou pé: Suporte de todos os elementos do microscópio.
Parafusos Macrométrico e Micrométrico: Permitem movimentos de maior ou menor amplitude, afastando ou aproximando a preparação estudada.
CUIDADOS COM O MICROSCÓPIO
Eucariotas 
Procariotas
 Transportá-lo com ambas as mãos, apoiando a base numa delas e segurando o braço com a outra.
 Ao colocá-lo sobre a mesa, mantê-lo a alguma distância do bordo.
Evitar molhá-lo ao usar preparações temporárias.
As lentes São peças muito caras. Para as limpar, deve usar a flanela que normalmente acompanha o aparelho.
Após a utilização, encaixar a objetiva de menor ampliação alinhada com a ocular.
1. Possuem carioteca.
2. Podem ser animais ou vegetais.
3. Podem ser uni ou pluricelulares.
4. Ricos em organelas.
1. NÃO Possuem carioteca.
2. Todos são UNICELULARES.
3. NÃO possuem organelas.
4. EX. BACTÉRIAS.