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MICROBIOLOGIA CIÊNCIAS BIOLÓGICAS | NÚCLEO COMUM CECEN | CBIO | UEMA | SÃO LUÍS - MA METABOLISMO DE MICRORGANISMOS: FUNGOS E BACTÉRIAS PROF. DR. THIAGO ANCHIETA DE MELO RESPONSÁVEL: OBJETIVO Dialogar sobre os principais pontos que envolvem as funções metabólicas executadas pelas populações microbianas ROTEIRO 1. CRESCIMENTO DE FUNGOS E BACTÉRIAS 2. METABOLISMO 3. VISÃO SIMPLIFICADA DO METABOLISMO CELULAR 4. METABOLISMO PRIMÁRIO 5. METABOLISMO PRIMÁRIO - FERMENTAÇÃO 6. METABOLISMO SECUNDÁRIO 7. INFLUÊNCIA DE FATORES FÍSICOS NO METABOLISMO DE FUNGOS E BACTÉRIAS 8. E OS VÍRUS? CRESCIMENTO DE FUNGOS E BACTÉRIAS 1 2 Liberação de enzimas Absorção dos produtos solubilizados CRESCIMENTO DE FUNGOS E BACTÉRIAS absorção de nutrientes Exoenzimas Enzimas extracelulares que degradam moléculas orgânicas complexas em moléculas simples, assimiláveis pelos microrganismos Celulose Glicose Proteínas Aminoácidos Amido Glicose Celulases Proteinases Amilases CRESCIMENTO DE FUNGOS E BACTÉRIAS DIGESTÃO REALIZADA POR MICRORGANISMOS absorção de nutrientes A digestão de polímeros por microrganismos é um processo enzimático extracelular METABOLISMO SOMA TOTAL DE TODAS AS REAÇÕES QUÍMICAS QUE SUPORTAM A VIDA CATABOLISMO (reações exergônicas – quebra) ANABOLISMO (reações endergônicas – síntese) VISÃO SIMPLIFICADA DO METABOLISMO CELULAR Nutrientes para biossíntese Anabolismo (biossíntese) Macromoléculas e outros componentes celulares Substâncias químicas / luz (fonte de energia) Descarte (produtos por fermentação, ácidos, álcoois, CO2, etc) Energia para motilidade, transporte de nutrientes, etc. Energia para biossíntese Toda a vida no planeta depende, em última instância, da atividade dos microrganismos “Unidade em bioquímica” – muitos dos processos bioquímicos que ocorrem nos microrganismos são, essencialmente, os mesmos em todas as formas de vida Metabolismo primário x Metabolismo secundário Célula METABOLISMO PRIMÁRIO METABOLISMO DO CARBONO E ENERGÉTICO - Glicólise - Fermentação - Respiração - Ciclo do ácido cítrico (tricarboxílico) - Cadeia de transporte de elétrons - Gliconeogênese METABOLISMO DO NITROGÊNIO - Catabolismo do nitrogênio - Anabolismo do nitrogênio - Assimilação de amônia - Biossíntese de aminoácidos - Biossíntese de nucleotídeos SÍNTESE DE MACROMOLÉCULAS - DNA - RNA - Proteínas - Polissacarídeos - Quitina - β-glucanas - Glicogênio METABOLISMO PRIMÁRIO Moléculas estruturais Produtos do metabolismo primário METABÓLITOS PRIMÁRIOS - Moléculas de função conhecida - Estrutura de hifas e função estrutural em geral - Metabolismo energético - Regulação do metabolismo - Intermediários na biossíntese de compostos - Ampla ocorrência na natureza Fermentação alcoólica/ lática METABOLISMO PRIMÁRIO - FERMENTAÇÃO Degradação parcial, anaeróbia de glicose a CO2 e etanol METABOLISMO PRIMÁRIO - FERMENTAÇÃO Representação diagramática da levedura Saccharomyces cerevisiae (cerca de 5 µm). W – parede celular; Vac – vacúolo central; BS – cicatriz de brotamento; M – mitocôndria; L – corpúsculo de lipídio; G – complexo de Golgi; ER – retículo endoplasmático; V – vesícula; SPB – “spindle pole-body” equivalente aos centríolos em outros eucariotos; N – núcleo. Adaptado de Deacon (1997). Levedura Saccharomyces cerevisiae Formas leveduriformes não são fundamentalmente diferentes das hifas, mas apresentam uma forma de crescimento diferente METABOLISMO PRIMÁRIO - FERMENTAÇÃO PRODUÇÃO DE ÁLCOOL Fonte de carboidratos complexos Açúcares fermentáveis simples 2 CO2 + 2 C2H5OH Enzimas (fungos) Enzimas (levedura) METABOLISMO SECUNDÁRIO METABÓLITOS SECUNDÁRIOS - Derivam-se a partir de diferentes intermediários do metabolismo primário - Antibióticos - Toxinas - Pigmentos - Hormônios - Frequentemente sem função conhecida - Ocorrência restrita a poucas espécies ou gêneros - Normalmente produzidos após a paralização do crescimento Um metabólito secundário não é essencial para o crescimento vegetativo de um microrganismo em cultura pura METABOLISMO SECUNDÁRIO CRESCIMENTO DE UM FUNGO FILAMENTOSO EM MEIO DE CULTIVO LÍQUIDO * Trofofase – fase de “alimentação” – caracterizada pelo metabolismo primário / crescimento do microrganismo **Idiofase – metabolismo secundário – declínio da taxa de crescimento e início da reprodução – produção de metabólitos secundários METABOLISMO SECUNDÁRIO ANTIBIÓTICO ANTIBIÓTICO - Produto metabólico de um organismo que é prejudicial ou inibidor de certos microrganismos, em concentrações muito pequenas Origem dos principais antibióticos METABOLISMO SECUNDÁRIO ANTIBIÓTICO Antibióticos beta-lactâmicos É o grupo de antibióticos mais utilizado METABOLISMO SECUNDÁRIO ANTIBIÓTICO Penicilinas Isoladas por Fleming em 1929 – Penicillium notatum Seletivas para bactérias Gram-positivas, diplococos Gram- negativos (Neisseria) Neisseria sp. Núcleo básico da molécula: Ácido-6- aminopenicilâmico As diferentes penicilinas se diferenciam através das cadeias laterais METABOLISMO SECUNDÁRIO ANTIBIÓTICO Penicilinas A carbenicilina pertence ao grupo das penicilinas antiestafilocócicas, pois foi desenvolvida para o tratamento de infecções causadas por estafilococos produtores de b- lactamases. É ativa contra estafilococos, microrganismos sensíveis e resistentes à penicilina, Streptococcus pyogenes e Streptococcus pneumoniae A amoxicilina – conhecida popularmente como “amoxilina” – é um medicamento antibiótico usado no tratamento de diversas infecções bacterianas, como pneumonia, amigdalite e problemas no trato genitourinário, a exemplo de infecção urinária Ampicilina é um antibiótico utilizado para combater infecções do trato urinário, respiratório, digestivo, biliar e infecções da boca, resultantes de extrações infectadas e outras infecções cirúrgicas, causadas por bactérias do grupo dos Enterococos, Haemophilus, Proteus, Salmonella e E. coli Infecção óssea; infecção articular; infecção intra-abdominal; infecção pélvica em mulheres; pneumonia bacteriana; septicemia bacteriana; infecção da pele e dos tecidos moles; profilaxia cirúrgica em: cirurgia colorretal, histerectomia abdominal e cesariana de alto risco. Inibe a síntese da membrana celular da bactéria METABOLISMO SECUNDÁRIO TOXINAS Compostos que causam uma condição patológica em algum hospedeiro, seja ele planta ou animal Pode envolver: - Invasão do hospedeiro pelo fungo (parasitismo) - Ingestão do fungo (“mushroom poisoning”) - Ingestão de produtos sobre os quais o fungo cresceu (“food poisoning”; micotoxicose) - Respostas alérgicas METABOLISMO SECUNDÁRIO TOXINAS Toxinas – natureza química METABOLISMO SECUNDÁRIO TOXINAS Toxinas – natureza química Esporodesmina (Aspergillus sp.) α-Amanitina (Amanita sp.) Esporodesmina – (trp/ala) – fotossensibilização α-Amanitina – (peptídeo cíclico 8 a.a.) – inibidor RNA polimerase (RNAm) METABOLISMO SECUNDÁRIO TOXINAS Toxinas – natureza química METABOLISMO SECUNDÁRIO TOXINAS Toxinas – natureza química Zearalenona (Fusarium sp.) Fusicoccina A (Fusicoccum sp.) Zearalenona – (policetídeo) – atividade estrogênica em animais Fusicoccina A – (terpenóide) – translocada pelo xilema / aumenta o volume celular / altera a abertura dos estômatos METABOLISMO SECUNDÁRIO TOXINAS Identificação de Toxinas 1) Produção da toxina em cultura pura 2) Bioensaio quantitativo 3) Fonte padrão de toxina para efeito de comparação (potência relativa) METABOLISMO SECUNDÁRIO TOXINAS Identificação de Toxinas Postulados de Koch Bioensaios - Animais - Alimentação / injeção – sobrevivência dos indivíduos - Testes derme – inflamação / necrose - Plantas - Mancha foliar (injúria + toxina = área necrótica) - Liberação de eletrólitos - Inibição do crescimento METABOLISMO SECUNDÁRIO TOXINASFitotoxinas (toxinas produzidas por fitopatógenos) Produtos químicos de fungos e bactérias, os quais mostram-se tóxicos para plantas superiores - Afetam o metabolismo da planta hospedeira, podendo causar a morte - Não agem sobre a integridade da parede celular - Geralmente, são de baixo peso molecular - Ativas em baixas concentrações - Não exibem ação enzimática ou hormonal METABOLISMO SECUNDÁRIO TOXINAS - FITOTOXINA Fitotoxinas (toxinas produzidas por fitopatógenos) Produtos químicos de fungos e bactérias, os quais mostram-se tóxicos para plantas superiores - Afetam o metabolismo da planta hospedeira, podendo causar a morte - Não agem sobre a integridade da parede celular - Geralmente, são de baixo peso molecular - Ativas em baixas concentrações - Não exibem ação enzimática ou hormonal METABOLISMO SECUNDÁRIO TOXINAS - FITOTOXINA Sarna comum – doença em batata Agente causal – bactéria Streptomyces sp. (mais comum é a espécie S. scabies) METABOLISMO SECUNDÁRIO TOXINAS - FITOTOXINA Taxtomina A – fitotoxina Importante para a colonização dos tecidos pela bactéria e manifestação dos sintomas da doença (fator primário à patogenicidade) METABOLISMO SECUNDÁRIO TOXINAS - FITOTOXINA Produção da taxtomina METABOLISMO SECUNDÁRIO TOXINAS - FITOTOXINA Produção da taxtomina METABOLISMO SECUNDÁRIO TOXINAS - FITOTOXINA Produção da taxtomina | TAXTOMINA A: produção por diferentes isolados da bactéria 16 – altamente produtor 79 – Intermediário 26 – Pouco produtor METABOLISMO SECUNDÁRIO TOXINAS - FITOTOXINA TAXTOMINA A: APLICAÇÕES Raphanus sativus Arabidopsis sp. Triticum sp. Ação sobre espécies vegetais METABOLISMO SECUNDÁRIO TOXINAS - FITOTOXINA TAXTOMINA A: MECANISMOS DE AÇÃO Alterações no processo de divisão mitótica Bloqueio da síntese de celulose Alterações no fluxo de Ca2+ e H+ na membrana plasmática Morte celular programada METABOLISMO SECUNDÁRIO TOXINAS - FITOTOXINA TAXTOMINA A: REAÇÃO DE CULTIVARES DE BATATA Secções de tubérculos de batata 24 horas Taxtomina A Lesões necróticas METABOLISMO SECUNDÁRIO TOXINAS - FITOTOXINA TAXTOMINA A: REAÇÃO DE CULTIVARES DE BATATA RESISTÊNCIA SENSIBILIDADE - + + - Ágata Bintije Monalisa Asterix Mondial Atlantic METABOLISMO SECUNDÁRIO TOXINAS - MICOTOXINAS Toxinas – natureza química METABOLISMO SECUNDÁRIO TOXINAS - MICOTOXINAS Aflatoxinas - Aspergillus flavus e Aspergillus parasiticus - Propriedades carcinogênicas - Policetídeo derivado da acetil-CoA - Mínimo de 15 aflatoxinas conhecidas (B1, G2, G1, G2) Presença do fungo em amendoim e milho Conidióforo típico do gênero Aspergillus Policetídeos Compostos fenólicos Aflatoxin as METABOLISMO SECUNDÁRIO TOXINAS - MICOTOXINAS Presença do fungo em amendoim e milho Conidióforo típico do gênero Aspergillus METABOLISMO SECUNDÁRIO Os principais fungos produtores de micotoxinas são: Aspergillus sp. Penicillium sp. Fusarium sp. - Grande número de toxinas - Grande variedade de toxinas TOXINAS - MICOTOXINAS METABOLISMO SECUNDÁRIO PIGMENTOS - Não são essenciais para o crescimento do microrganismo - Estão associados com esporos, esporóforos ou estruturas relacionadas - Alguns são importantes na resistência dos esporos sob condições adversas - Alguns são importantes no ciclo de vida do microrganismo Policetídeos Compostos fenólicos MELANINAS METABOLISMO SECUNDÁRIO PIGMENTOS MELANINAS A produção das melaninas em fungos tem como precursor um aa essencial METABOLISMO SECUNDÁRIO PIGMENTOS Pigmentos em fungos Magnaporthe oryzae – Brusone do trigo e do arroz Melo, 2013 METABOLISMO SECUNDÁRIO PIGMENTOS Pigmentos em fungos Magnaporthe oryzae – Brusone do trigo e do arroz Melo, 2013 Apressório de M. oryzae revestido de melanina METABOLISMO SECUNDÁRIO PIGMENTOS Pigmentos em fungos Magnaporthe oryzae – Brusone do trigo e do arroz 1. Estirpe selvagem com melanina 2. Estirpe mutante, sem melanina 3. Estirpe mutante com melanina exógena (Alternaria sp.) 4. Estirpe não produtora de melanina 5. Estirpe mutante com melanina exógena (TBR-1) METABOLISMO SECUNDÁRIO PIGMENTOS Carotenoides - Compõem a maior parte dos pigmentos - Laranjas - Amarelos - Vermelhos - Terpenóides derivados de acetato, caminho do ácido mevalônico - Geralmente com 40 carbonos - A cor depende das ligações duplas nas moléculas METABOLISMO SECUNDÁRIO PIGMENTOS IMPORTÂNCIA Proteção das células – espécies reativas de oxigênio Carotenos: são precursores de hormônios sexuais em zigomicetos. METABOLISMO SECUNDÁRIO HORMÔNIOS Hormônios Sexuais - Indução de estruturas gaméticas - Quimiotaxia - Quimiotropismo Os hormônios são substâncias difusíveis que regulam o processo de “acasalamento” METABOLISMO SECUNDÁRIO HORMÔNIOS Hormônios Sexuais HORMÔNIO NATUREZA FUNGO FUNÇÃO Sirenina / Parasina Isoprenóide Allomyces Quimiotaxia Anteridiol / oogoniol Esteróis Achyla amisexualis Quimiotropismo / indução do gametângio / diferenciação de gametas Ácido trispórico Isoprenóide Mucor mucedo Indução do esporangióforo Fatores a, α Peptídeo Saccharomyces cerevisiae Formação de célula diploide (gemulação ilimitada) SIRENINA PARASINA METABOLISMO SECUNDÁRIO HORMÔNIOS Hormônios Sexuais METABOLISMO SECUNDÁRIO HORMÔNIOS Hormônios Sexuais Isoprenoides SIRENINA / PARASINA METABOLISMO SECUNDÁRIO Fatores que influenciam o metabolismo secundário - Enzimas frequentemente ausentes / inativas durante o crescimento vegetativo - Limitação de nutrientes com excesso de carbono (o carbono estimula) - Nitrogênio disponível (fácil assimilação – amônia) – inibe Outros fatores: Incubação, temperatura, fosfato, micronutrientes INFLUÊNCIA DE FATORES FÍSICOS NO METABOLISMO DE FUNGOS E BACTÉRIAS Temperatura Luminosidade/ Fotoperíodo Umidade Aeração pH E OS VÍRUS Os vírus não apresentam metabolismo próprio! OBRIGADO! thiagodemelo.uema@gmail.com