Diagnostico Laboratorial da Sifilis

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<p>Diagnóstico Laboratorial da Sífilis</p><p>Para o diagnóstico da sífilis podem-se utilizar os TESTES NÃO TREPONÊMICOS e os TREPONÊMICOS.</p><p>TESTES NÃO TREPONÊMICOS - São testes que detectam anticorpos não treponêmicos, anteriormente denominados</p><p>anticardiolipínicos, reagínicos ou lipoídicos. Esses anticorpos não são específicos para Treponema pallidum, porém estão</p><p>presentes na sífilis. Os TESTES NÃO TREPONÊMICOS podem ser:</p><p>- QUALITATIVO – rotineiramente utilizados como testes de triagem para determinar se uma amostra é reagente ou não;</p><p>- QUANTITATIVO – são utilizados para determinar o título dos anticorpos presentes nas amostras que tiveram resultado</p><p>reagente no teste qualitativo e para o monitoramento da resposta ao tratamento. O título é indicado pela última</p><p>diluição da amostra que ainda apresenta reatividade ou floculação visível.</p><p>Informação importantíssima: O fenômeno de prozona Trata-se da ausência de reatividade em uma amostra que,</p><p>embora contenha anticorpos não treponêmicos, apresenta resultado não reagente quando é testada sem diluir – ou</p><p>mesmo em baixas diluições. Esse fenômeno decorre da relação desproporcional entre as quantidades de antígenos e</p><p>anticorpos presentes na reação não treponêmica, gerando resultados falso-negativos. Ocorre nas amostras de</p><p>pessoas com sífilis, em virtude da elevada quantidade de anticorpos presentes.</p><p>TESTES TREPONÊMICOS - São testes que detectam anticorpos contra antígenos do Treponema pallidum. Estes</p><p>testes são qualitativos. Eles definem a presença ou ausência de anticorpos na amostra.</p><p>Exemplos de TESTES NÃO TREPONÊMICOS E TESTES</p><p>TREPONÊMICOS</p><p>TESTES NÃO TREPONÊMICOS - Floculação:</p><p>VDRL - LEVA O NOME DO LABORATÓRIO QUE O</p><p>DESCOBRIU – Laboratório de Pesquisa de</p><p>Doenças Venéreas);</p><p>RPR (Rapid Test Reagin);</p><p>USR (Unheated Serum Reagin);</p><p>TRUST (Toluidine Red Unheated Serum Test).</p><p>TESTES TREPONÊMICOS:</p><p>- Imunofluorescência indireta - FTA-abs (Imunofluorescência Indireta);</p><p>- Hemaglutinação indireta;</p><p>- Aglutinação de partículas;</p><p>- Imunoenzimáticos – ELISA;</p><p>- Testes rápidos – Imunocromatografia;</p><p>- PCR (Reação em Cadeia da Polimerase). Testes moleculares Reação de</p><p>amplificação do DNA da bactéria.</p><p>Reagente comercial vem com</p><p>esses antígenos que são</p><p>lipídeos cardiolipínicos .</p><p>TESTES NÃO TREPONÊMICOS - TESTE REAGENTE</p><p>A ligação de anticorpos em várias</p><p>micelas resulta na floculação, que</p><p>pode ser observada ao microscópio</p><p>Soro do paciente com Sífilis, o</p><p>paciente desenvolve anticorpos</p><p>contra os lipídeos cardiolpínicos</p><p>+</p><p>A presença da formação de floculação,</p><p>devido a interação antígeno-anticorpo,</p><p>indica a presença do anticorpo</p><p>não-treponêmico, paciente REAGENTE para</p><p>a Sífilis</p><p>TESTES NÃO TREPONÊMICOS - TESTE NÃO-REAGENTE</p><p>Reagente comercial vem com</p><p>esses antígenos que são</p><p>lipídeos cardiolipínicos .</p><p>Soro do paciente NÃO</p><p>APRESENTA ANTICORPOS</p><p>ANTI-CARDIOLIPÍNICO.</p><p>+</p><p>A AUSÊNCIA da formação de floculação,</p><p>devido a AUSÊNCIA DO ATICORPO,</p><p>PORTANTO, PACIENTE NÃO REAGENTE .</p><p>Placa de Kline para VDRL</p><p>Na placa de vidro, acima,</p><p>adiciona reagente comercial e</p><p>o soro, puro e diluído do</p><p>paciente, a quantidade,</p><p>diluição, vêm descritos na</p><p>bula.</p><p>Agitador para placa de Kline Microscópio no aumento de 10X</p><p>Ausência de floculação</p><p>NÃO REAGENTE</p><p>Presença de floculação</p><p>- REAGENTE-</p><p>TESTES NÃO TREPONÊMICOS QUANTITATIVOS</p><p>São utilizados para determinar o título dos anticorpos presentes nas amostras que tiveram resultado</p><p>reagente no teste qualitativo e para o monitoramento da resposta ao tratamento. O título é indicado pela</p><p>última diluição da amostra que ainda apresenta reatividade ou floculação visível.</p><p>PRIMEIRAMENTE, vamos rever como realiza uma diluição seriada do soro do paciente, por exemplo.</p><p>Materiais necessários: pipetas, tubos de ensaio (tubo de hemólise), soro fisiológico ou diluente que vem no kit</p><p>do diagnóstico, estante para tubos de ensaio, caneta para marcar os tubos.</p><p>1º Identificar os tubos para realizar a diluição:</p><p>Tubo 1 – diluição ½</p><p>Tubo 2 – diluição ¼</p><p>Tubo 3 – diluição 1/8</p><p>E assim, sucessivamente... Conforme a figura</p><p>ao lado</p><p>2º Adicionar, como por exemplo, acima, 120uL de diluente em todos</p><p>tubos;</p><p>3º Pipetar 120uL da amostra de soro no tubo ½, em seguida,</p><p>4º Pipetar 120uL do tubo contendo a diluição ½, no tubo ¼, em</p><p>seguida, 120uL do tubo ¼ para o tubo 1/8, em seguida, 120uL do tubo</p><p>1/8 para o tubo 1/16 e ai até o ultimo tubo.Pode utilizar 11 (onze) tubos</p><p>Após a diluição, vamos testar essas diluições (próximo slide)</p><p>Após a diluição, vamos testá-las na placa de Kline</p><p>Identificar cada poço da placa com a diluição</p><p>correspondente, adicionar, por exemplo, 50uL de</p><p>cada diluição nos poços correspondentes, e,</p><p>adicionar o reagente comercial em todos os poços</p><p>(100uL, por exemplo).</p><p>1/4</p><p>1/2</p><p>1/161/8</p><p>1/32</p><p>1/128</p><p>1/64</p><p>1/64</p><p>1/2</p><p>1/4 1/8 1/16</p><p>1/32</p><p>1/128</p><p>Observando no microscópio, verificou-se</p><p>que a última diluição que houve</p><p>aglutinação foi 1/64, portanto, isso</p><p>indica que a detecção de anticorpo do</p><p>paciente foi até 1/64</p><p>Diluição: 1/64,</p><p>No laudo liberar o título, título: 64</p><p>reagente</p>