aula 3 - introducao ao laboratorio de imunologia

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<p>Profa. Dra. Isabela Vasconcelos</p><p>INTRODUÇÃO AO</p><p>LABORATÓRIO DE</p><p>IMUNOLOGIA CLÍNICA</p><p>SOROLOGIA</p><p>Imunologia e Sorologia:-</p><p>Imunologia é o ramo da biologia que estuda o sistema imune.</p><p>• Funcionamento do sistema imune de um indivíduo no</p><p>estado sadio ou não.</p><p>•Características físicas, químicas e fisiológicas dos</p><p>componentes do sistema imune.</p><p>• Principais preparações an,gênicas</p><p>usadasem a,vidades experimentais</p><p>em imunologia:</p><p>• An9genos par,culados: apresentam</p><p>dimensão de uma célula e, ao se adicionar um</p><p>diluente apropriado, forma-se uma</p><p>suspensão. Ex: bactérias e células eucariontes,</p><p>comohemácias (carneiro,galinha).</p><p>• An9genos solúveis: apresentam dimensão</p><p>de macro-molécula e, ao se adicionar um</p><p>diluente apropriado, forma-se uma</p><p>solução. Ex: proteínas (ovoalbumina,</p><p>gamaglobulina)e polissacarídeos.</p><p>Tipos dediluentes:-</p><p>•Solução Salina (NaCl 0,15 M)</p><p>•PBSou Tampão Fosfato com Salina (NaCl a 0,15M e</p><p>Fosfatos Ácido e Básico de Sódio a 0,04 M)</p><p>Sangue colhido</p><p>c/ anticoagulante</p><p>e s/ centrifugar</p><p>Sangue colhido</p><p>c/ anticoagulante</p><p>e centrifugado p/</p><p>separar a fração</p><p>líquida do</p><p>sobrenadante</p><p>Sangue colhido</p><p>s/ anticoagulante</p><p>e depois de</p><p>coagulado é</p><p>centrifugado</p><p>•PLASMA é o sobrenadante obtido após a centrifugação do sangue total, colhido em tubo</p><p>com anticoagulante.</p><p>•Os anticoagulantes mais utilizados no laboratório clínico são : heparina, EDTA e Citrato</p><p>de sódio.</p><p>•A heparina previne a coagulação pois liga-se à trombina, já o EDTA e o Citrato ligam-se</p><p>ao Ca²+ e Mg²+ , cuja interferência se dá nas enzimas cálcio e magnésio-dependentes</p><p>envolvidas na cascata de coagulação.</p><p>•O citrato é utilizado em coletas de sangue para transfusão.</p><p>•SORO é o sobrenadante obtido após coleta de sangue total e deixado para coagulação</p><p>espontânea (que leva de 30 a 45 minutos) . Durante o processo de coagulação , o</p><p>fibrinogênio é convertido em fibrina, é a clivagem proteolítica da trombina, e a sua maior</p><p>diferença entre plasma e soro é a ausência de fibrinogênio nosoro.</p><p>SOROLOGIA</p><p>SOROLOGIA</p><p>SOROLOGIA</p><p>SORO HETERÓLOGO</p><p>SOROLOGIA</p><p>SORO HOMÓLOGO</p><p>SOROLOGIA</p><p>SOROLOGIA</p><p>SOROLOGIA</p><p>Doenças diagnosticadas por técnicas imunológicos a</p><p>partir do soro (+ frequente), do plasma (- frequente) ou do</p><p>sangue total (- frequente):-</p><p>•Doenças Infecciosas</p><p>•Doenças autoimunes</p><p>•Reações de Hipersensibilidade (Alergias)</p><p>•Seleção de doadores de sangue (Imuno-hematologia)</p><p>•Seleção de doadores de órgãos ou tecidos para transplantes</p><p>SOROLOGIA</p><p>Exames e técnicas laboratoriais para a detecção de anticorpos</p><p>(+frequente) ou de antígenos (-frequente).</p><p>•ELISA (Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay) – cinomose, peste</p><p>suína clássica, toxoplasmose, etc.</p><p>•Reação de Imunofluorescência (RIF) – leishmaniose, toxoplasmose,</p><p>leptospirose, etc.</p><p>•Látex – Aglutinação – Detecção de Fator Reumatóide, Proteína C</p><p>Reativa, rotavirus, coronavirus, etc.</p><p>•Rádio-Imuno-Ensaio – Dosagem de hormônios.</p><p>Técnica de Diluições Seriadas</p><p>Importância – permitir a determinação das quantidades relativas</p><p>de anticorpos em testes sorológicos</p><p>Técnica de diluiçõesseriadas:</p><p>-Séries com razão constante e diluições sucessivas.</p><p>-Nesta técnica, transferem-se volumes sucessivamente de um tubo para outro seguinte,</p><p>ao qual se adicionou quantidade adequada de diluente.</p><p>Exemplo 1. Diluições sucessivas com razão constante igual a 2:-</p><p>1) Distribuir numa série de tubos com 1 ml de diluente.</p><p>2) Ao tubo 1 adicionar 1 ml do material.</p><p>3) Transferir 1 ml do tubo 1 para o tubo 2.</p><p>4) Transferir 1 ml do tubo 2 para o tubo 3.</p><p>5) Prosseguir da mesma maneira até o último tubo da série.</p><p>Ao final as diluições obtidas serão: 1:2; 1:4; 1:8; 1:l6; 1:32; 1:64</p><p>Exemplo 2. Diluições sucessivas com razão constante igual a 10:-</p><p>1) Distribuir 0,9ml de diluente numa série de tubos.</p><p>2) Ao tubo 1 adicionar 0,1 ml do material não diluído.</p><p>3) Transferir 0,1 ml do tubo 1 para o tubo 2.</p><p>4) Transferir 0,1 ml do tubo 2 para o tubo 3.</p><p>5) Prosseguir da mesma maneira até o último tubo da série.</p><p>As diluições obtidas serão: 1:10; 1:100; 1:1000; 1:10.000; e 1:100.000.</p><p>Exercício:</p><p>1.Como você faz para diluir um soro a 1/2;1/4;1/8;1/16 e 1/32?</p><p>2. Qual das preparações antigênicas abaixo será usada para a obtenção</p><p>de soros:</p><p>a) Precipitantes</p><p>b) Aglutinantes</p><p>3. Qual(is) a(s) principal(is) finalidade(s) de se fazer uma escala de</p><p>diluições seriadas?</p><p>4. O que são:</p><p>a) Solução anti-coagulante b) Solução salina d) Soro</p><p>c) Plasma e) Solução salina tamponada</p>