relatorio unidade I microbiologia

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<p>UNIVERSIDADE ESTADUAL DA PARAÍBA</p><p>CAMPUS I</p><p>CENTRO DE CIÊNCIAS E TECNOLOGIAS-CCT</p><p>DEPARTAMENTO DE QUÍMICA</p><p>CURSO DE GRADUAÇÃO EM QUÍMICA INDUSTRIAL</p><p>LAB. MICROBIOLOGIA PROF: HELVIA WALEWSKA</p><p>RELATÓRIO UNIDADE I</p><p>TATIANA PORTO SANTOS</p><p>CAMPINA GRANDE</p><p>2024</p><p>OBJETIVO</p><p>Relatar em sequência o que foi visto e praticado em laboratório sobre segurança,</p><p>manuseio e técnicas de esterilização e cultivo de material biológico, de forma que ao</p><p>final da unidade tenhamos boas práticas e noções básicas de como funcionam e se</p><p>comportam os microrganismos que nos cercam.</p><p>INTRODUÇÃO</p><p>O laboratório de microbiologia tem papel fundamental nos sistemas de qualidade de</p><p>produtos industrializados. Para o desempenho adequado deve contar com estrutura,</p><p>equipamentos e pessoal treinado em procedimentos específicos. Este curso</p><p>apresenta os aspectos imprescindíveis para o laboratório garantir a qualidade de</p><p>seus resultados.</p><p>REGRAS DE CONDUTA EM LABORATÓRIO</p><p>Na primeira aula foi abordado as técnicas básicas em microbiologia e segurança</p><p>laboratorial, dessa forma foi apresentado as metodologias e princípios usados no</p><p>laboratório de microbiologia, reforçando conceitos teóricos. Desta forma, é essencial</p><p>observar normas de segurança no laboratório, para evitar principalmente</p><p>contaminações aos alunos, e impedir a contaminação dos dispositivos</p><p>experimentais por microrganismos do meio ambiente ao estudo.</p><p>O laboratório é um lugar que pode ter o seu poder de risco de acidentes</p><p>diminuído desde que certas regras de conduta e segurança sejam obedecidas tais</p><p>como :</p><p>● Não comer, beber ou fumar dentro do laboratório;</p><p>● O uso do avental de algodão é obrigatório;</p><p>● Trabalhar sempre de maneira organizada, tranqüila, constante e metódica,</p><p>evitando movimentos desnecessários como trocar de lugar, assento, etc;</p><p>● As mesas ou bancadas de trabalho devem ter superfície lisa, de fácil limpeza</p><p>e de desinfecção Quando da manipulação de material tóxico ou infectante;</p><p>● O material a ser trabalhado deve ser tocado exclusivamente com</p><p>instrumentos esterilizados e nunca com as mãos.</p><p>● ter o cuidado de não cheirar os meios de cultura inoculados;</p><p>● Sempre ta utilizando o bico de Bunsen, entre o material e o analista;</p><p>● As pipetas usadas devem ser colocadas horizontalmente em solução</p><p>desinfetante imediatamente após o uso, antes de se proceder a sua limpeza</p><p>e esterilização;</p><p>● Não colocar materiais contaminados sobre a bancada. Esses materiais</p><p>devem ser colocados em recipientes apropriados e esterilizados em</p><p>autoclave;</p><p>● Cuidado ao acender o bico de gás (bico de Bunsen).Verificar se não existem</p><p>substâncias inflamáveis por perto;</p><p>● Flambar alças, agulhas e pinças antes e após o uso;</p><p>● Todo o material deve ser identificado. As etiquetas devem ser autoadesivas;</p><p>● Todo material contaminado (pipetas, bastões, lâminas, lamínulas etc.), deverá</p><p>ser colocado em recipientes adequados (provetas, cubas, ou vidros com</p><p>desinfetantes), para serem esterilizados posteriormente; nunca deixá-los</p><p>sobre a mesa de trabalho ou pia.</p><p>ESTERILIZAÇÃO DE MATERIAL</p><p>Foi abordado e feito em prática também como preparar os materiais</p><p>utilizados em análises microbiológicas, um dos fatores mais cruciais para o</p><p>laboratório de microbiologia é evitar a contaminação do material que se está</p><p>trabalhando, para isso existem métodos de esterilização para evitar a</p><p>contaminação do material, alguns métodos como uso de álcool 70%, estufa,</p><p>autoclave e entre outros. Foi feito as rolhas de algodão que são utilizadas</p><p>para o vedamento de tubos e frascos em microbiologia. O algodão utilizado</p><p>foi o hidrófobo (não absorvente). Para se preparar uma rolha, cortou-se um</p><p>quadrado pequeno de algodão, dobrando-se no lado oposto para fazer um</p><p>retângulo e enrolou-se formando um cilindro justo. A rolha deve ficar</p><p>ajustadamente, devendo estar ⅓ para fora da boca do tubo. A fim de se</p><p>proteger a rolha de algodão permitindo sua facilitação na utilização. Em</p><p>seguida realizamos a cobertura das pipetas e das placas de petri com o papel</p><p>Kraft e fixada com fita adesiva tipo crepe da forma que fomos orientados, e</p><p>assim prontas para serem esterilizadas na autoclave a 121 °C, por 30 min ou</p><p>em estufa a 170 °C – 180 °C por 2 horas. E após identificar o material com</p><p>data de esterilização e prova de esterilização.</p><p>PREPARAÇÃO DOS MEIOS DE CULTURA</p><p>A utilização dos meios de cultura é muito importante na identificação de</p><p>micro-organismos que provocam, por exemplo, infecções e alergias nos</p><p>seres humanos e contaminações em alimentos e água. É através deste</p><p>procedimento, que a bactéria causadora é identificada. Existem diversos</p><p>tipos de meios de cultura, e variadas especificidades. Os meios de cultura</p><p>mais utilizados em laboratórios, na identificação e cultivo de microorganismos</p><p>são os meios de Cultura Agar Nutriente utilizados no cultivo de</p><p>microrganismos exigentes, para a realização de isolamento e contagem de</p><p>leveduras e bolores e entre outros.</p><p>Realizamos a preparação desses meios que é bastante simples consistindo</p><p>basicamente em dissolvê-lo como uma gelatina e distribuir nos tubos ou</p><p>placas de petri que serão usados. Porém, alguns cuidados gerais devem ser</p><p>usados para o preparo e validação dos meios de cultura. Primeiramente foi</p><p>pesado o ágar (pó) colocado em um béquer ou erlenmeyer com capacidade</p><p>maior do que o volume que será usado, por exemplo, se for preparar um</p><p>meio de 100 ml usar um erlenmeyer de 250 ml. Mediu-se o volume de água</p><p>destilada necessário em uma proveta. A adição da água no meio deve ser</p><p>realizada colocando-se primeiro uma pequena quantidade de água até que o</p><p>meio fique úmido e depois acrescentar o restante devagar. Homogeneizar o</p><p>meio agitando o frasco devagar, com movimentos circulares. Em seguida</p><p>aquecer o frasco em bico de bunsen, sobre uma tela de amianto, agitando</p><p>constantemente. O meio não deve chegar à fervura, deve apenas ser</p><p>aquecido até se fundir completamente. Os meios para diagnóstico</p><p>microbiológico passam por algum processo de esterilização antes do uso. E</p><p>foi para a autoclave, por 15 minutos a 121ºC. A distribuição dos meios em</p><p>tubos ou placas pode ser feita antes ou depois da esterilização. Se for feita</p><p>antes, as placas podem ser não estéreis, se for depois é preciso usar placas</p><p>já esterilizadas. Se for feita a autoclavação do meio, tanto distribuído em</p><p>placas, tubos ou em maior quantidade, deve ser feita com o recipiente</p><p>semiaberto para a esterilização completa e por igual.</p><p>PRESENÇA DE MICRORGANISMOS NO AMBIENTE</p><p>Foi realizada essa prática com o objetivo de reconhecer materiais,</p><p>equipamentos e normas do laboratório de microbiologia e averiguar a</p><p>presença de microrganismos no ar condicionado , averiguar o efeito da</p><p>higienização das mãos, e a presença de microorganismos na respiração e no</p><p>calçado. Foi realizada a coleta das amostras e colocadas em placas de Petri</p><p>contendo o meio de cultura (ágar nutriente). Em seguida foi Identificadas as</p><p>placas, anotando na tampa o tipo de exposição a que foram submetidas, com</p><p>nome do aluno. Incubadas na posição invertida à temperatura de 35ºC</p><p>durante 48 horas. E na aula seguinte foram avaliadas a presença de colônias,</p><p>sua abundância e diversidade.</p><p>IDENTIFICAÇÃO DE BACTÉRIAS TÉCNICA DE COLORAÇÃO DE GRAM</p><p>O Método consiste no tratamento de uma amostra de uma cultura bacteriana</p><p>crescida em meio sólido ou líquido, foi preparado a amostra na lâmina de</p><p>vidro, as placas de Petri são abertas próximo ao bico de Bunsen, para evitar</p><p>contaminação com germes do ar, flambar a alça de platina durante o</p><p>processo, após dissolvida na lâmina e a secagem, foi adicionado um corante</p><p>primário, o cristal violeta e lavado com água destilada e aguardou-se um</p><p>minuto, em seguida adicionado o fixador, o lugol. Tanto bactérias</p><p>Gram-positivas quanto Gram-negativas absorvem de maneira idêntica o</p><p>corante primário e o fixador, adquirindo uma coloração violeta devido à</p><p>formação de um complexo cristal violeta-iodo, insolúvel, em seus</p><p>citoplasmas. Após lavou-se a amostra com água destilada, em seguida</p><p>segue-se</p><p>um tratamento com um solvente orgânico, o etanol-acetona (1:1</p><p>v:v). O solvente dissolve a porção lipídica das membranas externas das</p><p>bactérias Gram-negativas e o complexo cristal violeta-iodo é removido,</p><p>descorando as células. Por outro lado, o solvente desidrata as espessas</p><p>paredes celulares das bactérias Gram-positivas e provoca a contração dos</p><p>poros do peptidoglicano, tornando-as impermeáveis ao complexo; o corante</p><p>primário é retido e as células permanecem coradas. A etapa da descoloração</p><p>é crítica, pois a exposição prolongada ao solvente provoca a remoção do</p><p>cristal violeta dos dois tipos de bactérias, podendo produzir resultados falsos.</p><p>Em seguida, é adicionado na amostra um corante secundário, a safranina. E</p><p>em seguida lavada novamente com água destilada e aguardou-se a secagem</p><p>para ser observado em microscópio, as células Gram-positivas que aparecem</p><p>coradas em violeta escuro e as Gram-negativas em vermelho ou rosa escuro.</p><p>Células de bactérias Gram-positivas, células velhas, mortas ou com</p><p>envelopes danificados por agentes físicos ou químicos, tendem a perder o</p><p>cristal violeta e uma mesma amostra bacteriana pode exibir parte ou todas as</p><p>células coradas como Gram-negativas.</p><p>Nessa mesma prática foi visto como preparar e observar no microscópio, o</p><p>microscópio óptico é constituído de um sistema de lentes e de um suporte</p><p>mecânico, cada um dos quais apresentando várias partes, como mostra a</p><p>figura abaixo.</p><p>CONCLUSÃO</p><p>Ao fim das práticas do primeiro módulos é possível se ter noção do quanto as</p><p>análises microbiológicas podem ser diversas e complexas, justamente devido</p><p>a variedade exorbitante de microrganismos distintos e complexos que exigem</p><p>cuidados específicos para seu manuseio, estas técnicas descritas neste</p><p>relatório são uma pequena parte da inúmeras outras mais completas para</p><p>identificação de organismos mais perigosos que exijam experiência e cuidado</p><p>com seu manuseio. Contudo, ao final do módulo fomos capazes de preparar,</p><p>cultivar e identificar bactérias em meio de cultura, uma vez que na indústria</p><p>alimentícia por exemplo, tratar no controle de microrganismos pode ser</p><p>extremamente importante, e estas técnicas são apenas o básico dos métodos</p><p>utilizados atualmente.</p>