Pratica microscopio

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<p>MICROBIOLOGIA GERAL- PROF CRISTIANE</p><p>MICROSCOPIA: CONHECENDO E MANUSEANDO O MICROSCÓPIO –</p><p>1. INTRODUÇÃO:</p><p>A palavra microscópio é de origem grega e significa micros, pequeno e scopein, observar, olhar com atenção. O</p><p>olho humano é incapaz de perceber um objeto com um diâmetro menor que 0,1 mm, a uma distância de 25cm. As</p><p>células vivas são em geral, bem menores que 0,1 mm. Portanto o advento do microscópio, pelo holandês Antonie van</p><p>Leuwenhoek, foi o marco inicial para o conhecimento da existência de um mundo de micróbios. O microscópio óptico é</p><p>um composto formado por dois sistemas de lentes. O sistema de lentes próximo ao olho do observador chama-se ocular</p><p>e o outro, montado no final do tubo, chama-se objetiva. A ampliação total do microscópio é o produto das ampliações</p><p>por cada sistema de lentes individualmente. A ampliação varia de 1000 a 2000 vezes. A imagem final do objeto,</p><p>proporcionada pelo microscópio será virtual, ampliada e invertida em relação ao mesmo.</p><p>2. OBJETIVOS:</p><p>▪ Identificar os componentes do microscópio;</p><p>▪ Correlacionar cada componente do microscópio a sua função;</p><p>▪ Manusear corretamente o microscópio óptico;</p><p>3. DESCRIÇÃO DO MICROSCÓPIO</p><p>Partes mecânicas</p><p>Pé: base do aparelho suporta todas as outras partes.</p><p>Braço: preso ao pé, rígido ou articulado, suporta o canhão, a platina, o condensador e o espelho ou fonte luminosa.</p><p>Canhão: é o tubo onde se dispõem as partes óticas de ampliação, pode ser fixo ao braço ou possuir movimento vertical.</p><p>Revólver: é uma peça giratória onde se conectam as objetivas e que permite a instantânea mudança das mesmas.</p><p>Platina: é a mesa de trabalho, onde se coloca a preparação para exame, possui uma abertura central que dá passagem à</p><p>luz proveniente da fonte, pode ser fixa ao braço, ou possuir movimento vertical.</p><p>Charriot: é um dispositivo preso à platina, dotado de movimento antero-posterior e lateral, destinado a movimentar a</p><p>preparação.</p><p>Parafuso macrométrico: é um dispositivo destinado a dar grandes e rápidos deslocamentos verticais ao canhão ou à</p><p>platina, serve para focalização grosseira.</p><p>Parafuso micrométrico: é um dispositivo destinado a dar pequenos e lentos deslocamentos ao canhão ou platina, serve</p><p>para focalização fina.</p><p>Sistema de Iluminação</p><p>Espelho ou fonte de luz direta: preso à parte inferior do braço, refletindo ou projetando a luz para a parte inferior do</p><p>condensador.</p><p>Diafragma ou íris: colocado sob o condensador, destinado a restringir o diâmetro de feixe luminoso.</p><p>Condensador: é um sistema ótico de refração, preso à parte inferior do braço sob a platina, destinado a fazer uma</p><p>preparação da luz proveniente da fonte.</p><p>Sistema de ampliação</p><p>Objetiva</p><p>Ocular</p><p>CUIDADOS COM O MICROSCÓPIO !!!</p><p>O microscópio é um instrumento de precisão feito com material valioso. Havendo cuidado por parte de quem</p><p>usa, ele durará longo tempo, mas um pouco de negligência poderá levar a danificá-lo. Portanto, use-o com carinho e</p><p>zelo. O microscópio deve estar sempre com uma capa para evitar acúmulo de pó. Essa capa deve ter microporos para</p><p>inviabilizar a multiplicação de fungos. Manter a capa limpa. Deve ser movimentado levantando pelo e braço e nunca</p><p>arrastando sob a bancada.</p><p>As objetivas devem ser limpas com papel filtro macio para que não risque a lente, embebido numa mistura de</p><p>70% etanol + 30% de éter, não inundar a lente!!!. Usar apenas éter para limpar o óleo de imersão, o álcool criará um</p><p>aspecto fosco na lente. Nunca troque peças do seu microscópio por outras de outro microscópio e não desmontar as</p><p>oculares e objetivas. Nunca tente fazer consertos no seu microscópio. Isto exige pessoa qualificada.</p><p>3.1 PROCEDIMENTO A:</p><p>a) Identifique na gravura abaixo os componentes do microscópio óptico com suas respectivas funções.</p><p>.</p><p>4. FORMAÇÃO DA IMAGEM: SEQUÊNCIA PARA USO CORRETO E FOCALIZAÇÃO DO</p><p>MICROSCÓPIO</p><p>Objetiva a seco</p><p>• Abrir o diafragma</p><p>• Colocar a objetiva de 10x em posição de uso</p><p>• Orientar a lâmina para o centro do orifício da mesa ou platina</p><p>• Ajustar o espelho ou a lâmpada de modo a observar a luz passando da lâmina, quando olhar lateralmente.</p><p>• Afastar a objetiva, usando o parafuso macrométrico, enquanto se observa pela ocular. O objeto ficará em</p><p>foco, em determinada altura da objetiva em relação à lâmina.</p><p>• Regular a luz através do diafragma e condensador.</p><p>• Mover a objetiva de 40 para a posição de uso.</p><p>• Reajustar a iluminação.</p><p>Objetiva de imersão</p><p>• Colocar a lâmina preparada sobre a mesa ou platina do microscópio.</p><p>• Por a objetiva de imersão na posição de uso</p><p>• Depositar uma gota de óleo de imersão sobre a preparação corada</p><p>• Com cuidado, olhando lateralmente, aproximar lentamente a objetiva até imergi-la suavemente na gota do</p><p>óleo.</p><p>• Olhando pela ocular e movendo vagarosamente o parafuso macrométrico, afastar lentamente a objetiva da</p><p>lâmina. Caso não consiga focalizar, tente novamente, pois a profundidade do foco é muito pequena.</p><p>• Focalizar sempre afastando a objetiva da preparação, pois desse modo, jamais quebrará a lâmina, nem</p><p>danificará o microscópio</p><p>• Usar o parafuso micrométrico para ajuste fino.</p><p>• Após focalizar nitidamente, com uma mão no “charriot” e a outra no parafuso micrométrico, examinar</p><p>vários campos de preparação.</p><p>• Após a observação da lâmina, removê-la da mesa do microscópio e colocá-la num recipiente com</p><p>detergente.</p><p>7</p><p>8</p><p>9</p><p>10</p><p>6</p><p>5</p><p>4</p><p>3</p><p>2</p><p>1</p><p>11</p><p>12</p><p>• Remover o óleo de imersão da objetiva, utilizando um papel fino e absorvente, apropriado, em seguida,</p><p>usando um solvente, retirar o excesso do óleo residual para, finalmente, com um papel seco, remover o resto</p><p>do solvente.</p><p>• Terminado o trabalho, desligar a lâmpada do microscópio, deixando o aparelho do mesmo modo em que o</p><p>encontrou.</p><p>COLORAÇÃO DE GRAM</p><p>Figura 1 Figura 2 Figura 3</p><p>Coloração de Gram</p><p>Etapas da Coloração O que está acontecendo na parede da bactéria?</p><p>Cobrir o esfregaço com solução de Cristal Violeta por</p><p>cerca de 1 minuto</p><p>.</p><p>O Cristal Violeta penetra a parede de ambos os</p><p>tipos de células (Gram + e Gram -)</p><p>A seguir, lavar em água corrente com o pissete.</p><p>A lavagem com água é importante após cada etapa</p><p>para que uma substância utilizada não interfira na</p><p>ação da próxima.</p><p>Cobrir o esfregaço com solução de Lugol fraco por</p><p>cerca de 1 minuto.</p><p>O Lugol é uma solução de Iodo e funciona como</p><p>mordente neta etapa da coloração, ou seja, ele fixa o</p><p>corante Cristal Violeta na parede da célula, pois forma</p><p>um complexo grande: o CV-I</p><p>Novamente lavar com água, e então lavar com álcool</p><p>absoluto até que não saia mais corante da lâmina (10 –</p><p>15 segundos).</p><p>O álcool absoluto, ou solução de álcool-acetona,</p><p>funciona como diferenciador da coloração: è nas</p><p>Gram +, o álcool desidrata a matriz glicoproteica</p><p>(peptidoglicano), reduzindo os poros da parede e</p><p>impedindo a saída do complexo CV-I, corando a</p><p>célula de roxo:</p><p>nas Gram -, o álcool dissolve a membrana externa, de</p><p>caráter lipídico (lipoproteínas, fosfolipídeos, LPS),</p><p>fazendo com que o complexo CV-I saia da parede,</p><p>deixando a célula descorada e com os poros da matriz</p><p>glicoproteica abertos:</p><p>Lavar com água corrente em abundância para que não</p><p>reste álcool sobre a lâmina.</p><p>É importante prestar com bastante atenção nesta etapa,</p><p>pois se restar algum álcool na lâmina a coloração não</p><p>prosseguirá, já que o próximo corante não se fixará na</p><p>lâmina.</p><p>Cobrir o esfregaço com fucsina por cerca de 30</p><p>segundos.</p><p>A fucsina age de diferentes formas nas diferentes</p><p>células: è nas Gram +, os poros estão reduzidos,</p><p>impedindo que a fucsina penetre na parede celular,</p><p>não alterando a cor roxa:</p><p>nas Gram -, os poros da camada de peptidoglicano</p><p>estão abertos, permitindo que a fucsina penetre na</p><p>célula, corando-as de vermelho:</p><p>Lavar com água e secar suavemente com papel.</p><p>Após secar suavemente a lâmina,</p><p>observar ao</p><p>microscópio na objetiva de imersão (100x), com óleo</p><p>de cedro/mineral e identificar a célula corada.</p><p>1. Em que se baseia o método da coloração de Gram?</p><p>2. Por que o álcool é considerado como agente diferenciador da coloração de Gram?</p><p>3. Qual é o papel do mordente (lugol)?</p>