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620 QUESTÕES DE BIOLOGIA... COM COMENTÁRIO E RESOLUÇÃO! graças à divisão celular, um grande número de células idênticas (clones), cada uma dotada de várias cópias do DNA recombinante. A clonagem gênica, como se pode constatar é utilizada pelos cientistas para gerar múltiplas cópias de determinado gene, pelo qual haja algum tipo de interesse. Uma clonagem de genes envolve cinco componentes principais, relacionados a seguir. I. DNA doador (inserto): fonte do gene a ser clonado. II. Endonuclease de restrição (tesoura genética): enzima usada para cortar o DNA doador e o DNA do vetor em locais específicos, de modo que o gene a ser clonado possa ser inserido no vetor. As enzimas de restrição fazem parte do mecanismo de defesa das bactérias. Atuando como “tesouras moleculares”, elas cortam o DNA viral dos bacteriófagos (vírus que atacam bactérias), também conhecidos como fagos em diferentes pedaços, inativando-o (figura abaixo). São conhecidas, atualmente, centenas dessas enzimas entre as quais citamos: Bam HI (Bacillus amyloliquefaciens H), Eco RI (Escherichia coli RY 13), Hind III (Haemophilus influenzae Rd), Aha III (Aphanothece halophytica), Hae III (Haemophilus aegypitius) e Taq I (Thermus aquaticus YTI) [denominações derivadas das fontes bacterianas]. Elas são isoladas das bactérias, comercializadas por grandes empresas da área de Biologia Molecular e cortam o DNA dentro de uma sequência específica de 4 a 8 pares de bases (pb), denominada sequência de reconhecimento (sítio de restrição). Dessa forma, moléculas idênticas de DNA, quando tratadas com determinada endonuclease de restrição, são cortadas nos mesmos pontos, gerando fragmentos de mesmo tamanho, com duas extremidades adesivas. Os três pesquisadores (Werner Arber, Daniel Nathans e Hamilton Smith) que elucidaram o mecanismo de ação das endonucleases de restrição, receberam o Prêmio Nobel de Medicina em 1978. III. Vetor de clonagem: plasmídio ou “cromossomo” de bacteriófago usado para introduzir o gene a ser clonado numa célula hospedeira apropriada. IV. DNA ligase: enzima usada para unir as extremidades livres e adaptáveis (coesivas, adesivas ou “pegajosas”) do DNA do vetor e do DNA doador, formando um vetor recombinante. V. Célula hospedeira: célula na qual o vetor recombinante é introduzido de modo a obter grandes quantidades da molécula de DNA recombinante. Geralmente é uma bactéria ou uma célula de levedura. - Para maiores detalhes ver CLONAGEM GÊNICA, matéria publicada, no dia 26/02/2011, no blog “djalmasantos.wordpress.com.” JUSTIFICATIVA - ALTERNATIVA A (“A transferência de qualquer gene de um organismo a outro produz variabilidade genética; daí, os transgênicos serem resistentes a pragas.”) – INCORRETA * A resistência à praga resulta da inserção de genes específicos capazes de gerar essa resistência e não da variabilidade genética em si. - ALTERNATIVA B (“Plasmídios virais são utilizados como vetores de genes de interesse que serão transferidos a um organismo.”) – INCORRETA * Plasmídios (ou plasmídeos) são pequenos DNAs circulares, de cadeia dupla e extracromossomiais, presentes em bactérias que veiculam informações genéticas. Embora possuam genes para a própria replicação, eles não são essenciais para a sobrevivência da